人教版高中生物選修一教材用書：專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) Word版含答案

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1、 課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) 1.測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)法。 2．稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計活菌的數(shù)目，但統(tǒng)計結(jié)果往往比活菌數(shù)目低。 3．為確保結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板上進行計數(shù)。 4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離該細菌。 5．鑒定分解尿素細菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，據(jù)是否變紅進行判斷。 篩選菌株的思路及計數(shù) [自讀教材·夯基礎(chǔ)] 1．篩選菌株的思路 (1)自然界中目的菌株的篩選： ①依據(jù)：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)

2、的環(huán)境中去尋找。 ②實例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細菌中提取出來的。 (2)實驗室中目的菌株的篩選： ①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。 ②方法：利用選擇培養(yǎng)基分離。 a．選擇培養(yǎng)基：允許特定微生物生長，同時阻止或抑制其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。 b．實例：選擇分解尿素的細菌的培養(yǎng)基，以尿素作為唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 2．統(tǒng)計菌落數(shù)目 (1)常用方法：稀釋涂布平板法。 ①原理 ②計數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)

3、。 ③結(jié)果分析：統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。原因是當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。 (2)其他方法：利用顯微鏡直接計數(shù)。 1．閱讀教材P22第一段旁欄中的相關(guān)內(nèi)容，并思考回答下列問題。 (1)從物理性質(zhì)上劃分，此培養(yǎng)基屬于哪類培養(yǎng)基？從功能上劃分呢？ 提示：固體培養(yǎng)基，因為加入了凝固劑瓊脂。從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。 (2)在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？ 提示：碳源主要是葡萄糖，氮源是尿素。 (3)該培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進行選擇的？ 提示：該培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。該培養(yǎng)基以尿

4、素為唯一氮源，只允許能以尿素作為氮源的微生物生長。 2．閱讀教材P22中部楷體字部分，思考： 哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實值？他們的實驗需要改進嗎？如果需要，如何改進？ 提示：第一位同學(xué)只涂布了1個平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數(shù)值結(jié)果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求平均值，這兩位同學(xué)的實驗都需要改進。在設(shè)計實驗時，一定要涂布至少3個平板作為重復(fù)組，才能增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。在分析實驗結(jié)果時，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致。結(jié)果不一致，意

5、味著操作有誤，需要重新實驗。 3．閱讀教材P23上部的楷體字部分，請幫助A同學(xué)設(shè)置對照實驗，以排除其他同學(xué)所質(zhì)疑的可能影響實驗結(jié)果的因素。 提示： 可能原因 實驗驗證 結(jié)　論 所取土樣不同 其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進行實驗 若結(jié)果與A同學(xué)的一致，則說明A無誤；若結(jié)果與A同學(xué)的不一致，則說明A同學(xué)操作失誤或培養(yǎng)基配制有問題 培養(yǎng)基污染或操作失誤 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作空白對照 若有菌落出現(xiàn)，則說明培養(yǎng)基污染；若無菌落出現(xiàn)，則說明未被污染 [跟隨名師·解疑難] 1．選擇培養(yǎng)基的類型及作用 (1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。如加入青霉素可以

6、分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入指的是在培養(yǎng)基的培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。 (2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可以分離固氮微生物，因為非固氮微生物不能在此培養(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時，也具有分離效果。 (3)改變微生物的培養(yǎng)條件。如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。 2．統(tǒng)計菌落數(shù)目 (1)稀釋涂布平板法： ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～30

7、0的平板進行計數(shù)。 ②注意事項： a．設(shè)置重復(fù)組：同一稀釋度下，至少涂布3個平板作為重復(fù)組，才能增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。分析結(jié)果時，需考慮重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實驗。 b．設(shè)置對照：目的是排除實驗中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗的可信度。 ③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。 C：代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)。 V：代表涂布平板時所用的稀釋液的體積。 M：代表稀釋倍數(shù)。 (2)顯微鏡直接計數(shù)法： ①原理：此法利用特定細菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。 ②缺點：不能區(qū)分細菌的死

