第十章免疫細胞的分離和功能檢測

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1、第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 第十章第十章 免疫細胞的免疫細胞的分離和分離和功能檢測功能檢測 第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 目錄目錄 1外周血單個核細胞的分離和純化外周血單個核細胞的分離和純化2淋巴細胞及其亞群的分離淋巴細胞及其亞群的分離3吞噬細胞的分離和收集吞噬細胞的分離和收集返回總目錄返回總目錄第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 3免免疫細胞疫細胞的分離及檢測的分離及檢測檢測：檢測：各類免疫細胞及其亞群的數(shù)量和各類免疫細胞及其亞群的數(shù)量和功能測定功能測定方法方法：體體外法為外法為主主目的：目的：

2、判斷機體免疫狀態(tài)判斷機體免疫狀態(tài)意義意義：探討疾病的發(fā)病機制、發(fā)展、預(yù)后探討疾病的發(fā)病機制、發(fā)展、預(yù)后、療效、療效免疫細胞的分離免疫細胞的分離 是指將各種參與免疫反應(yīng)的是指將各種參與免疫反應(yīng)的 細胞從血液或組織中分離出來細胞從血液或組織中分離出來 第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 免疫細胞種類第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 大大吞噬細胞吞噬細胞:即單核即單核-吞噬細胞系統(tǒng)吞噬細胞系統(tǒng) 小小吞噬細胞吞噬細胞:即中性粒細胞即中性粒細胞第一節(jié)第一節(jié) 吞噬細胞吞噬細胞的分離和收集的分離和收集吞噬細胞的種類吞噬細胞的種類第十章第十章 免疫細胞

3、免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 特征特征性標志性標志 CD14CD14分離技術(shù)分離技術(shù) PecollPecoll密度梯度分離法密度梯度分離法 流式細胞儀分離技術(shù)流式細胞儀分離技術(shù) 免疫磁珠分離法：為目前較常用的方法免疫磁珠分離法：為目前較常用的方法 黏附法黏附法一、吞噬細胞的分離一、吞噬細胞的分離（一）單核細胞的分離第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 免疫磁珠分離法免疫磁珠分離法 第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 斑蝥斑蝥敷貼法分離人巨噬細胞敷貼法分離人巨噬細胞 動物動物的巨噬細胞直接從腹腔滲出液中獲取的巨噬細胞直接從腹腔滲出

4、液中獲取 （二）巨噬細胞的分離（二）巨噬細胞的分離第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 聚合物加速沉降法聚合物加速沉降法 可從外周血中分離出白細胞可從外周血中分離出白細胞RBC血漿血漿(抗凝血抗凝血)WBCRBC FicollFicoll分離法分離法 可從白細胞中分離出純化的中性粒細胞可從白細胞中分離出純化的中性粒細胞（三）中性粒細胞的分離（三）中性粒細胞的分離第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離中性粒細胞密度梯度離心分離中性粒細胞第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 吞

5、噬細胞的吞噬活動大體分為吞噬細胞的吞噬活動大體分為趨化趨化、吞噬吞噬和和胞內(nèi)殺胞內(nèi)殺滅滅作用三個階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測方法。作用三個階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測方法。（一）中性粒細胞功能檢測技術(shù)（一）中性粒細胞功能檢測技術(shù) （二）巨噬細胞功能檢測技術(shù)（二）巨噬細胞功能檢測技術(shù)二、相關(guān)功能檢測二、相關(guān)功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 細胞趨化功能的檢測細胞趨化功能的檢測吞噬功能的檢測吞噬功能的檢測殺菌功能的檢測殺菌功能的檢測（一）中性粒細胞功能檢測（一）中性粒細胞功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 體內(nèi)試驗法：皮膚體內(nèi)試驗法

6、：皮膚窗法窗法 體外試驗法：濾膜滲透法體外試驗法：濾膜滲透法 瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法 趨化功能檢測趨化功能檢測檢測細胞運動功能檢測細胞運動功能皮膚窗法皮膚窗法 在在受檢者前臂屈側(cè)中央受檢者前臂屈側(cè)中央3 3范圍內(nèi)，搔刮范圍內(nèi)，搔刮皮膚后，用蓋玻片壓緊固定，在第皮膚后，用蓋玻片壓緊固定，在第2 2，5 5，8 8，1212，2424，3636小時各取樣一次，染色觀察中性粒細胞聚集小時各取樣一次，染色觀察中性粒細胞聚集開始時間、聚集程度等。健康正常人一般開始時間、聚集程度等。健康正常人一般2 23h3h后后開始聚集，達開始聚集，達5050100100個，個，6 6小時可達小時可達10001000

