飼料中沙門氏菌的監(jiān)測概況及常規(guī)檢測技術(shù)應(yīng)用.pptx

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1、 飼料中沙門氏菌監(jiān)測情況及常規(guī)檢測技術(shù)的應(yīng)用 常 規(guī) 沙 門 氏 菌 檢 測 技 術(shù) 的 應(yīng) 用 背 景 1 飼 料 中 沙 門 氏 菌 污 染 情 況23 背 景 沙門氏菌的檢測是各國檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對多種食品的必檢項(xiàng)目之一公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一 引起食物中毒的重要病原菌 在各類細(xì)菌性的食物中毒中沙門氏菌常居前列 不 得檢 出飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)歐盟ICMSFCAC 沙 門 氏 菌 DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914)美 國 獸 醫(yī) 微 生 物 和 病 理 學(xué) 家 。是 美 國 授 予 的 第 一 位 獸 醫(yī) 學(xué)博 士 。 1884年 任 美

2、國 農(nóng) 業(yè) 部畜 牧 局 首 任 局 長 。 他 首 次 從病 豬 中 分 離 出 豬 霍 亂 沙 門 氏菌 。 在 醫(yī) 學(xué) 微 生 物 中 通 用 的沙 門 氏 菌 一 詞 ， 就 是 為 紀(jì) 念他 而 以 他 的 名 字 命 名 的 。 沙 門 氏 菌（ Salmonella） 一 群 形 態(tài) 、 培 養(yǎng) 、 生 化 反 應(yīng)和 抗 原 構(gòu) 造 相 類 似 的 桿 菌 ，種 類 繁 多 。 已 發(fā) 現(xiàn) 2500多 種 血 清 型 ， 我國 目 前 發(fā) 現(xiàn) 的 有 200多 種 血 清型 。 沙 門 氏 菌 主 要 生 物 學(xué) 性 狀革 蘭 氏 陰 性 短 桿 菌 ，無 芽 孢 和 莢 膜 ，

3、 有鞭 毛 （ 除 雞 白 痢 沙門 氏 菌 、 雞 傷 寒 沙門 氏 菌 外 ） ， 大 多數(shù) 具 有 毛 。需 氧 或 兼 性 厭 氧 ； 普 通 營 養(yǎng) 瓊 脂 上生 長 良 好 。7-45 均 可 生 長 ， 最 適 溫 度 37 ，最 適 pH6.8-7.8。 抵 抗 力 60 20-30min即被殺死在水中能生存23周在糞便中可生存12個月在冰中能生存3個月 沙 門 氏 菌 生 物 學(xué) 特 性 傷 寒 沙 門 氏 菌 、 雞 傷 寒 沙 門 氏 菌 及 一 部 分 雞 白 痢沙 門 氏 菌 發(fā) 酵 糖 不 產(chǎn) 氣 ， 大 多 數(shù) 雞 白 痢 沙 門 氏 菌 不 發(fā)酵 麥 芽 糖 。

4、 O抗 原 Vi抗 原H抗 原 O抗 原 ： 為 脂 多 糖 ， 多 糖 部 分 決 定 其 特 異 性 ， 耐 熱 (100 、2.5h不 破 壞 )， 其 特 異 性 不 易 喪 失 或 變 異 。 H抗 原 ： H抗 原 存 在 于 鞭 毛 中 ， 蛋 白 質(zhì) ， 不 耐 熱 ， 60 、30-60min及 酒 精 作 用 均 可 破 壞 其 抗 原 性 ， 能 抵 抗 甲 醛 。 Vi抗 原 ： 是 一 種 N-乙 酰 -D-半 乳 糖 胺 糖 醛 酸 聚 合 物 ， 60加 熱 1h即 破 壞 其 凝 集 性 和 免 疫 原 性 。 DHL:無色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色酚紅黃綠

