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1、1,2,第二章 分子發(fā)光分析,分子,吸收能量,激發(fā)為激發(fā)態(tài),釋放出能量,基態(tài),電能,化學(xué)能,光能,稱為“發(fā)光”,光的形式釋放,熒光,磷光,分子發(fā)光,光致發(fā)光,化學(xué)發(fā)光,輻射躍遷,非輻射躍遷,以熱的形式釋放,分子熒光分析法 一、基本原理 （一）熒光和磷光的產(chǎn)生 從分子結(jié)構(gòu)理論來討論,3,分子中電子 的能量狀態(tài),電子所處的能級(jí),振動(dòng)能級(jí),轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí),電子的多重態(tài),J=2S+1,S：為各電子自旋量子 數(shù)的代數(shù)和,S=0, J=1 單重態(tài)S表示,（所有電子都是自旋配對(duì)的）,S=1, J=3,三重態(tài) T表示,大多數(shù)基態(tài)分子都處于單重態(tài),電子在躍遷過程中伴隨著 自旋方向的變化（自旋平行）,4,基態(tài)單重態(tài)S,
2、激發(fā)態(tài)單重態(tài)S,激發(fā)態(tài)三重態(tài)T,激發(fā)單重態(tài)S與激發(fā)三重態(tài)T的不同點(diǎn)：, S是抗磁分子，T是順磁分子, tS = 10-8s, tT = 10-41s；(發(fā)光速度很慢), 基態(tài)單重態(tài)到激發(fā)單重態(tài)的激發(fā)為允許躍遷， 基態(tài)單重態(tài)到激發(fā)三重態(tài)的激發(fā)為禁阻躍遷；, 激發(fā)三重態(tài)的能量較激發(fā)單重態(tài)的能量低,5,其中S0、S1和S2分別表示分子的基態(tài)、第一和第二電子激發(fā)的單重態(tài),T1和T2則分別表示分子的第一和第二電子激發(fā)的三重態(tài)。,V=0、1、2、3、表示基態(tài)和激發(fā)態(tài)的振動(dòng)能級(jí)。,2分子內(nèi)的光物理過程,6,振動(dòng)弛豫:,在同一電子能級(jí)中，電子由高振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn)至低振動(dòng)能級(jí)，而將多余的能量以熱 的形式發(fā)出。發(fā)生振動(dòng)
3、弛豫的時(shí)間為10-12s數(shù)量級(jí)。,非輻射能量傳遞過程；,7,內(nèi)轉(zhuǎn)移: 當(dāng)兩個(gè)電子能級(jí)非?？拷灾疗湔駝?dòng)能級(jí)有重 疊時(shí)， 常發(fā)生電子由高能級(jí)以無輻射躍遷方式轉(zhuǎn)移至低能級(jí)。（S1 轉(zhuǎn)移 S2）,8,系間竄躍: 指不同多重態(tài)間的無輻射躍遷， 例如S1T1就是一種系間竄躍。 通常，發(fā)生系間竄躍時(shí)，電子由S1的較低振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn)移至T1的較高振動(dòng)能級(jí)處。,9,輻射能量傳遞過程,熒光發(fā)射:,電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)基態(tài),得到最大波長為3的熒光,由圖可見，發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小,3 2 1,10,磷光發(fā)射: 電子由基態(tài)單重態(tài)激發(fā)至第一激發(fā)三重態(tài)的幾率很小，因?yàn)檫@是禁阻躍遷。 但是，由第一激發(fā)