8、活。 ③方法：用計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積為1 mm2和高為0.1 mm的計數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(或16個)中格，每個中格進一步劃分成16個(或25個)小格，但計數(shù)室都是由400個小格組成的。如下圖所示： ④計算公式：每毫升原液所含細菌數(shù)＝每小格平均細菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)。 實驗設(shè)計及操作提示 [自讀教材·夯基礎(chǔ)] 1．實驗設(shè)計流程 2．菌種鑒定 (1)原理：分解尿素的細菌合成的脲酶將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基的堿性增強。 (2)方法：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅

9、，可確定該種細菌能夠分解尿素。 1．為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？ 提示：土壤中各類微生物的數(shù)量不同，因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。 2．當(dāng)?shù)谝淮螠y定時為什么要將稀釋的范圍放寬一些？ 提示：為確保能從中選擇出菌落數(shù)在30～300之間的平板進行計數(shù)。 3．為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？ 提示：防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 [跟隨名師·解疑難] 1．操作中的注意事項 (1)無菌操作：鐵鏟和信封都要滅菌。稱取土壤、將稱好的土樣倒入錐形瓶、稀釋土壤溶液，每一步都要在酒精燈

10、的火焰旁進行。 (2)做好標(biāo)記：如在培養(yǎng)皿上注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期以及培養(yǎng)樣品的稀釋度等。 2．結(jié)果分析與評價 內(nèi)　容 現(xiàn)　象 結(jié)　論 有無雜菌污染的判斷 未接種的培養(yǎng)基上無菌落生長 未被雜菌污染 選擇培養(yǎng)基的篩選作用 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù) 選擇培養(yǎng)基具有篩選作用 樣品的稀釋操作 得到2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板 操作成功 重復(fù)組的結(jié)果 若選擇同一種土樣，統(tǒng)計結(jié)果應(yīng)接近 選擇培養(yǎng)基的特點和應(yīng)用 　　[例1]　下表是某微生物培養(yǎng)基的配方。請分析回答下列問題： 編號 ① ② ③ ④ ⑤ 成分

11、 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL (1)從培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分看，此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)的微生物同化作用類型是________。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時，微生物所需要的碳源來自__________________________。 (2)此表中含有的微生物的營養(yǎng)成分包括________________________。 (3)若除去該培養(yǎng)基中的①后再加入不含氮元素的有機物，則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類是________________________。 (4)培養(yǎng)基若加入氨

12、基酸，則它可充當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)成分是_________________________。 (5)若要觀察微生物的菌落的特點，培養(yǎng)基中還應(yīng)添加的成分是____________________。 [解析]　自養(yǎng)型微生物可以利用空氣中的二氧化碳作為碳源，故培養(yǎng)基中可以不含碳源；自生固氮微生物則可以利用空氣中的氮氣作為氮源，培養(yǎng)基中可以不含氮源；氨基酸中含碳元素和氮元素，可作為微生物的碳源和氮源，還可以滿足微生物對特殊營養(yǎng)物質(zhì)的需求；若要觀察微生物的菌落特點，必須使用固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中還應(yīng)添加凝固劑，如瓊脂。 [答案]　(1)自養(yǎng)型　空氣中的CO2　(2)水、無機鹽、氮源　(3)自生固氮微生物　(

13、4)碳源、氮源和特殊營養(yǎng)　(5)凝固劑(瓊脂) 歸納拓展　幾種常見微生物的分離方法 根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點，加入某種物質(zhì)或不加入某種物質(zhì)以達到選擇的目的。常見微生物的分離舉例如下： ①酵母菌、霉菌等真菌：用含青霉素的培養(yǎng)基分離； ②金黃色葡萄球菌：用含高濃度食鹽水的培養(yǎng)基分離； ③固氮微生物：用缺乏氮源的培養(yǎng)基分離； ④自養(yǎng)型微生物：用含無機碳源的培養(yǎng)基分離； ⑤厭氧型和兼性厭氧型微生物：用普通培養(yǎng)基在無氧條件下分離。 微生物的分離與計數(shù) [例2] 自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數(shù)量的測定。下面是對大腸桿菌進行

