SNT 0647-2013出口堅果及堅果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法

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1、SNT 0647-2013出口堅果及堅果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法 入 唱bd SN/T 0647-2013 代替 SN 0647-1997 由印刷曹嚕蒂固回 dHHqdw 酣翻《勾勾曲亂 也V且啕 Bd Determination of maleic hydrazide residues i阻四日ts and 踐阻t products for export-HPLC method 2013圃-03-01 發(fā)布 2013-09皿 16 實施 在是2 一昔4 家庭貢 人員共和出發(fā)布 監(jiān)督棱驗栓痊總局

2、 SN/T 0647-2013 目。高 本標準按照 GB/T 1. 1-2009 給出的規(guī)則起草。 本標準代替 SN 0647-1997(( 出口堅果及堅果制品中抑芽丹殘留量檢驗方法 分光光度法》。本標 準與 SN 0647…1997 相比，除編輯性修改外主要技術變化如下: 一一標準名稱改為《出口堅果及堅果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法>> ; …一方法適用范圍中增加了板栗及其制品 一一樣品前處理方法出蒸館法改為提取凈化法; 一一測定方法由分光光度法改為高效液相色譜法。 本標準由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。 本標準

3、起草單位:中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局。 本標準主要起草人:叢偉紅、徐成鋼、楊麗君、王靜、時文春、胡巧茹、劉玉敏、崔風杰、侯建全、叢超。 本標準所替代標準的歷次版本發(fā)布情況為: 一一-SN 0647-1997 0 I 1 范圍 出口堅果及堅果制品中抑芽丹殘留量的 測定 高效液相色譜法 SN/T 0647-2013 本標準規(guī)定了出口堅果及堅果制品中抑芽丹殘留量檢測的制樣和高效液相色譜測定方法。 本標準適用于核桃及制品、板栗及制品中抑芽丹殘留最的測定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的

4、引用文件，僅注目期的文件適用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本〈包括所有的修改單)適用于本標準。 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 方法提要 試樣經(jīng)正己燒脫脂后，用申靜提取，再經(jīng) C18 柱凈化后，高效液相色譜一紫外檢測器檢測，外標法 定量。 4 試劑和材料 除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為 GB/丁 6682 中規(guī)定的一級水。 4. 1 甲醇:色譜純。 4.2 正己炕:色譜純。 4.3 乙酸錢。 4.4 氮氧化銷。 4.5 乙酸鍍?nèi)芤?(0. 02 mol/L): 稱取1. 54 g 乙酸餒，加水定容至 1 0

5、00 mL，用前經(jīng) 0.45μm 濾膜 過濾。 4.6 氫氧化納溶液(0. 01 mol/ L):稱取 0.40 g 氮氧化納，加水定容至 1 000 mL。 4. 7 抑芽丹標準物質(zhì)(Maleic hydrazide , C4 比N2 02 ,CAS No:123一33…1):純度大于 99.9% 。 4.8 抑芽丹標準儲備溶液:準確稱取適量抑芽丹標準品，用 0.01 mol/L 氮氧化鍋溶液(4.6)溶解并稀 釋成濃度為 1 mg/mL 的標準儲備液。 4.9 抑芽丹標準工作溶液:吸取1. 0 mL 標準儲備溶液(4. 的，用 0.01 mol/L 氮氧化鍋溶液(4.

6、6) 稀釋 定容至 100 mL，配制成濃度為 10 mg/L 的標準工作溶液。 4.10 微孔濾膜 :0.45μm ，有機相。 4. 11 固相萃取柱 :C18小柱 ， 3 mL , 500 mg，或相當者。依次用 4 mL 甲醇和 4 mL O. 01 mol/L 氫氧化 鈾溶液(4.6) 活化后備用。 5 儀器和設備 5. 1 高效液相色譜儀:配有紫外或二極管陣列檢測器。 SN/T 0647-2013 5.2 電子天平:感量為 0.000 1 g 和 0.01 g 。 5.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 5.4 均質(zhì)機:轉(zhuǎn)速不低于 10 000 r