7、個以上個以上。第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 原理及技術(shù)要點原理及技術(shù)要點 在一特制的分上下兩層的小盒，將趨化因子加在一特制的分上下兩層的小盒，將趨化因子加入下室，待檢細胞加入上室，兩室用微孔濾膜分入下室，待檢細胞加入上室，兩室用微孔濾膜分隔，隔，3737溫育數(shù)小時后，上室的中性粒細胞受下溫育數(shù)小時后，上室的中性粒細胞受下室趨化因子的吸引，由濾膜微孔進入濾膜內(nèi)，取室趨化因子的吸引，由濾膜微孔進入濾膜內(nèi)，取濾膜清洗、固定、干燥、染色和透明，在高倍鏡濾膜清洗、固定、干燥、染色和透明，在高倍鏡下觀察細胞穿越濾膜的移動距離，從而判斷其趨下觀察細胞穿越濾膜的移動距離，從而

8、判斷其趨化功能?；δ堋V膜滲透法濾膜滲透法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 原理及技術(shù)要點原理及技術(shù)要點 在瓊脂糖凝膠平板的中孔加白細胞懸液，左孔加在瓊脂糖凝膠平板的中孔加白細胞懸液，左孔加趨化因子，右孔加對照液，溫育趨化因子，右孔加對照液，溫育48小時后，用顯小時后，用顯微鏡測微器測定中性粒細胞向左孔的移動距離微鏡測微器測定中性粒細胞向左孔的移動距離A和和向右孔的移動距離向右孔的移動距離B，計算趨化指數(shù)。，計算趨化指數(shù)。趨化指數(shù)趨化指數(shù)=A/B趨化指數(shù)越大，表明中性粒細胞運動功能越強趨化指數(shù)越大，表明中性粒細胞運動功能越強 瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法第十章第十章

9、 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 顯微鏡檢查法顯微鏡檢查法 100(%)計數(shù)的白細胞數(shù)吞噬細菌的白細胞數(shù)吞噬率吞噬指數(shù)=（一）中性粒細胞吞噬功能檢測（一）中性粒細胞吞噬功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 NBTNBT還原試驗還原試驗 原理：原理：N-N-C +H+N=N-R-N-NH2C N=NH四氮唑基（淡黃色）四氮唑基（淡黃色）甲甲chan（紫黑色）（紫黑色）殺菌功能檢測殺菌功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 方法：方法：1.1.抗抗凝血凝血 +硝基藍四氮唑（硝基藍四氮唑（NBTNBT），），3737

10、孵孵育育25min25min。2.2.推推片染色、鏡檢。片染色、鏡檢。正常值：正常值：NBTNBT陽性細胞率應(yīng)陽性細胞率應(yīng)95%95%NBT還原試驗還原試驗第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 炭炭粒廓清試驗粒廓清試驗 正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除9090炭粒，脾炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除巨噬細胞約吞噬清除1010炭粒。據(jù)此給小鼠靜脈炭粒。據(jù)此給小鼠靜脈注射定量印度墨汁（炭粒懸液），間隔一定時間注射定量印度墨汁（炭粒懸液），間隔一定時間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度

11、，判斷巨噬細胞的功能。中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。（二）巨噬細胞功能檢測（二）巨噬細胞功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 M+CRBCM+CRBC孵育孵育涂片、染色、鏡檢涂片、染色、鏡檢計算、吞噬率、吞噬指計算、吞噬率、吞噬指數(shù)數(shù)吞噬率（吞噬吞噬率（吞噬CRBCCRBC的的M 數(shù)數(shù)/計數(shù)的計數(shù)的M 數(shù)數(shù)）100100吞噬指數(shù)吞噬指數(shù) M吞噬的CRBCCRBC總數(shù)總數(shù)/計數(shù)的計數(shù)的M 數(shù)數(shù)吞噬功能檢測吞噬功能檢測返回章目錄返回章目錄第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 PBMCPBMC包括：淋巴細胞、單核細胞包括：淋巴細胞