14、數(shù)量測定的實驗，請回答有關(guān)問題。 實驗步驟： (1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。 (2)選用______________法接種樣品。 (3)適宜溫度下培養(yǎng)。 結(jié)果分析： (1)測定的大腸桿菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，正確可信的是(　　) A．一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是23 B．兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是22和26，取平均值24 C．三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26 D．四個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25 (2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測得

15、平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌株數(shù)是(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2 mL)____________。 (3)用這種方法測定密度，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量________，因為________________________________________________________________________。 (4)某同學(xué)在測定大腸桿菌的密度時發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？為什么？ [解析]　實驗步驟：(2)若要對大腸桿菌進行計數(shù)，常用稀釋涂布平板法接種樣品。 結(jié)果分析：(1)在選取樣品時，應(yīng)選取多個菌落數(shù)

16、相差不大的平板計數(shù)，取其平均值。 (2)每毫升樣品中菌株數(shù)＝×稀釋倍數(shù)， 即23.4÷0.2×106＝1.17×108。 (3)由于菌落可能由1個或多個細菌連在一起生長而成的，所以實際活菌數(shù)量比測得數(shù)量多。 (4)污染的原因可能是菌種不純，也可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底或接種過程操作不當(dāng)。 [答案]　實驗步驟：(2)稀釋涂布平板 結(jié)果分析：(1)D　(2)1.17×108　(3)多　當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落　(4)不能。因為不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或培養(yǎng)過程。 易錯提醒　本題易錯原因是不理解菌落數(shù)目的統(tǒng)計規(guī)則。實驗時，每一個濃度至少涂布三個平板，以增強實驗的

17、說服力和準(zhǔn)確性。當(dāng)樣品的稀釋倍數(shù)足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。計數(shù)時選擇菌落數(shù)在30～300的平板計數(shù)，若某兩個或多個稀釋濃度下獲得的菌落數(shù)符合條件時，再看兩者菌落數(shù)的比值：若小于2，則取兩者的平均值；若大于2，則取小者。 [隨堂基礎(chǔ)鞏固] 1．在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱作(　　) A．鑒別培養(yǎng)基　　　　　　 　B．加富培養(yǎng)基 C．選擇培養(yǎng)基 D．基礎(chǔ)培養(yǎng)基 解析：選C　鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種特殊化學(xué)物質(zhì)，微生物的代謝產(chǎn)物與特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯特征變化；加富培

18、養(yǎng)基一般用來培養(yǎng)營養(yǎng)要求比較苛刻的異養(yǎng)型微生物；基礎(chǔ)培養(yǎng)基是含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基，例如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要微生物的生長，有利于所需微生物生長的培養(yǎng)基。 2．請選出下列正確的操作步驟(　　) ①土壤取樣?、诜Q取10 g土壤，加入盛有90 mL無菌水的錐形瓶中?、畚?.1 mL進行平板涂布?、芤来蜗♂屩?01、102、103、104、105、106、107稀釋度 A．①→②→③→④ D．①→③→②→④ C．①→②→④→③ D．①→④→②→③ 解析：選C　在分離土壤中某細菌時，應(yīng)先選取土樣(1

19、0 g)，然后加無菌水獲得土壤浸出液，并進行不同倍數(shù)稀釋，最后將稀釋液涂布到培養(yǎng)基表面進行培養(yǎng)，并分離和計數(shù)。 3．某研究小組欲研究被石油污染過的土壤中細菌的數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細菌。下列操作錯誤的是(　　) A．稱取和稀釋被污染的土壤時應(yīng)在火焰旁 B．用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基進行篩選 C．分離菌種時可采用稀釋涂布平板法接種 D．對細菌進行計數(shù)時宜采用平板劃線法接種 解析：選D　微生物的分離和培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)是無菌操作，因此在微生物的分離和培養(yǎng)的過程中稱取和稀釋土壤時應(yīng)在火焰旁進行；閱讀題干可知實驗?zāi)康氖呛Y選出能分解石油的細菌，培養(yǎng)基的配方應(yīng)以石油為唯一碳源；對微生物進行

