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1、第一節(jié) 沙門氏菌檢驗,食品中腸道致病桿菌的檢驗,沙門氏菌（Salmonella）是腸桿菌科中最復雜的菌屬,1880年Eberth首先發(fā)現(xiàn)傷寒沙門氏菌，1885年Salmon與Smith又分離出豬霍亂沙門氏菌，以后取名Salmon氏之名為本菌屬屬名。已發(fā)現(xiàn)近2000個血清型，我國已發(fā)現(xiàn)近200個血清型。 對人類有致病性 腸熱癥傷寒沙門菌，甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌 食物中毒鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌 敗血癥豬霍亂沙門菌最常見,生物學性狀,形態(tài)染色 符合腸桿菌特點，革蘭氏染色陰性短桿菌，無莢膜，無芽胞，多數(shù)有鞭毛(周生毛菌)，有動力（也有無動力的變種）。,鼠傷寒沙門菌 （
2、samonella typhimurium）,沙門氏菌革蘭氏染色照片,,培養(yǎng)特性,EMB、SS上呈無色透明乳糖不發(fā)酵菌落,沙門氏菌SS平板培養(yǎng)物（黑色菌落）,鼠傷寒沙門,鼠傷寒沙門在SS培養(yǎng)基上形成半透明較小菌落,在酸性條件下菌落中心產(chǎn)生H2S(SS培養(yǎng)基）,,生化反應 乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多數(shù)H2S+，動力+，尿素（-） 抗原結構 O抗原特異性低、穩(wěn)定、分群（組） H抗原特異性高，不穩(wěn)定，分型 Vi抗原（毒力抗原）不穩(wěn)定，可阻止“O”凝集 抵抗力 不強,致病性與免疫性,致病物質(zhì) 侵襲力 菌毛吸附 型分泌系統(tǒng)穿入細胞，擴散 Vi抗原微莢膜（抗吞噬） 內(nèi)毒素 外毒素個別（鼠傷寒沙門菌）
3、產(chǎn)生，與ETEC腸毒素相似,,腸熱癥 臨床過程 潛伏期2W 發(fā)病初期：第1W（第一次菌血癥）、高熱、肝脾腫大、皮疹、WBS等全身中毒癥狀，此期血液（80%）、骨髓（90%（+）有大量細菌 發(fā)病極期：第2-4W，全身癥狀持續(xù)加重，此期血、骨髓中仍有菌，但糞便（60%）、尿（20%）、皮疹液中可查到細菌， 由于型變態(tài)反應并發(fā)癥發(fā)生， 血液抗體達到陽性標準肥達反應 恢復期：第四周末，體溫下降，癥狀消失，恢復期帶菌1年（糞便仍陽性），血液抗體仍高,胃腸炎（食物中毒） 潛伏期短，6-24h，起病急，病程短2-4天，發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉 敗血癥 經(jīng)口感染，經(jīng)腸道入血，敗血癥癥狀明顯而腸道癥狀不
4、明顯 帶菌者 健康帶菌者，恢復期帶菌者 免疫性 腸熱癥，病后免疫牢固，其它可重復感染,微生物學檢查與防治,分離培養(yǎng)與鑒定 標本采取: 腸熱癥：第1-2W，血、骨髓；第2-3W，糞便、 食物中毒：糞便、嘔吐物、可疑食物 敗血癥：血 帶菌者：糞便 分離鑒定： 增菌（血、骨髓）EMB、SS生化反應血清鑒定,血清學診斷肥達反應（Widal）,原理 用已知傷寒沙門氏菌O抗原及H 抗原，以及引起副傷寒的沙門氏菌H抗原與待檢血清作凝集試驗，測定待檢血清中有無相應抗體及其效價。（TO、TH、PA、PB） 方法：試管凝集法（定量） TO1：80，TH1：160，PA、PB均1：80才有意義 動態(tài)觀察：雙份血清