12、、單核細胞 各種血細胞比重不同各種血細胞比重不同,利用密度梯度離心進行分離利用密度梯度離心進行分離 常用分層液：常用分層液：ficollhypaque，percoll第二節(jié)第二節(jié) 外周血單個核細胞的分離和純化外周血單個核細胞的分離和純化第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 細胞細胞比重比重血小板血小板1.0301.035PBMC1.0751.090多核白細胞多核白細胞1.092紅細胞紅細胞1.093外周血各細胞成分的密度第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 Ficoll分離液法分離液法是一種單次差速密度梯度離心是一種單次差速密度梯度離心的分離

13、法，主要用于分離外周血中的單個核細胞。的分離法，主要用于分離外周血中的單個核細胞。原原理：理：Ficoll分層液：密度分層液：密度1.0771.0770.0010.001 離心：密度梯度離心離心：密度梯度離心 分離：各類細胞按其相應(yīng)密度重新分布分離：各類細胞按其相應(yīng)密度重新分布一、一、Ficoll分離法分離法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 Ficoll分層液分離單個核細胞示意圖第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 7898Percoll分離單個核細胞示意圖返回章目錄返回章目錄第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測

14、 紅細胞紅細胞的去除：低滲裂解法、氯化銨裂解法的去除：低滲裂解法、氯化銨裂解法 血小板血小板的去除的去除 ：胎牛血清：胎牛血清梯度離心法梯度離心法單核細胞單核細胞的去除的去除：黏附法：黏附法 羰基鐵吞噬法（磁鐵吸引法）羰基鐵吞噬法（磁鐵吸引法）苯丙氨酸苯丙氨酸甲酯去除法甲酯去除法 第三節(jié)第三節(jié) 淋巴細胞及其亞群的分離淋巴細胞及其亞群的分離一、淋巴細胞的純化一、淋巴細胞的純化第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 免疫磁珠分離法免疫磁珠分離法流式細胞術(shù)分離法流式細胞術(shù)分離法 其他方法其他方法二、淋巴細胞亞群的分離二、淋巴細胞亞群的分離第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和

15、功能檢測的分離和功能檢測 原理原理 將針對淋巴細胞特殊表面標志的某種特異性將針對淋巴細胞特殊表面標志的某種特異性單克隆抗體與磁珠結(jié)合形成單克隆抗體與磁珠結(jié)合形成免疫磁珠（免疫磁珠（IMBIMB），當特異性單克隆抗體與表達相應(yīng)抗原的靶細胞結(jié)當特異性單克隆抗體與表達相應(yīng)抗原的靶細胞結(jié)合，利用磁場可以將合，利用磁場可以將IMBIMB所結(jié)合細胞與其他細胞所結(jié)合細胞與其他細胞分離。包被磁珠的抗體可以是第一抗體或第二抗分離。包被磁珠的抗體可以是第一抗體或第二抗體。體。免疫磁珠分離法免疫磁珠分離法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 免疫磁珠分離法免疫磁珠分離法第十章第十章 免疫細

16、胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 488 nm 激光激光+-前向散射光前向散射光檢測器檢測器 熒光檢測器熒光檢測器電磁場電磁場單個細胞被分類單個細胞被分類進入檢測管進入檢測管流流式式細細胞胞術(shù)術(shù)分分離離原原理理示示意意圖圖第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 E花環(huán)沉降法花環(huán)沉降法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 T T細胞功能檢測細胞功能檢測 B B細胞功能檢測細胞功能檢測 NKNK細胞功能檢測細胞功能檢測三、相關(guān)功能檢測三、相關(guān)功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 T T細胞增殖試驗細胞增殖

17、試驗 T T細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗 MHC-MHC-肽四聚體技術(shù)肽四聚體技術(shù) 淋巴細胞內(nèi)細胞因子檢測淋巴細胞內(nèi)細胞因子檢測 T細胞功能檢測細胞功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 淋巴細胞淋巴細胞DNADNA合成合成分化分化母細胞母細胞刺激物刺激物細胞細胞變大變大細胞漿擴大細胞漿擴大空泡空泡核仁明顯核仁明顯核染色質(zhì)疏松核染色質(zhì)疏松T淋巴細胞增殖試驗淋巴細胞增殖試驗第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 非特異性刺激物：非特異性刺激物：PHA -TPHA -T細胞細胞 ConA-TConA-T細胞細胞 PWM -TPWM