4、單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，有可能以系間竄躍方式轉(zhuǎn)至第一激發(fā)三重態(tài)，再經(jīng)過振動(dòng)馳豫，轉(zhuǎn)至其最低振動(dòng)能級(jí)，由此激發(fā)態(tài)躍回至基態(tài)時(shí)，便發(fā)射磷光， 這個(gè)躍遷過程（T1S0）也是自旋禁阻的，其發(fā)光速率較慢，約為10-4-10s。因此，這種躍遷所發(fā)射的光，在光照停止后，仍可持續(xù)一段時(shí)間。,外轉(zhuǎn)移 指激發(fā)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子 的相互作用及能量轉(zhuǎn)移，使熒光或磷光強(qiáng) 度減弱甚至消失。這一現(xiàn)象稱為“熄滅”或“猝滅”。 熒光與磷光的根本區(qū)別：,11,磷光是由激發(fā)三重態(tài)最低振動(dòng)能層至基態(tài),熒光是由激發(fā)單重態(tài)最低振動(dòng)能層至基態(tài),區(qū)別,(二 )熒光的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 激發(fā)光譜:(ex) 以不同波長的入射光激發(fā)熒光物
5、質(zhì),在熒 光最強(qiáng)的波長處測(cè)量熒光強(qiáng)度 即以激發(fā)光波長為橫坐標(biāo),以熒光強(qiáng)度為 縱坐標(biāo)繪制曲線即可得到激發(fā)光譜曲線。 發(fā)射光譜：(em) 固定激發(fā)光波長（最大） 然后測(cè)定不同的波長時(shí)所發(fā)射的熒光強(qiáng)度 即可繪制熒光發(fā)射光譜曲線,12,在熒光的產(chǎn)生過程中，由于存在各種形 式的無輻射躍遷，損失能量，所以它們的 最大發(fā)射波長都向長波方向移動(dòng)，以磷光 波長的移動(dòng)最多，而且它的強(qiáng)度也相對(duì)較 弱。,13,14,15,激發(fā)光譜與發(fā)射光譜的關(guān)系,a. Stokes位移,激發(fā)光譜與發(fā)射光譜之間的波長差值。發(fā)射光譜的波長比激發(fā)光譜的長，振動(dòng)弛豫消耗了能量。,b. 發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān),電子躍遷到不同激發(fā)態(tài)能級(jí)，
6、吸收不同波長的能量(如能級(jí)圖 2 , 1)，產(chǎn)生不同吸收帶，但均回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)再躍遷回到基態(tài)，產(chǎn)生波長一定的熒光,c. 鏡像規(guī)則,通常熒光發(fā)射光譜與它的吸收光譜（與激發(fā)光譜形狀一樣）成鏡像對(duì)稱關(guān)系。,（三）熒光的影響因素 分子產(chǎn)生熒光必須具備兩個(gè)條件： 分子必須具有與所照射的輻射頻率(紫外-可見光）相適應(yīng)的結(jié)構(gòu)（共軛雙鍵），才能吸收激發(fā)光； 吸收了與其本身特征頻率相同的能量之后，必須具有一定的熒光量子產(chǎn)率。,16,1.熒光效率 它表示物質(zhì)發(fā)射熒光的能力，通常用下 式表示,17,熒光效率越高；,物質(zhì)發(fā)射熒光越強(qiáng),kf為熒光發(fā)射過程的速率常數(shù)（與化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)）,ki為其它有關(guān)過程
7、的速率常數(shù)的總和（化學(xué)環(huán)境）,凡使kf 值升高而使ki值降低的因素，都可增強(qiáng)熒光。,2. 熒光與有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)的關(guān)系 （1）躍遷類型 實(shí)驗(yàn)證明，對(duì)于大多數(shù)熒光物質(zhì)，首先經(jīng)歷激發(fā)，然后經(jīng)過振動(dòng)弛豫或其他無輻射躍遷，再發(fā)生 躍遷而得到熒光。 （2）共軛效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)證明，容易實(shí)現(xiàn)激發(fā) 的芳香族化合物 容易發(fā)生熒光，增加體系的共軛度熒光效率一般 也將增大，主要是由于增大熒光物質(zhì)的摩爾吸光 系數(shù)，有利于產(chǎn)生更多的激發(fā)態(tài)分子,18,(3) 剛性平面結(jié)構(gòu) 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)具有剛性平面結(jié)構(gòu)的 有機(jī)分子具有強(qiáng)烈的熒光。 因?yàn)檫@種結(jié)構(gòu)可以減少分子的振動(dòng)， 使分子與溶劑或其它溶質(zhì)分子的相互作用 減少，也就減少了碰 撞去