7、/mino 5.5 離心機:轉(zhuǎn)速不低于 6 000 r/mino 5.6 渦旋混合器。 5. 7 樣品粉碎機 o 5.8 篩子 :2.0 mm 困孔篩。 5.9 分樣板。 6 試樣的制備與保存 6. 1 一般要求 6.2 試樣制備 將原始樣品的可食部分用四 粒。充分混勻，均分成兩份，裝入J 6.3 試樣保存 將試樣于一 5 oc 以下避光保存。 7 測定步驟 7. 1 去脂肪 稱取 2.5 g 試樣(精確至 o. 己燒均質(zhì) 1 min，以 6 000 r/min 次，棄去正己炕層。 7.2 提取 20 mm

8、 困孔篩的顆 30 min，加 20 mL 正 正己燒按上述步驟重新脫脂一 向離心管中加 20 mL 甲醇，均質(zhì) 1 min ，以 6 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心 5 min，將甲酶層小心取出過濾 到 100 mL 雞心瓶中;殘留物再用 20 mL 甲醇重復提取一次。合并提取液于上述雞心瓶中， 40 oc旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)至約 8 mL，用氮氣吹至約 2 mL，加 3 mL 0.01 mol/L 氫氧化鍋溶液(4.6)混勻待凈化。 7.3 凈化 將上述混勻的溶液全部過 C18小柱 (4.1 1)，用 4 mL 0.01 mol/L 氮氧化納溶液(4. 6)洗脫并定容至

9、 10 mL , O. 45μm 濾膜 (4. 10)過濾，備用 o 7.4 高效液相色譜條件 高效液相色譜條件如下: a) 波長 :330 nm; b) 色譜柱:硅膠柱， 3.5μm ， 4.6 mmX 150 mm，或柏當者; c) 柱溫 :40 oc 。 2 SN/T 0647-2013 d) 流動相 :0.02 mol/L 乙酸鍍?nèi)芤?4.5) ; e) 流動相流速 :0.60 mL/min; f) 進樣最 :20μL 。 7.5 空白試驗 除不加樣品外，均按上述步驟進行。 7.6 標準曲線繪制 根據(jù)樣

10、品中抑芽丹含量情況，選定峰面積相近的標準工作溶液。標準工作溶液和試樣中抑芽丹響 應值均應在儀器線性范圍內(nèi)。將系捅磊落王磊磊展玩最主運面語系磊衛(wèi)機測定，記錄色譜峰回積。以 峰頂積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪錦標準由線。 7.7 測定 根據(jù)保留時間定性，外標法 條件下，抑芽丹的保留時間約為 3. /巧。 1 / 8 結(jié)果計算與表述 i 二 →一一…一「 按式(1)計算樣品中抑芽丹殘留建: 式中: X 一一樣品中抑芽丹 標準曲線上 V 一一一最終定容體積 m …一所稱取試樣質(zhì) 9 測定低眼和四收率 9. 1 定量限 lQ

11、 /二號 m 子/∞〔 本方法抑芽丹的定量限為 0.2 mg/kg o 9.2 囡收率 樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)見表 1 。 表 1 添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù) 樣品名稱 添加濃度 mg/kg 0.2 核桃 0.4 2.0 …( 1 ) 回收率 % 82. 5~95. 5 81. 2~94. 8 90. 2~100. 2 3 SN/T 0647-2013 表 1 (續(xù)) 樣品名稱 添加濃度 回收率 mg/kg % 0.2 83

12、. 5~96. 5 蜂蜜核桃 0.4 80. 2~ 101. 2 2.0 91. O~ 104.9 0.2 80. 5~94. 0 板栗 0.4 83. 4~97. 8 2.0 90. 2~100. 6 0.2 81. 5~99. 5 糖炒板栗 0.4 84. 2~97. 8 2.0 90. 2~102. 6 4 SN/T 0647一2013 附錄 (資料性附錄) 抑芽丹標準晶譜圖 A 的。。.的 mAU 6 5 4 z?? 1 1叫 1\