18、 -T、B B細胞細胞 LPS -BLPS -B細胞細胞特異性刺激物：特異性刺激物：異種抗原異種抗原 同種組織抗原同種組織抗原淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 形態(tài)學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查法 3H-TdR3H-TdR摻入法摻入法 MTTMTT比色法比色法 淋巴細胞轉(zhuǎn)化的檢測方法淋巴細胞轉(zhuǎn)化的檢測方法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 形態(tài)學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 轉(zhuǎn)化的淋巴細胞轉(zhuǎn)化的淋巴細胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細胞淋巴母細胞淋巴母細胞 過

19、渡型過渡型細胞大小細胞大小(直徑直徑m)m)12122020121216166 68 8核大小、染色質(zhì)核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松增大、疏松增大、疏松不增大、密集不增大、密集核仁核仁清晰、清晰、1 14 4個個有或無有或無無無有絲分裂有絲分裂有或無有或無無無無無胞質(zhì)、著色胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿增多、嗜堿增多、嗜堿極少、天青色極少、天青色漿內(nèi)空泡漿內(nèi)空泡有或無有或無有或無有或無無無偽足偽足有或無有或無有或無有或無無無未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細胞的形態(tài)特征未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細胞的形態(tài)特征第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 原理：原理：刺激物刺激物3756hG1期期

20、S1期期 合成合成DNADNA 3H-TdR3716hDNA-3H-TdR測淋巴細胞內(nèi)放射量（測淋巴細胞內(nèi)放射量（cpmcpm）計算計算SISI判斷淋巴細胞轉(zhuǎn)化程度判斷淋巴細胞轉(zhuǎn)化程度外周血（外周血（T T）G G0 0期期3H-TdR摻入法摻入法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 評價：該方法敏感性高、客觀性強、重復(fù)評價：該方法敏感性高、客觀性強、重復(fù)性好、可自動操作；設(shè)備昂貴、放射污染性好、可自動操作；設(shè)備昂貴、放射污染。刺激指數(shù)（刺激指數(shù)（stimulating indexstimulating index，SI SI）SI=SI=試驗管試驗管cpmcpm均值

21、均值/對照管對照管cpmcpm均值均值3H-TdR摻入法摻入法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 原理原理：外周血外周血T T細胞細胞 PHA發(fā)生增殖發(fā)生增殖 MTT含藍色甲顆粒含藍色甲顆粒 的的T T細胞細胞 MTT PHA 有機溶劑有機溶劑測吸光度（測吸光度（A A）值）值 計算計算SISI判定細胞增殖結(jié)果判定細胞增殖結(jié)果SI=值對照孔值試驗孔AA(SI2(SI2具有意義具有意義)MTT比色法比色法第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 原理原理:靶細胞抗原靶細胞抗原T T細胞細胞觀察殺傷活力觀察殺傷活力致敏致敏CTLCTL靶細胞靶細胞（

22、三）（三）T細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 試驗方法試驗方法:同位素法同位素法 淋巴細胞（淋巴細胞（CTLCTL）+含含51Cr 51Cr 的腫瘤細胞的腫瘤細胞 腫瘤細胞破壞腫瘤細胞破壞 51Cr 51Cr 釋放釋放 測定測定射線射線51Cr特異釋放率=均值對照孔均值最大釋放孔均值對照孔均值試驗孔cpmcpmcpmcpm100%（三）（三）T細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 （三）（三）T細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗背景無效應(yīng)細胞背景無效應(yīng)細

23、胞效應(yīng)細胞效應(yīng)細胞/靶細胞靶細胞 1:1效應(yīng)細胞效應(yīng)細胞/靶細胞靶細胞 5:1效應(yīng)細胞效應(yīng)細胞/靶細胞靶細胞 20:1細胞溶解細胞溶解第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 MHC-肽四聚體技術(shù)肽四聚體技術(shù)原理原理 根據(jù)根據(jù)T細胞活化的雙識別原理，用生物工細胞活化的雙識別原理，用生物工程技術(shù)將程技術(shù)將MHC分子在體外組裝，并結(jié)合抗原表分子在體外組裝，并結(jié)合抗原表位肽，形成抗原肽位肽，形成抗原肽-MHC分子復(fù)合物，結(jié)合流式分子復(fù)合物，結(jié)合流式細胞儀定量檢測抗原特異性細胞儀定量檢測抗原特異性T細胞。細胞。T第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 技術(shù)