8、活的可能性。,19,20,（4）取代基效應(yīng),芳環(huán)上 取代基,給電子基團(tuán)，熒光增強(qiáng),（-OH、-OR、-CN、-NH2）,產(chǎn)生了p-共軛作用，增強(qiáng)了電子共軛程度，使最低激發(fā)單重態(tài)與基態(tài)之間的躍遷幾率增大。,吸電子基團(tuán),減弱甚至?xí)鐭晒?如-COOH、-NO、-C O、鹵素,鹵素取代基隨原子序數(shù)的增加而熒光降低,在重原子中，能級(jí)之間的交叉現(xiàn)象比 較嚴(yán)重，因此容易發(fā)生自旋軌道的相互作用，增加了由單重態(tài)轉(zhuǎn)化為三重態(tài)的速率,3. 金屬螯合物的熒光 大多數(shù)無機(jī)鹽類金屬離子，在溶液中只能 發(fā)生無輻射躍遷，因而不產(chǎn)生熒光。 不少有機(jī)化合物雖然具有共軛雙鍵，但由 于不是剛性結(jié)構(gòu)，分子處于非同一平面， 因而不發(fā)
9、生熒光。 但是，若這些化合物和金屬離子形成螯 合物，隨著分子的剛性增強(qiáng)，平面結(jié)構(gòu)的 增大，常會(huì)發(fā)生熒光,21,22,23,同一種熒光物質(zhì)溶于不同溶劑，其熒光光譜的位置和強(qiáng)度 可能有明顯不同。,4溶劑效應(yīng),一般情況下，隨著溶劑的極性的增加，熒光物質(zhì)的* 躍遷幾率增加，熒光強(qiáng)度將增強(qiáng)，熒光波長也發(fā)生紅移。,5 溫度的影響,一般說來，大多數(shù)熒光物質(zhì)的溶液隨著溫度的降低， 熒光效率和熒光強(qiáng)度將增加,如熒光素的乙醇溶液在0以下每降低10 ， 熒光效率增加3%，冷至-80時(shí)，熒光效率為100%。,（四）溶液的熒光（或磷光）強(qiáng)度 1. 熒光強(qiáng)度與溶液濃度的關(guān)系 熒光強(qiáng)度If正比于吸收的光量Ia與熒光量 子產(chǎn)
10、率 。 If = Ia 式中為熒光量子效率，又根據(jù)Beer定律 A=-lg I/ I0 I= I0 .10- A Ia = I0 - I = I0(1- 10 -A) I0和I分別是入射光強(qiáng)度和透射光強(qiáng)度。代入上式得 If = I0(1- 10 -kb c),24,整理得： If =2.3 I0 kbc 當(dāng)入射光強(qiáng)度I0 和b一定時(shí)，上式為： If = K c 即熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成之正比， 但這種線性關(guān)系只有在極稀的溶液中， 當(dāng) kbc0.05時(shí)才成立。 對(duì)于較濃溶液，由于猝滅現(xiàn)象和自吸收等原因，使熒光強(qiáng)度和濃度不呈線性關(guān)系。,25,26,2 、影響熒光強(qiáng)度的環(huán)境因素,因素,溶劑,一般
11、溶劑效應(yīng),折射率和介電常數(shù)的影響,特殊溶劑效應(yīng),熒光體和溶劑分子間的 特殊化學(xué)作用如氫鍵的生成,同一種熒光物質(zhì)在不同的溶劑中的熒光光譜不同,溫度,溫度上升使熒光強(qiáng)度下降,內(nèi)部能量轉(zhuǎn)化作用增大,碰撞頻率增加，使外轉(zhuǎn)換的幾率增加,酸度,化合物所處狀態(tài)不同,電子構(gòu)型上有所不同,熒光強(qiáng)度和熒光光譜不同,27,28,3、熒光猝滅,定義：熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子 的相互作用引起熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象,類型,碰撞猝滅,激發(fā)單重態(tài)的熒光分子與猝滅劑分子相碰撞,熒光分子以無輻射躍遷的方式回到基態(tài),靜態(tài)猝滅,熒光物質(zhì)分子與猝滅劑分子生成非熒光 的絡(luò)合物,轉(zhuǎn)入三重態(tài)的猝滅,發(fā)生電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)的猝滅,猝滅劑與熒