13、 忡……………………一一一__J\JL~一一_.....， .... _....-..-一~ 3 n m // ,,,. 5 4 3 抑芽丹標準品譜圖 (1.5 mg/L) 2 思 A.1 O 5 SN/T 0647-2013 For母word 丁his standard is drafted according to GB/丁 1. 1一2009. 丁his standard substitutes for SN 0647-1997<< Method for the Determinati

14、on of Maleic Hydrazide Residues in Nuts and Nut Procducts for Export… Spectrophotometry)). This standard was modified based on SN 0647-1997 : E盧一一一?？诒R叮 H…'&0>;-…，…M…u山…r口……-霍口…;叩……M…r 1l量 雹H…………n……山';比ιιι叫 山mc-methOd into HPLC method. Regulation Commission for Li

15、jun , Wang Ji噸， -SN 0647-1997. 6 SN/T 0647-2013 B前程rmination of m宿leic hγdrazid暗暗sidues in nuts and nut procducts for export-HPLC method 1 Scope by HPLC of maleic hydrazide residues in nuts and nut in walnut , chestnut and thei r products. 2 Normative referen

16、ces 丁he following referenced of this document. For dated 4 Reagents and mat時ials Unless otherwise specified , all of the reagents used should be analytical grade , ; water; is the fi rst grade water described by GB/丁 6682. 4. 1 Methanol: HPLC grade. 4.2 Hexane: HPLC grade. 4ω

17、3 Ammonium acetate. 7 SN/T 0647-2013 4.4 Sodium hydroxide. 4.5 Ammonium acetate solutionCO. 02 mol/U : 1. 54 9 Ammonium acetate is dissolved in water and diluted to 1 000 mL ,and filtered through 0.45μm filters before using. 4.6 Sodium hydroxide solution CO. 01 mol/L): 0.4 9

18、sodium hydroxide is dissolved in water and diluted to 1 000 mL… 4. 7 Maleic hydrazide standard: CAS No. 123-33-1 , C4比N2O2 ,Purity>99. 9%. 4. 8 Maleic hydrazide standard stock solution: Accurarely weigh an acequate amont of maleic hydrazide standard , dilute with O. 01 mol/L sodium hy

19、droxide sulutionC4. 6) to form a standard stock solution of 1 mg/mL. 4.9 Maleic hydrazide standard working solution:dilute 1.0 mL of the stock solutionC4. 8) with 0.01 mol/L sodium hydroxide solutionC4. 6) to 100 mL as the standard working solution , the concentration is 10 mg/L. 4.10 Me

20、mbrane filter:O. 45μmCorganic phase). 4. 11 C18 columns: Sep-Pak Cartridges , C18 columns , 3 mL , 500 mg , or equivalent. Each column was conditioned with 4 mL methanol followed by 4 mL O. 01 mol/L sodium hydroxideC4. 6). 5 Apparatus and equipment 5. 1 High唰 performance liquid chromat

21、ography , equipped with UV or DAD. 5.2 Electronic balance: accurate to 0.000 1 9 and O. 01 g. 5.3 Rotary vacuum evaporator. 5.4 Homogenizer: 二三 10 000 r/min. 5. 5 Centrifuge: 注6 000 r/min. 5.6 Vortex mixer. 5. 7 Sample pulverizer. 5.8 Sieve:2.0 mm round-hole sieve. 5.

22、 9 Quartering plate. 8 SN/τ0647-2013 6 Preparation and storage of test sample 6. 1 Requirement In the course of sample preparation , precaution must be taken to avoid contamination or anγfactors which maγcause the change of residue content. 6. 2 Reparation 200 9 sampl

23、e is divided from the edible parts of the original sample by the quartering method. 丁he Sample is pulverized into granules ,and pass through a 20 mm round-hole sieve with a pulverizer. Mix thoroughly and divide equally into two portions , place in clean sample containers as the test samples , s

24、eal and label. 6. 3 Storage of test sample 丁he test samples should be stored below - 5 oC and away from I ight. 7 Procedure 7. 1 Removal of fat A sample of 2. 5 g(accurate to O. 01 g)was weighed into a plastic centrifuge tube(50 ml) ,and mixed with 5 mL water. 了he mixture was s

