傳染性法氏囊病卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定

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1、技能訓(xùn)練10 傳染性法氏囊病卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定,掌握雞傳染性法氏囊病卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定方法,實(shí)訓(xùn)目標(biāo),氯化鈉、瓊脂粉、培養(yǎng)皿、打孔器、酒精燈、雞蛋、96孔血凝板、微量移液器、燒杯、帶蓋瓷盤、注射器、生理鹽水、蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)抗原等,儀器設(shè)備,方法步驟,（一）1%瓊脂平板制備 （二）稀釋卵黃 （三）加樣 （四）反應(yīng),（一）1%瓊脂平板制備,1. 制板： 用810%氯化鈉溶液配制1%瓊脂溶液，電爐加熱使之充分溶化后，倒入直徑90 mm培養(yǎng)皿，制成厚度為2.53mm瓊脂平板；平置，在室溫下冷卻凝固后打孔。,2. 打孔： 在瓊脂板上按7孔一組的梅花形打孔（中間1孔，周圍6孔），孔徑5mm，孔距25m

2、m，將孔內(nèi)的瓊脂用8號(hào)針頭斜面向上輕輕將瓊脂挑出，勿傷邊緣或使瓊脂層脫離皿底。一般打孔兩組。,3. 封底： 用酒精燈輕烤平皿底部至微燙，封閉孔底部，以防側(cè)漏。,4. 編號(hào)： 在平皿底用蠟筆編號(hào)，第一組編號(hào)16，第二組編號(hào)712。,（二）稀釋卵黃,先用微量移液器在96孔血凝板加生理鹽水，每孔50微升，共加112孔；再于第一孔加50微升卵黃，倍比稀釋至12孔。,（三）加樣,中央孔加入傳染性法氏囊病病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原，加樣量以“滿而不溢”為原則。用微量移液器小心的將96孔血凝板中不同濃度卵黃液小心加至瓊擴(kuò)板的周邊孔上，血凝板孔號(hào)與瓊擴(kuò)板孔號(hào)要一一對(duì)應(yīng)，加樣從低濃度開(kāi)始加樣，每加一個(gè)濃度，吸嘴盡量噴干凈,（四）反應(yīng),將瓊擴(kuò)板靜置12min，加蓋、倒置入濕盒中，放入37的溫箱中2448h。,（五）結(jié)果判斷,2448h后，觀察出現(xiàn)白色沉淀線的卵黃稀釋度，即是IBD抗體效價(jià)。,課后作業(yè),1.寫出實(shí)習(xí)報(bào)告； 2.掌握IBD卵黃抗體的檢測(cè)方法。,