12、光物質(zhì),熒光物質(zhì)的自猝滅,濃度較高單重激發(fā)態(tài)的分子在發(fā)生熒光之前和未 激發(fā)的熒光物質(zhì)分子碰撞而引起的自猝滅,溶解氧與熒光物質(zhì),29,光源,氙燈和高壓汞燈,激發(fā)單色器,光柵,掃描激發(fā)光譜，選擇激發(fā)波長,樣品池,I0,I,If,發(fā)射單色器,掃描發(fā)射光譜,消除其它光線的干擾 獲得所需的熒光,檢測(cè)器,顯示器,與分光光度計(jì)的差別,兩個(gè)單色器,兩個(gè)單色器互成直角,光電倍增管,二、熒光分析儀,30,三、分子熒光分析法及其應(yīng)用,1. 熒光分析方法的特點(diǎn),（1）靈敏度高 （2）選擇性強(qiáng) （3）試樣量少和方法簡單 （4）提供比較多的物理參數(shù),2、熒光定量分析的方法,方法,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)濃度成正比的
13、關(guān)系,比較法,同樣條件下，測(cè)定試樣溶液和一標(biāo)準(zhǔn)溶液 的熒光強(qiáng)度，直接通過比例計(jì)算,31,3、熒光分析法的應(yīng)用,方法,直接熒光法,被測(cè)物本身有熒光,被測(cè)物與試劑反應(yīng)后,F與物質(zhì)的 濃度成正比,熒光猝滅法,被測(cè)物使熒光熄滅,由熒光強(qiáng)度降低的強(qiáng)度來測(cè)定被測(cè)物的含量,間接熒光法,某些陰離子奪取金屬絡(luò)合物中金屬 離子，而釋放出能發(fā)熒光的配位體,催化熒光法,反應(yīng)速度慢，熒光微弱，難測(cè)定,金屬離子將加速反應(yīng)進(jìn)行,32,磷光分析法,1如何獲得較強(qiáng)的磷光,增加試樣的剛性: 低溫冷凍,固體磷光法：吸附于固相載體（濾紙）,分子締合物的形成：加入表面活性劑等,重原子效應(yīng)：加入含重原子的物質(zhì)，如銀鹽等,敏化磷光：通過能
14、量轉(zhuǎn)移產(chǎn)生磷光,磷光發(fā)射：電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí),基態(tài)， T1 S0躍遷；,電子由S0進(jìn)入T1的可能過程：（ S0 T1禁阻躍遷）,33,熒光計(jì)上配上磷光測(cè)量附件即可對(duì)磷光進(jìn)行測(cè)量。 在有熒光發(fā)射的同時(shí)測(cè)量磷光,磷光分析儀器,應(yīng)用,34,化學(xué)發(fā)光分析法,一、基本原理,A +B C + D*,D* D + h,某些化合物接受能量而被激發(fā)，從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)， 發(fā)射出一定波長的光,（1）能夠發(fā)光的化合物大多為有機(jī)化合物，芳香族化合物,（2）發(fā)光反應(yīng)多為氧化還原反應(yīng)，激發(fā)能與反應(yīng)能相當(dāng),E=170300 kJ/mol；位于可見光區(qū),（3）發(fā)光持續(xù)時(shí)間較長，反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行,發(fā)光反應(yīng)如果存在于
