微生物實驗培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌農學

,單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,#,（二）原理：,培養(yǎng)基,是按照微生物生長繁殖或積累代謝產物所需的各種營養(yǎng)物質，用人工方法配制而成的一種基質。它包括碳源、氮源、生長因子、無機鹽和水等營養(yǎng)要素。,由于不同微生物細胞組成不同，因而所需營養(yǎng)基質不同，為了分離、培養(yǎng)和鑒定不同的微生物，必須根據其需要，配制合適的培養(yǎng)基。,培養(yǎng)基的制備原則：,1.,根據不同微生物的營養(yǎng)需要配置不同的培養(yǎng)基。,2.,調配好培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的濃度和比例。,3.,控制微生物的培養(yǎng)條件（滲透壓、,pH,、氧化還原電位等）,細菌 牛肉膏蛋白胨,放線菌 高氏,1,號,真菌 查氏、馬丁氏,各類,M,土豆葡萄糖,（三）器材：,1.,藥品和試劑：,牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、,NaCl,、,1M NaOH,溶液。,2.,器材：,試管、燒杯、量筒、玻璃棒、鐵架臺、漏斗、天平、牛角匙、高壓鍋、微波爐、,pH,試紙（,5.5-9.0,）、棉花、紗布、線繩、聚丙烯袋等。,（四）步驟：,以固體斜面培養(yǎng)基制作為例,：,計算 稱量 加熱融化 調,pH,過濾（可省略）,分裝 加塞（附棉塞制作）,包扎,滅菌 擺斜面 無菌檢查,1.,稱量 按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不是粉狀藥品（如牛肉膏），應用燒杯和玻璃棒稱量。,2.,配制 向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。,如果配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。一般要求瓊脂沸騰,3,次，完全熔化后，補足所失水分。,3.,調節(jié),pH,值 培養(yǎng)基溶解均勻后用,pH,試紙測,pH,，然后根據要求加酸或堿（一般用,1M HCl,和,1M NaOH,），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然,pH,時，不用調節(jié)。,4.,過濾 用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。,5.,分裝 將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內或三角瓶內，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝。,分裝時要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量如下：（,1,）固體斜面培養(yǎng)基：裝量為管長的,1/5,。（,2,）液體培養(yǎng)基：裝量為管長的,1/4,。,（,3,）半固體培養(yǎng)基：裝載量為管長的,1/3,。,6.,滅菌 塞棉塞，包扎，滅菌。培養(yǎng)基做完后，要求在,2-4,小時內滅菌，否則會被污染。,7.,擺斜面,滅菌完畢，冷卻到,60,左右再擺斜面，以免產生過多冷凝水。,（五）注意事項：,1.,稱量要準確，取藥品的角匙不能混用。,2.,加熱融化時要不斷攪拌，以免糊底和溢出。（每加熱,30s,看一次）,3.,蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速。,4.,培養(yǎng)基中如有微量成分，先配成濃縮溶液后再加入。,5.,節(jié)約藥品。,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,(g/L),牛肉膏,3g,蛋白胨,10g,NaCl 5g,瓊脂 固體培養(yǎng)基為,18g,；,半固體為,10g,；液體不加。,水,1000ml,pH 7.0-7.2,121,滅菌,20min,棉塞制作,二、消毒滅菌：,物理法：加熱、過濾、照射,化學法：化學藥品,灼燒,干熱,濕熱,加熱,高壓,間歇,煮沸,原理：,加熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質變性達到滅菌的目的。,干熱：,160-170C 1.5-2h,濕熱：,121.3C 15-30min,紫外線滅菌是誘導胸腺嘧啶二聚體的形成，而抑制了,DNA,的復制。另外，電離過程中生成的,O,3,和,H,2,O,2,均有殺菌作用。,適用范圍,濕熱主要用于各類培養(yǎng)基及液體物質,干熱主要用于玻璃、金屬等器皿、工具,紫外線主要用于接種箱、無菌室內空氣及物體表面滅菌,操作步驟：,1.,濕熱滅菌（高壓蒸汽）,向鍋內加入適量的水 裝待滅菌物品 加蓋,加熱 排冷空氣 升壓、升溫 維持所需,溫度,20-30min,降壓、降溫 開蓋取物,趁熱擺斜面,2.,干熱滅菌（干燥箱）,將待滅菌物品包好 裝入待滅菌物品 升溫,恒溫 降溫（,70,以下）開箱取物,3.,紫外線滅菌（接種箱或無菌室內）,放入待滅菌物品 甲醛（酒精）熏蒸,開紫外線燈（,30min,）關燈 工作,注意事項：,1.,高壓滅菌：切勿脫水工作，排凈冷空氣，工作人員不能遠離，當壓力降到“,0”,時再開蓋取物。,2.,干熱滅菌：物品不要與烘箱內壁鐵板接觸；溫度不能超過,170,；待溫度降至,70,以下后，再開蓋取物。,3.,紫外線滅菌：待滅菌物品要單擺開，不要直視紫外線光，更不能在紫外線光下工作。滅菌后通風，排出,O,3,。,