24、要點技術(shù)要點:1.1.在體外將特異性抗原肽段、可溶性在體外將特異性抗原肽段、可溶性MHCIMHCI類分子類分子重鏈及重鏈及2 2微球蛋白正確折疊，形成微球蛋白正確折疊，形成MHC-MHC-抗原肽抗原肽復(fù)合物，并純化該復(fù)合物。復(fù)合物，并純化該復(fù)合物。2.2.用生物素標記用生物素標記MHC-MHC-抗原肽復(fù)合物?？乖膹?fù)合物。3.3.生物素標記的生物素標記的MHC-MHC-抗原肽復(fù)合物與熒光標記的抗原肽復(fù)合物與熒光標記的親和素以親和素以4:14:1的比例相混合，即得到熒光標記的的比例相混合，即得到熒光標記的四聚體四聚體 MHC-肽四聚體技術(shù)肽四聚體技術(shù)第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測

25、的分離和功能檢測 MHC-MHC-肽四聚體技術(shù)肽四聚體技術(shù)第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 原理原理:用用刺激劑體外激活淋巴細胞，用蛋白轉(zhuǎn)運抑刺激劑體外激活淋巴細胞，用蛋白轉(zhuǎn)運抑制如莫能霉素阻止細胞因子分泌到細胞外，細胞制如莫能霉素阻止細胞因子分泌到細胞外，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運方式被打亂，引起細胞因子向高爾內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運方式被打亂，引起細胞因子向高爾基體積聚，用流式細胞儀便可測出淋巴細胞內(nèi)的基體積聚，用流式細胞儀便可測出淋巴細胞內(nèi)的細胞因子種類，從而確定細胞因子種類，從而確定TH1/TH2TH1/TH2細胞的百分率。細胞的百分率。淋巴細胞內(nèi)細胞因子檢測淋巴細胞內(nèi)細胞因子

26、檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 分泌的細胞因子分泌的細胞因子 Thl Th2Thl Th2 IL-2 +-IFN-+-TNF-+IL-3 +GM-CSF +TNF-+IL-4 -+IL-5 -+IL-6 -+IL-10 -+Thl和和Th2分泌的細胞因子分泌的細胞因子第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 特異性抗原皮膚試驗特異性抗原皮膚試驗PHAPHA皮膚試驗皮膚試驗體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 溶血空斑試驗溶血空斑試驗酶聯(lián)免疫斑點試驗酶聯(lián)免疫斑點試驗體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗B細胞功能檢測細

27、胞功能檢測第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 溶血空斑試驗溶血空斑試驗溶血斑溶血斑補體抗血清包被抗血清包被綿羊紅細胞綿羊紅細胞第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 酶聯(lián)免疫斑點法酶聯(lián)免疫斑點法抗體產(chǎn)生抗體產(chǎn)生B細胞細胞抗原抗原包被包被酶聯(lián)抗酶聯(lián)抗抗體抗體凝膠底物凝膠底物顯色顯色第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 刺激體內(nèi)刺激體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素破傷風(fēng)類毒素、多價肺炎多價肺炎鏈球菌鏈球菌等等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前將適量抗原皮下或肌肉注

28、射免疫，并于免疫前及免疫后及免疫后1 1周、周、2 2周、周、3 3周分別采血，分離血清，周分別采血，分離血清，測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)檢者體內(nèi)B B細胞的細胞的功能。功能。體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 染色計數(shù)染色計數(shù)離心取上清離心取上清測測LDHLDH或或AKPAKP測發(fā)光強度測發(fā)光強度測測CPMCPM值值形態(tài)法形態(tài)法酶釋法酶釋法放射性核素釋放射性核素釋放法放法流式細胞術(shù)流式細胞術(shù)靶靶細細胞胞溶溶解解常用靶細胞常用靶細胞:K562:K562細胞株細胞株NK細胞活性檢測細胞活性檢測返回章目錄返回章目錄第十章第十章 免疫細胞免疫細胞的分離和功能檢測的分離和功能檢測 THANK YOU FOR YOUR ATTENTION!返回總目錄返回總目錄