5、抗體四倍升高有診斷意義,,臨床意義 O抗體（IgM）， H抗體（IgG） O 、H抗體均升高，患傷寒的可能性大 O 、H抗體不升高，患傷寒的可能性小 只有H升高，則可能是預防接種過或非特異性回憶反應， 只有O升高而H不高，則可能是感染早期或其他沙門菌的交叉反應。,沙門氏菌主要寄生在人體、哺乳動物和家禽的腸道內(nèi)，可隨同糞便的排泄污染水源，食品與藥品。沙門氏菌的種類繁多，有些對人有致病力，如傷寒沙門菌和副傷寒沙門氏菌；有些對動物有致病力，如鴨沙門氏菌和雛沙門氏菌；尚有一些對人和動物皆有致病力，如腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌等。它們能引起人類傷寒癥、急性胃腸炎和敗血癥等。 帶有這些細
6、菌的人與動物?？芍苯踊蜷g接地污染藥品的生產(chǎn)環(huán)境、工具設備和原料輔料，以及半成品和成品等。特別是用動物臟器制成的藥品,污染機率較高，影響患者用藥安全，并有可能通過藥品的流通而傳播。故將沙門氏菌，應列為某些藥品的必檢項目。,,（一）增菌培養(yǎng)： 取供試品稀釋液毫升，接種于備妥的毫升膽鹽乳糖增菌液內(nèi)。置培養(yǎng)小時，進行增菌。,,（二）分離培養(yǎng)： 取上述增菌培養(yǎng)物，劃線接種于瓊脂和瓊脂平板各一個（劃線時，適當增加瓊脂平板的涂抹量-環(huán)，可提高陽檢率），置培養(yǎng)-小時。凡沙門氏菌，在和瓊脂平板上，菌落一般無色透明或半透明，圓形，周邊整齊，表面光滑濕潤，在瓊脂平板上中心有時呈黑褐色。如有上述疑似菌落，應選取-個分
7、別進行純培養(yǎng)，按下列方法鑒別。,,傷寒沙門菌在SS瓊脂平板上的菌落特征,傷寒沙門菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上的菌落特征,傷寒沙門菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上呈紫色菌落,沙門氏菌SS平板培養(yǎng)物（黑色菌落）,沙門氏菌在BS平板上的典型菌落（產(chǎn)H2S菌株,沙門氏菌在BS平板上的菌落（Salmonella typhimurium）,（三）初步鑒別： 將上述純培養(yǎng)物分別穿刺并劃線接種三糖鐵（）瓊脂，置培養(yǎng)小時。凡在瓊脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈堿性，不變色），下層底部分解葡萄糖呈酸性變黃色（有氣泡或無氣泡），有動力或無動力，以及產(chǎn)生或不產(chǎn)生黑褐色的硫化氫反應，并經(jīng)涂片染色鏡檢為革蘭氏
8、陰性桿菌，都應繼續(xù)做生化試驗和血清學檢查。,沙門氏菌三糖鐵,沙門氏菌革蘭氏染色照片,（四）生化試驗： 取上述疑似菌落的純培養(yǎng)物、分別接種至葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖等發(fā)酵管培養(yǎng)基，并接種蛋白胨水和尿素培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)-天，觀察結果。沙門氏菌一般生化反應和動力檢查，絕大數(shù)應為、葡萄糖，乳糖，麥芽糖，甘露醇，蔗糖，靛基質(zhì)，硫化氫，尿素酶，動力。當一般生化試驗符合時，應做賴氨酸脫羧酶及氰化鉀試驗。沙門氏菌賴氨酸脫羧酶試驗，氰化鉀。,沙門氏菌氨基酸脫羧酶,沙門氏菌蛋白胨水,尿素瓊脂實驗出現(xiàn)異常,原因可能是沙門氏菌變種,,(五）動力試驗： 取上述純培養(yǎng)物穿刺接種半固體培養(yǎng)基，于培養(yǎng)小時后，觀察動力表現(xiàn)。無動力表現(xiàn)的培養(yǎng)物，應在室溫（左右）保留-天后，再觀察。,,（六）血清學檢查： 取上述疑似菌落的瓊脂培養(yǎng)物少許，與沙門氏菌多價血清作玻片凝集試驗，并以生理鹽水作對照試驗。若凝集試驗為陰性反應時，應將菌苔制成濃菌液在水浴中保溫分鐘后再進行-多價血清凝集試驗。將反應結果，結合生化試驗，判定之。,
食品中沙門氏菌檢驗.ppt
