幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體檢測(cè)操作程序(膠體金法) 特選材料

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1、 幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體檢測(cè)操作程序 （膠體金法） 1.目的 用于定性檢測(cè)人血液樣本中的胃幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體，可用于臨床輔助診斷消化道胃幽門(mén)螺旋桿菌感染。 2.范圍 適用于臨床對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體的檢測(cè)。 3. 檢驗(yàn)原理 試劑盒應(yīng)用滲濾式間接法原理，將幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶固定在硝酸纖維素膜載體上，待檢血清中幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體IgGY與抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，加入膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體與復(fù)合物結(jié)合，根據(jù)是否形成肉眼可見(jiàn)的紅色圓斑（T端），判斷結(jié)果。硝酸纖維素膜上的質(zhì)控區(qū)固定有兔抗鼠IgG,加入膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體后與之結(jié)合形成紅色圓

2、斑（C端）。 4.主要組成成分 4.1 反應(yīng)板：4.2cm×2.8cm×0.7cm上下對(duì)合、中央有直徑為0.9±0.05cm小孔的塑料小盒，其內(nèi)主要為固定有油門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗原的硝酸纖維素膜和吸水材料 4.2 試劑Ⅰ：0.02mol/L PH 7.4 PBS溶液，內(nèi)含吐溫-20. 4.3 試劑Ⅱ：主要含有膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體、穩(wěn)定劑和防腐劑。 5.儲(chǔ)存條件及有效期 產(chǎn)品應(yīng)儲(chǔ)存在2℃-8℃條件中，不能冷凍；有效期9個(gè)月。拆封后未用完的反應(yīng)板應(yīng)放入密封袋2℃-8℃保存，應(yīng)在一個(gè)月內(nèi)用完。 6. 樣本要求 6.1 樣本采集：按照臨床采血技術(shù)規(guī)范操作采集靜脈血，

3、采集的靜脈血置室溫30分鐘或37℃水浴15-20分鐘后，低速離心（2000轉(zhuǎn)/分-3000轉(zhuǎn)/分）5-10分鐘，分離血清。 6.2 樣本保存：若分離后的血清不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)將樣本保存在2℃-8℃條件下，若保存時(shí)間超過(guò)7天，則需將樣本保存在-20℃以下并避免反復(fù)凍融，以免抗體效價(jià)降低。 6.3 當(dāng)明顯溶血（血紅蛋白濃度＞1.96g/L）、黃疸（膽紅素濃度＞40.1umol/L）、高血脂（甘油三酯濃度＞7.0mmol/L），影響血清的滲透性并明顯增加反應(yīng)膜的背景顏色，對(duì)結(jié)果的判斷有影響，此類(lèi)標(biāo)本不宜使用。 7.檢測(cè)步驟 7.1 滴加二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入； 7.2 滴加100

4、ul血清于反應(yīng)板孔中，待完全滲入； 7.3 滴加二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入； 7.4 滴加二滴試劑Ⅱ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入； 7.5 滴加二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入； 7.6 操作完成后5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果。 8.檢測(cè)結(jié)果的判斷 陽(yáng)性：反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端出現(xiàn)紅色圓斑，為幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體陽(yáng)性。 陰性：反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端不出現(xiàn)紅色圓斑，為幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體陰性。 失效：反應(yīng)板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑，或C、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑，表示失效?？赡苁怯捎诓僮鞑徽_或試劑盒失效，應(yīng)重試。 9.參考范圍 正常:陰性 異常:陽(yáng)性。

5、 10.臨床意義 10.1 本方法僅用于定性檢測(cè)人血液中的胃幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體。 10.2 陽(yáng)性結(jié)果僅表明：胃幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體的存在，但不能作為胃幽門(mén)螺旋桿菌感染的唯一判斷標(biāo)準(zhǔn)，確診應(yīng)結(jié)合臨床癥狀及其他診斷技術(shù)。也可根據(jù)問(wèn)診結(jié)果，3-6個(gè)月內(nèi)沒(méi)有進(jìn)行根除治療者，陽(yáng)性結(jié)果即為現(xiàn)癥感染；3-6個(gè)月內(nèi)有進(jìn)行根除治療者，陽(yáng)性結(jié)果為疑似感染，需進(jìn)行其它方法檢測(cè)，或過(guò)一段時(shí)間進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。 10.3 病人曾經(jīng)感染過(guò)幽門(mén)螺旋桿菌，其抗體也在較長(zhǎng)時(shí)間存在于體內(nèi)，因此抗體陽(yáng)性結(jié)果并不能說(shuō)明病人正感染著幽門(mén)螺旋桿菌。 10.4 陰性結(jié)果表明：樣本中檢測(cè)不到幽門(mén)螺桿菌抗體，但不能完全排除胃幽門(mén)螺