5、：菌落呈紅色透明，同時培養(yǎng)基顏色變紅HE：藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色科馬嘉顯色培養(yǎng)基：呈紫色或紫紅色沙 門 氏 菌 在 不 同 選 擇 瓊 脂 平 板 上 的 菌 落 特 征 沙 門 氏 菌傷 寒 和 副 傷寒 急 性 腸 胃 炎 敗 血 癥內(nèi) 毒 素 對 人 的 危 害 據(jù) 調(diào) 查 ， 沙 門 氏 菌 是 美 國 食 物 中 毒 致 死 的 主 要 原 因 。 美 國 每 年 大 約 報(bào) 告 40000例 沙 門 氏 菌 感 染 病 例 。 但 實(shí) 際 的 感 染 人 數(shù) 可 能 要 達(dá) 20倍 以 上 ， 因 為 許 多 輕 型 病 人 可能 未 確 診 ， 據(jù) 不 完 全

6、 統(tǒng) 計(jì) ， 每 年 大 約 1000人 死 于 急 性 沙 門 氏 菌 感 染 。 沙 門 氏 菌 對 動 物 的 危 害 畜 禽 食 用 含 有 沙 門 氏 菌 的 飼 料 ， 就 可 引 起 疾 病 或帶 菌 。 一 般 情 況 下 畜 禽 腸 道 帶 菌 率 比 較 高 。 當(dāng) 動 物因 患 病 、 衰 弱 、 營 養(yǎng) 不 良 、 疲 勞 以 致 抵 抗 力 降 低 時 ，腸 道 中 的 沙 門 氏 菌 即 可 經(jīng) 腸 系 膜 淋 巴 結(jié) 和 淋 巴 組 織進(jìn) 入 血 液 引 起 全 身 感 染 ， 甚 至 死 亡 。 （ 1） 急 性 敗 血 癥 多 見 于 斷 奶 前 后 （ 24

7、月 齡 ） 仔 豬 ， 主要 由 豬 霍 亂 沙 門 氏 菌 引 起 。 發(fā) 熱 ， 拒 食 ， 耳 根 ， 胸 前 ， 腹 下等 處 皮 膚 出 現(xiàn) 紫 斑 ， 后 期 見 下 痢 ， 呼 吸 困 難 ， 咳 嗽 跛 行 ， 經(jīng)14d死 亡 。 病 死 率 可 達(dá) 20 40 。（ 2） 亞 急 性 和 慢 性 表 現(xiàn) 為 ： 體 溫 升 高 ， 畏 寒 ； 結(jié) 膜 炎 ， 頑 固 性 下 痢 ， 伴 以 消 瘦 ， 脫 水 而 死 ； 部 分 病 豬 在 病 中 后 期 皮膚 出 現(xiàn) 彌 漫 性 濕 疹 。 （ 1） 雛 雞 感 染 ： 引 起 敗 血 癥 ， 可 造 成 大 批 死 忙

8、； 病 雞表 現(xiàn) 虛 弱 ， 口 渴 ， 食 欲 不 振 ， 腹 瀉 ， 發(fā) 育 遲 滯 等 。（ 2） 成 年 雞 ： 最 常 見 產(chǎn) 蛋 量 降 低 或 停 止 。 另 外 可 引 起卵 巢 炎 ， 可 在 卵 黃 內(nèi) 帶 菌 而 傳 給 幼 雛 。 （ 1） 犢 牛 ： 體 溫 升 高 ， 呼 吸 困 難 ； 排 出 血 絲 糞 便 ； 病期 延 長 時 ， 腕 和 跗 關(guān) 節(jié) 可 能 腫 大 ， 有 時 伴 有 支 氣 管 炎 和肺 炎 癥 狀 。（ 2） 成 年 牛 ： 常 有 高 熱 ， 昏 迷 ， 食 欲 廢 絕 ， 呼 吸 困 難 ，體 力 迅 速 衰 竭 ； 懷 孕 母 牛