20、分離和計數(shù)，應(yīng)該用稀釋涂布平板法；分離菌種常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，但對活菌進行計數(shù)常用稀釋涂布平板法而不能用平板劃線法。 4．(2014·新課標(biāo)Ⅱ)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是________________________________；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38

21、和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________________________________________________________________________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是_________ ________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果

22、。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中____________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高________的利用率。 解析：(1)為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間。0.1 mL稀釋液中平均有38個活菌，可推測每升水樣中的活菌數(shù)＝38×10×100×1 000＝3.8×107(個)。(2)接種環(huán)、接種針或其他金屬用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。在第二次

23、及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)比較兩圖可以看出，A是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果，B是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)由于振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。 答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107　(2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落　(3)B　(4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) [課時跟蹤檢測] (滿分50分　時間25分鐘) 一、選擇題(每小題3分，共24分) 1．下列關(guān)于土壤取樣

24、的敘述錯誤的是(　　) A．土壤取樣，應(yīng)選取肥沃、濕潤的土壤 B．先鏟去表層土3 cm左右，再取樣 C．取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌 D．應(yīng)在火焰旁稱取土壤 解析：選C　微生物的培養(yǎng)要注意無菌操作，土壤取樣用的小鐵鏟和信封在使用前需滅菌，后續(xù)稀釋等操作均需在火焰旁進行。 2．可以鑒定出分解尿素的細菌的方法是(　　) A．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 B．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑 C．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑 D．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑 解析：選A　在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中，不能分解尿素獲得氮源的細菌

25、不能生長，而分解尿素的細菌能以尿素為氮源，將尿素分解為氨，使pH升高。若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑將變紅。此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基，又屬于鑒別培養(yǎng)基。 3．用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對照是(　　) A．未接種的選擇培養(yǎng)基 B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 C．接種了的選擇培養(yǎng)基 D．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 解析：選D　選擇的目的是為了分離、篩選，對照遵循的原則是單一變量，因此用接種了的普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基進行對照，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目。 4．在土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗操作中，對使用的平板和試管要進

26、行標(biāo)記，以下說法正確的是(　　) A．對培養(yǎng)皿僅需注明培養(yǎng)基的種類即可 B．一般在使用之后進行標(biāo)記 C．由于試管用得較多，只需對試管進行標(biāo)記即可 D．標(biāo)記的目的主要是為了防止實驗中平板、試管等的混淆 解析：選D　本實驗使用的平板和試管較多，為避免混淆，應(yīng)在使用前就做好標(biāo)記。標(biāo)記時要注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。 5．下列關(guān)于“檢測土壤中細菌總數(shù)”實驗操作的敘述，錯誤的是(　　) A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上 C．將實驗組和對照組平板倒

27、置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48 h D．利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對微生物進行計數(shù) 解析：選D　檢測土壤中細菌總數(shù)，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板；取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上；將實驗組和對照組平板倒置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48 h；用稀釋涂布平板法可以分離微生物也可以對微生物進行計數(shù)。 6．通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌的生長；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長。利用上述方

28、法能從混雜的微生物群體中分別分離出(　　) ①大腸桿菌?、诿咕、鄯啪€菌?、芄痰毦? A．④②③　　　　　 B．①②③ C．①③④ D．只有③④ 解析：選A　缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長，而固氮細菌能生長；在培養(yǎng)基中加青霉素可以抑制細菌和放線菌等原核生物細胞壁的合成，而霉菌屬于真核生物，故能生長；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長，對放線菌的生長無影響。 7．分離土壤中分解尿素的細菌，對培養(yǎng)基的要求是(　　) ①加尿素?、诓患幽蛩亍、奂迎傊、懿患迎傊? ⑤加葡萄糖　⑥不加葡萄糖?、呒酉跛猁} ⑧不加硝酸鹽 A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C