25、wirled and allowed to soak for 30 min.20 mL hexane was added and the mixture was homogenized for 1 min. Centrifuge for 5 min at 6 000 r/min , and the hexane layer was discarded. Then repeating the operation of homogenate , and the hexane layer was discarded. 7. 2 Extraction 20 mL Methano

26、l was added to the Plastic centrifuge tube , and the mixture was homogenised for 1 min ,and centrifuged at 6 000 r/min for 5 min. 丁he solvent was decanted , and fi Itered into a concentrate bottle(100 mL). The sample was re-homogenised with methanol(20 mL). 丁he contents were filtered and colle

27、cted into the concentrate bottle. Evaporate the mixture to about 8 mL below 40 oC , and then to 2 mL on N-Evap. The extract was added 3 mL O. 01 mol/L sodium hydroxide sulution(4. 6)and mixed. 7.3 Purifi臼tion AII the extracts was purified using C18 columns and colleced (4. 1 日， eluted wit

28、h 4 mL O. 01 mol/L sodium hydroxide solution(4. 6). 丁he extract was quantitatively transferred to 10 mL , and filtered through 0.45μm membrane(4. 10)for HPLC analysis. 9 SN/τ0647一2013 7. 4 HPLC operating conditions: HPLC operating conditions in as following: a) Detector wa

29、velenth: 330 nm; b) HPLC column:Silica gel column ,3. 5μm ， 4.6 mm x 150 mm ,or equivalent; c) Column temperature:40 oc ; d) e) f) Injection volume:20μL. above HPLC operating conditions , the Maleic hydrazide retention time is about 3. 1 minutes. 8 Calculation and express

30、ion of the result Calculate the content of Maleic hydrazide residues in the test sample according to the followed formula(1) . 10 x = C x V x 1 000 m x 1 000 ???? C 1 ) SN/T 0647-2013 Where X -the residue content of Maleic hydrazide in the test sample , mg/kg; c -

31、the concentration of Maleic hydrazide according to the standard curve , mg/L; V -the final volume of the sample solution , mL; m -the mass of the test sample , g. 9 Detection limit and 附covery 9. 1 Limit of quantification τhe determination Limit of this method is O. 2 mg/kg. 9

32、. 2 Recovery The fortified content and recovery of this method is shown in table 1. Table 1一丁he range of fortification and recovery of this method Fortified content Recoverγrange Sample mg/kg % 0.2 82.5-95.5 walnut 0.4 81.2-94.8 2 90.2-100.2 0.2 83.5-96.5 honey

33、walnut 0.4 80.2-101.2 2 91.0-104.9 0.2 80.5-94.0 chestnut 0.4 83.4-97.8 2 90.2-100.6 0.2 81.5-99.5 suger fry chestnut 0.4 84.2-97.8 2 90.2-102.6 巳 ONih 叮ωO H\在 SN/T 0647-2013 Annex A (informative annex) Maleic hydrazide chromatogram of the standa

34、rd 的。。.的 mAU 6 6 一………一一---_......//'-\JL一一一 4 3 2 。 t/min 5 4 Figure A. 1-Maleic hydrazidechromatogram of the standardC1. 5 mg/L) 3 2 O SN_T 0647-2013_頁面_01.tif SN_T 0647-2013_頁面_02.tif SN_T 0647-2013_頁面_03.tif SN_T 0647-2013_頁面_04.tif

35、 SN_T 0647-2013_頁面_05.tif SN_T 0647-2013_頁面_06.tif SN_T 0647-2013_頁面_07.tif SN_T 0647-2013_頁面_08.tif SN_T 0647-2013_頁面_09.tif SN_T 0647-2013_頁面_10.tif SN_T 0647-2013_頁面_11.tif SN_T 0647-2013_頁面_12.tif SN_T 0647-2013_頁面_13.tif SN_T 0647-2013_頁面_14.tif SN_T 0647-2013_頁面_15.tif