9、多 數(shù) 發(fā) 生 流 產(chǎn) 。 傳 播 途 徑最 主 要 的 傳 播 途 徑 是 水 、 土 壤 和 飼 料病 菌 隨 人 和 動 物的 糞 尿 等 排 泄 物及 病 死 畜 禽 來 污染 土 壤 和 水 源 因 宰 殺 患 病 、 帶菌 的 畜 禽 而 造 成病 菌 的 散 布 ， 致使 健 康 動 物 的 胴體 和 環(huán) 境 受 到 污染 飼 料 和 飲 水 的 污染 ， 是 導(dǎo) 致 畜 禽沙 門 氏 菌 病 以 及相 互 傳 染 的 主 要原 因 危 害 程 度 分 類 中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 人 間 傳 染 的 病 原 微 生 物 名 錄 序 號 病 原 菌 名 稱 危 害

10、程度 分 類 實(shí) 驗(yàn) 活 動 所需 生 物 安 全實(shí) 驗(yàn) 室 級 別學(xué) 名 中 文 名 大 量 活 菌 操作1 S a l m o n e l l a choleraesuis 豬 霍 亂 沙 門 菌 第 三 類 BSL-22 Salmonella enterica 腸 沙 門 菌 第 三 類 BSL-23 Salmonella meleagridis 火 雞 沙 門 菌 第 三 類 BSL-24 Salmonella paratyphi A,B,C 甲 、 乙 、 丙 型 副 傷寒 沙 門 菌 第 三 類 BSL-2 5 Salmonella typhi 傷 寒 沙 門 菌 第 三 類 BS

11、L-26 Salmonella typhimurium 鼠 傷 寒 沙 門 菌 第 三 類 BSL-2 加 強(qiáng) 飼 料 的 衛(wèi) 生 管 理 ， 防 止 沙 門 氏 菌 的 污 染 ，不 僅 是 發(fā) 展 畜 禽 生 產(chǎn) 的 需 要 ， 也 是 減 少 人 類 感 染 沙門 氏 菌 、 預(yù) 防 食 物 中 毒 的 一 個 重 要 環(huán) 節(jié) 。意 義 Torres G J等2011年對西班牙3844個飼料樣品檢測發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌的檢出率為4.8% 美國對12個牛場的295份飼料樣品進(jìn)行沙門氏菌檢測，檢出率為9.8% 國 外 沙 門 氏 菌 污 染 情 況 傳 統(tǒng) 檢 測 方 法 分 子 生 物 學(xué) 方

12、法免 疫 學(xué) 方 法常 規(guī) 沙 門 氏 菌 檢 測 技 術(shù) 國 內(nèi) 現(xiàn) 行 標(biāo) 準(zhǔn)分子生物學(xué)方法免疫學(xué)方法傳統(tǒng)檢測方法GB/T13091-2002（培養(yǎng)法）GB/T 4789.4-2010（培養(yǎng)法）GB/T29642-2012（ PCR法 ）SN/T 1059.7-2010（ 實(shí) 時 熒 光 PCR法 ） GB/T 22429-2008（ 酶 聯(lián) 免 疫 法 ）DB34/T816-2008（ 免疫 色 譜 反 應(yīng) 法 ） 傳 統(tǒng) 檢 測 方 法 前 增菌選 擇性 增菌 分 離 培養(yǎng)生 化 鑒定 血 清 學(xué)鑒 定傳 統(tǒng) 檢 測 方 法原 理沙 門 氏 菌生 化 特 性修 復(fù) 受 損 傷的 沙 門