29、．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ 解析：選C　分離分解尿素的細菌，應(yīng)該以尿素為唯一氮源，不能加硝酸鹽來提供氮源。另外還要加葡萄糖提供碳源，加瓊脂作為凝固劑，制成固體培養(yǎng)基，利于細菌的分離、鑒定、計數(shù)等。 8．實驗測定鏈霉素對3種細菌的抗生素效應(yīng)，用3種細菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂平板上畫3條等長的平行線(3條線均與圖中的鏈霉素帶接觸)，將平板置于37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。從實驗結(jié)果分析，以下敘述錯誤的是(　　) A．鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長 B．鏈霉素對結(jié)核菌比對霍亂菌更有效 C．鏈霉素對結(jié)核菌比對傷寒菌更有效 D．鏈霉素可以用于治療傷寒病人 解析：選D　圖中細菌生長

30、區(qū)離鏈霉素帶越遠，說明該菌對鏈霉素越敏感，即鏈霉素越能阻止該菌的生長。讀題圖可知傷寒菌生長區(qū)與鏈霉素帶相連接，說明鏈霉素不能阻止傷寒菌的生長。 二、非選擇題(共26分) 9．(12分)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加________作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。 (2)在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、1

31、78和191。 該過程采取的接種方法是__________________，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為________×108個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較________。 解析：(1)脲酶能夠催化尿素分解釋放出氨和二氧化碳，因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，菌落周圍的氨增加，pH升高，酚紅指示劑將變紅。(2)該過程采取的接種方法為稀釋涂布平板法。利用稀釋涂布平板計數(shù)法對細菌進行計數(shù)時，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300的平板，因此平板上長出的細菌菌落平均數(shù)為(156＋178＋191)÷3＝175個。每克土壤

32、樣品中的細菌數(shù)為175÷0.1×105＝1.75×108個。血細胞計數(shù)板計數(shù)法能將死細胞計算在內(nèi)，而稀釋涂布平板計數(shù)法只能計數(shù)活細胞(只有活細胞才能在平板上生長)，故一般血細胞計數(shù)板計數(shù)法要比稀釋涂布平板計數(shù)法的結(jié)果大。 答案：(1)尿素　酚紅　紅　(2)稀釋涂布平板法　1.75　少 10．(14分)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，不能直接被農(nóng)作物吸收，只有當(dāng)土壤中的微生物將尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，對土壤中分解尿素的微生物進行分離和鑒定具有重要意義。回答下列問題： (1)對土壤中分解尿素的微生物的分離過程如下： 第一步：土壤取樣。取土樣用的工具和盛土樣的信封等在使用前都需要_

33、_________(填“消毒”或“滅菌”)。 第二步：樣品稀釋。通常分離不同種類的微生物要采用不同的稀釋度，原因是________________________________________________________________________。 第三步：微生物的培養(yǎng)與觀察。將一定稀釋度的樣品接種在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，并在適宜的條件下培養(yǎng)。分解尿素的微生物能在該培養(yǎng)基上生長繁殖，而______________________則不能生長繁殖。 (2)若對土壤懸液進行梯度稀釋時，未經(jīng)振蕩而直接取上層懸液進行梯度稀釋，用稀釋倍數(shù)為104的樣液涂布到平板上進行培養(yǎng)和計數(shù)，統(tǒng)

34、計出的菌落數(shù)往往比正確操作統(tǒng)計出的菌落數(shù)________。 (3)若要對上述初步篩選出的分解尿素的微生物作進一步的鑒定，需在如表所示培養(yǎng)基配方中添加的物質(zhì)是________、________。若分離得到的是尿素分解菌，則培養(yǎng)基中pH升高使酚紅指示劑變?yōu)榧t色，pH升高的原因是____________________________________________________________________　。 成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4· 7H2O 酚紅 指示劑 尿素 蒸餾水 培養(yǎng)基 (含量) 1.4 g 2.1 g 0.2 g 0.01 g 1.0 g 1 000 mL 答案：(1)滅菌　土壤中各類微生物的數(shù)量不同　不能利用尿素的微生物　(2)偏高　(3)葡萄糖　瓊脂　尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成氨