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1、兩個(gè)主要目的： (1)從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌； (2)統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌。,,水生耐熱細(xì)菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高溫的Taq DNA聚合酶 美國(guó)微生物學(xué)科布魯克（T.Brock) 1966年發(fā)現(xiàn)耐熱細(xì)菌,研究思路,,（一）篩選菌株,,尿素分子的立體結(jié)構(gòu),CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3,,脲 酶,分解尿素的細(xì)菌:,在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。,選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基配方,,背景知識(shí),測(cè)定微生物數(shù)量的方法：,1直接計(jì)數(shù)法： 最常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。,測(cè)定微生物數(shù)量
2、的方法：,,背景知識(shí),1直接計(jì)數(shù)法： 最常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。 先將待測(cè)樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來(lái)計(jì)算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)。,測(cè)定微生物數(shù)量的方法：,,背景知識(shí),優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、能觀察微生物的形態(tài)特征。,優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、能觀察微生物的形態(tài)特征。 缺點(diǎn)：難以計(jì)數(shù)微小量多的細(xì)菌。 一般用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)。,2間接計(jì)數(shù)法： 最常用稀釋平板計(jì)數(shù)法。,,,（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,,,（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)： 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此，恰當(dāng)?shù)?/p>
3、稀釋度是成功地統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。,,每克樣品中的菌株數(shù) = (CV)M,C：某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均 菌落數(shù) V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積 (ml) M：稀釋倍數(shù),統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。,注意：,兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 1.第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230
4、。 2.第二位同學(xué)在該深度下涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212和256，該同學(xué)以這三個(gè)平板菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。,,實(shí)例1,,你認(rèn)為哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？,?,,你認(rèn)為哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？,第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說(shuō)服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。,?,因此，這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改
5、進(jìn)，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。,說(shuō)明設(shè)置重復(fù)組的重要性。,,在做本課題的實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落。但是，其它同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落。 其他同學(xué)認(rèn)為A同學(xué)的結(jié)果有問(wèn)題。他們分析可能是A同學(xué)的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或者培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)，因而導(dǎo)致不能分解尿素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。,實(shí)例2,但是，A同學(xué)確信自己的實(shí)驗(yàn)操作準(zhǔn)確無(wú)誤，與其他同學(xué)的結(jié)果之所以不相同，是因?yàn)樽约核x用的
6、土壤樣品不同。但是，A同學(xué)在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候并沒(méi)有設(shè)置對(duì)照，因而此時(shí)也拿不出令同學(xué)們信服的證據(jù)。 你能通過(guò)設(shè)置對(duì)照，幫助A同學(xué)排除上述兩個(gè)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素嗎？,一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個(gè)原因，可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明。 一種方案：可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。,另一種方案： 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。 通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。,,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù),
高二生物《土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù)》