15、生物體(螢火蟲)中，稱生物發(fā)光,35,化學(xué)發(fā)光效率,化學(xué)效率：,發(fā)光效率：,化學(xué)反應(yīng)所決定,化學(xué)反應(yīng)和環(huán)境因素,化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度(單位時(shí)間發(fā)射的光量子數(shù))：,dc/dt是分析物參加反應(yīng)的速率,36,若化學(xué)發(fā)光反應(yīng)是一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)則,即發(fā)光總強(qiáng)度與被測(cè)物濃度成線性：,二、化學(xué)發(fā)光反應(yīng)類型,1. 直接化學(xué)發(fā)光和間接化學(xué)發(fā)光,直接發(fā)光 是被測(cè)物作為反應(yīng)物直接參加化學(xué)發(fā)光反應(yīng) ，生成電子激發(fā)態(tài)產(chǎn)物分子，此初始激發(fā)態(tài)能輻射光子,A + B C* + D C* C + h,37,間接發(fā)光是被測(cè)物A或B，通過化學(xué)反應(yīng)生成初始激發(fā)態(tài)產(chǎn) 物C* ， C* 不直接發(fā)光，而是將其能量轉(zhuǎn)移給F，使F躍遷 回基態(tài)，產(chǎn)生發(fā)光
16、。,A + B C* + D C*+F F* + E F* F + h,2. 氣相化學(xué)發(fā)光和液相化學(xué)發(fā)光,（1）氣相化學(xué)發(fā)光,化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在氣相中進(jìn)行,主要有O3、NO、S的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，可用于監(jiān)測(cè)空氣中的 O3、NO、SO2、H2S、CO、NO2等,NO + O3 NO2* NO2* NO2 + h,38,（2）液相化學(xué)發(fā)光,化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在液相中進(jìn)行,應(yīng)用最多的發(fā)光試劑：魯米諾（3-氨基苯二甲酰肼）；,魯米諾在堿性溶液中與雙氧水的反應(yīng)過程：,魯米諾- H2O2發(fā)光反應(yīng)反應(yīng)速度慢，可檢測(cè)低至 10-9 mol/L 的H2O2；,39,生物發(fā)光,生物發(fā)光是化學(xué)發(fā)光中的一類，特指在生物體內(nèi)通過 化
17、學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的發(fā)光現(xiàn)象，主要由酶來催化產(chǎn)生的。 多種細(xì)菌、昆蟲、魚類等均能發(fā)光,40,熒光燈：當(dāng)高壓加在燈管兩端后，燈管內(nèi)少數(shù)電子高速撞擊電極后產(chǎn)生二次電子發(fā)射，開始放電，管內(nèi)的水銀受電子撞擊后，激發(fā)輻射出253.7nm的紫外光，產(chǎn)生的紫外光激發(fā)涂在管內(nèi)壁上的熒光粉而產(chǎn)生可見光。 （可見光的顏色將依據(jù)所選用的熒光粉的不同而不同）,41,熒光棒中的化學(xué)物質(zhì)主要由三種物質(zhì)組成：過氧化物、酯類化合物和熒光染料。簡單地說，熒光棒發(fā)光的原理就是過氧化物和酯類化合物發(fā)生反應(yīng)，將反應(yīng)后的能量傳遞給熒光染料，再由染料發(fā)出熒光。目前市場上常見的熒光棒中通常放置了一個(gè)玻璃管夾層，夾層內(nèi)外隔離了過氧化物和酯類化合物，
18、經(jīng)過揉搓，兩種化合物反應(yīng)使得熒光染料發(fā)光。,42,三、化學(xué)發(fā)光的測(cè)量儀器,儀器主要包括： 樣品室、光檢測(cè)器、放大器和信號(hào)輸出裝置等部件,43,熒光法測(cè)定維生素B2片劑中核黃素含量,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1學(xué)習(xí)和掌握熒光光度分析方法,2了解熒光分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)及使用方法,二、實(shí)驗(yàn)原理：,維生素B2結(jié)構(gòu)式,維生素B2，又叫核黃素， 橘黃色,無臭的針狀晶體,易溶于水而不溶于 乙醚等有機(jī)溶劑,在中性或酸性溶液中穩(wěn)定,光照易分解，對(duì)熱穩(wěn)定,44,維生素B2水溶液在430-440nm藍(lán)光或紫外光照射下 會(huì)發(fā)生綠色熒光，熒光峰在535nm,在pH=6-7溶液 中熒光強(qiáng)度最大，在pH=11的堿溶液中熒光消失， 所以