6、旋桿菌感染的可能性，可能是胃幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體沒(méi)有出現(xiàn)或是抗體水平過(guò)低不能被本試劑盒檢測(cè)出來(lái)。也可根據(jù)問(wèn)診結(jié)果，3-6個(gè)月內(nèi)有進(jìn)行治療者，陰性結(jié)果即為根除治療成功；3-6個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行根除治療者，陰性結(jié)果即為未感染幽門(mén)螺桿菌。 11.檢驗(yàn)方法的局限性 11.1 本試劑僅用于檢測(cè)幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體而非直接檢測(cè)幽門(mén)螺旋桿菌，因而陽(yáng)性結(jié)果并不能確診是幽門(mén)螺旋桿菌感染。檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)，為達(dá)到診斷目的，對(duì)患者狀況的診斷應(yīng)結(jié)合患者臨床體征與癥狀和其他的檢測(cè)結(jié)果綜合分析。 11.2 抗體含量低的血清樣本，不能被檢測(cè)出來(lái)是可能的。部分幽門(mén)螺旋桿菌感染的患者，

7、不產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生少量的抗體。此時(shí)，可能顯示陰性結(jié)果。 11.3 當(dāng)檢測(cè)結(jié)果與臨床不符時(shí)，應(yīng)用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)或用其他方法確診。 11.4 感染初期，IgG未產(chǎn)生或滴度很低會(huì)導(dǎo)致陰性結(jié)果，應(yīng)提示患者在7-14天內(nèi)復(fù)查，復(fù)查時(shí)同時(shí)平行檢測(cè)上次采集的標(biāo)本以確認(rèn)是否出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)陽(yáng)或滴度明顯升高。 11.5 免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清學(xué)抗體檢測(cè)的參考價(jià)值有限。 12.產(chǎn)品性能指標(biāo) 12.1 滲透時(shí)間：膜的滲透時(shí)間小于60秒。 12.2 符合率：陽(yáng)性符合率和陰性符合率為100%。 12.3 批內(nèi)精密度：陽(yáng)性參考品和陰性參考品檢測(cè)的重復(fù)性為100%。 12.4 批間精密度：陽(yáng)

8、性參考品和陰性參考品檢測(cè)的重復(fù)性為100%。 12.5 最低檢出限：陽(yáng)性參考品用陰性參考品進(jìn)行倍比稀釋至1:2作為最低檢出限。 12.6 交叉反應(yīng)：本試劑盒的檢測(cè)與解脲支原體抗體陽(yáng)性血清存在交叉反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)與以下病原體抗體陽(yáng)性血清存在交叉反應(yīng)：乙肝病毒、丙肝病毒、克萊伯氏菌。 12.7 干擾試驗(yàn)：樣本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時(shí)不影響結(jié)果，當(dāng)RF濃度高于350IU/ml時(shí)，有假陽(yáng)性出現(xiàn)，ANA、ENA自身抗體，通常不影響試驗(yàn)結(jié)果。血清中膽紅素、血紅蛋白、血脂在通常情況下不會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，但當(dāng)它們的濃度分別超過(guò)40.1umol/L、1.96g/L、7.0mmol/L將干擾結(jié)果

9、觀察，此類(lèi)標(biāo)本不宜使用。 13.注意事項(xiàng) 13.1 本品僅供體外檢測(cè)之用。 13.2 在盒簽標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。 13.3 血液收集后盡快分離血清或血漿避免溶血，只有清亮的非溶血樣本可用。 13.4 請(qǐng)將低溫保存的血清或血漿樣本恢復(fù)到室溫后使用，不要反復(fù)凍融。 13.5試驗(yàn)中所有樣品均應(yīng)作為傳染性物品處理。 13.6檢測(cè)線的顏色強(qiáng)度隨樣品中幽門(mén)螺桿菌尿素酶抗體濃度的變化而變化，但不宜用于檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌尿素酶抗體的濃度。 14.參考文獻(xiàn): 14.1 尚紅，王毓三，申子瑜主編《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》 14.2 三明博峰生物科技有限公司幽門(mén)螺旋桿菌尿素酶抗體檢測(cè)使用說(shuō)明書(shū) 4 參考分析#