19、可以用熒光光譜法測(cè)定維生素2的含量,三、實(shí)驗(yàn)用品： 1儀器： 熒光分光光度計(jì)，移液管，容量瓶，棕色試劑瓶， 比色管，燒杯，離心機(jī)，離心管 2藥品： 核黃素（生化試劑），冰醋酸（AR）,鹽酸（AR） 氫氧化鈉，市售維生素B2片劑,45,四、實(shí)驗(yàn)步驟： 1、試劑溶液的配制 1）5醋酸溶液 取5份冰醋酸與95份體積蒸餾水混合 2）10.0mgL-1VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取10.0mgVB2 將其溶解于少量的5%HAc中，轉(zhuǎn)移至1L容量瓶中用5%HAc 稀釋至刻度，該溶液應(yīng)裝于棕色試劑瓶中，置陰涼處保存 3）待測(cè)液：取市售VB2一片，置于50mL燒杯中，加入約 12mL 5%HAc溶液，用玻璃棒搗碎藥
20、片，水浴加熱使樣品 由混濁變?yōu)榛就该骱笕∠吕鋮s，轉(zhuǎn)移并加入5%HAc溶液 定容至100 mL。取數(shù)毫升于離心管中進(jìn)行離心，用移液 管準(zhǔn)確移取5 mL的上層清液并定容成50mL，貯于棕色試 劑瓶中，置陰涼處保存,2、激發(fā)光和熒光波長的選擇 準(zhǔn)確移取10.0mgL-1VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0 mL于50mL容量瓶中定容。轉(zhuǎn)移部分溶液至石英比色皿中，將熒光分光光度計(jì)的熒光波長暫定在525 nm處，在200500 nm波長范圍內(nèi)對(duì)激發(fā)波長進(jìn)行掃描，記錄激發(fā)光譜曲線，約在265、372、442nm有三個(gè)峰。然后將激發(fā)波長設(shè)定在442nm處，在400700nm波長范圍內(nèi)對(duì)熒光波長掃描，記錄熒光光譜曲線，約在
21、525nm處熒光強(qiáng)度最大。從激發(fā)和發(fā)射光譜上確定最佳的激發(fā)和發(fā)射波長,46,3、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制 在五個(gè)干凈的50mL容量瓶中，分別加入1.00 mL，2.00 mL，3.00 mL，4.00 mL和5.00 mL定容至50mL。 4、標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定 設(shè)置適當(dāng)?shù)膬x器參數(shù), 在最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長處從稀到濃測(cè)量系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度。 5、未知試樣的測(cè)定 取待測(cè)液5.0 mL置于50mL容量瓶中，用5%HAc溶液稀釋至刻度，搖勻。用測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列時(shí)相同的條件，測(cè)量其熒光強(qiáng)度。,47,五、數(shù)據(jù)處理： 0 1 2 3 4 5 6 VB2 標(biāo)mL 0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 VB2待mL 5.00 用H2O定容 (VB2) 0.00 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 (mgL-1 ) 熒光強(qiáng)度(F) 1用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。 2根據(jù)經(jīng)稀釋的待測(cè)液的熒光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上求得其濃度 VB2 %=,48,
單線態(tài)和三線態(tài).ppt