13、 氏 菌 飼 料 中 含大 量 雜 菌 主 要 培 養(yǎng) 基 、 試 劑 、血 清 緩 沖 蛋 白 胨 水（ BPW） 氯 化 鎂 -孔 雀 綠增 菌 液 （ RV） 亞 硒 酸 鹽 胱 氨酸 增 菌 液 （ SC） 酚 紅 黃 綠 瓊 脂 DHL瓊 脂 營 養(yǎng) 瓊 脂 色 氨 酸 肉 湯 賴 氨 酸 脫 羧 酶肉 湯 尿 素 酶 氰 化 鉀 培 養(yǎng) 基 甘 露 醇 山 梨 醇 -半 乳 糖 苷 沙 門 氏 菌 O， Vi， H型 血清 主 要 儀 器 設(shè) 備 與 材料高 壓 滅 菌 鍋干 熱 滅 菌 箱培 養(yǎng) 箱水 浴 鍋 接 種 環(huán)培 養(yǎng) 瓶 或 三 角 瓶 量 筒平 皿 25g樣 品 22

14、5ml BPW36 16-20h 1ml BPW增 菌 液+10ml SC MM增 菌 液 在 42 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 24h0.1ml BPW增 菌液 +10ml MM 分 別 從 MM和 SC增 菌液 中 取 1環(huán) ， 接 種 到酚 紅 黃 綠 和 DHL瓊 脂 上 培 養(yǎng)在 36 培 養(yǎng) 20-24h DHL瓊 脂 在36 培 養(yǎng) 24h 分 別 選 擇 性 培 養(yǎng) 基上 挑 選 可 以 菌 落 進(jìn)行 TSI等 生 化 鑒 定 TSI生化試驗(yàn) 底 層 產(chǎn) H2S底 層 產(chǎn) 酸斜 面 產(chǎn) 堿斜 面 底 層產(chǎn) 酸 產(chǎn) 堿底 層 產(chǎn) 酸斜 面 產(chǎn) 堿底 層 產(chǎn) H2S 產(chǎn)

15、酸 產(chǎn) 氣產(chǎn) 酸 產(chǎn) 氣 產(chǎn) H2S只在TSI產(chǎn)堿的情況下可判定無沙門氏菌，其余任何情況均需進(jìn)行生化鑒定 生 化 鑒 定 O.5個 麥 氏 濁度 的 菌 懸 液依 次 在 每 個 安 瓿瓶 中 滴 加 菌 懸 液2 3滴 。第 一 步 第 二 步 第 三 步 生 化 鑒 定 試 劑 套 裝色氨酸肉湯經(jīng)36，1824h培養(yǎng)后滴加靛基質(zhì)試劑， 片刻觀察結(jié)果，陽性為玫瑰紅色 色氨酸脫羧酶及對照和氰化鉀及對照轉(zhuǎn)種結(jié)束后需滴加液體石蠟覆蓋試驗(yàn)管方可進(jìn)行培養(yǎng) 靛基質(zhì)試驗(yàn)+時補(bǔ)做甘露醇山梨醇試驗(yàn)，試驗(yàn)陽性后進(jìn)行血清學(xué)鑒定 TSI-時，進(jìn)行ONPG試驗(yàn)，ONPG陰性時進(jìn)行血清學(xué)鑒定H2S+、靛基質(zhì)- 、尿素-

16、、KCN-、賴氨酸+后進(jìn)行血清學(xué)鑒定 結(jié) 果 判 定 其 他 商 品 化 生 化 鑒 定 系 統(tǒng)VITEK GNI+ 應(yīng) 用 一 系 列 小 的 多 孔 的 聚 苯 乙 烯 卡 片 進(jìn) 行 測試 ， 卡 片 含 有 干 燥 的 抗 菌 藥 物 和 生 化 基 質(zhì) 。 先 制備 一 定 濃 度 的 欲 鑒 定 菌 株 的 菌 懸 液 ， 然 后 將 菌 懸液 接 種 到 各 種 細(xì) 菌 的 小 卡 上 ， 將 其 放 入 具 有 讀 數(shù)功 能 的 孵 箱 內(nèi) ， 每 隔 一 定 時 間 ， 儀 器 會 自 動 檢 測培 養(yǎng) 基 的 發(fā) 酵 情 況 ， 并 換 算 成 能 被 計(jì) 算 機(jī) 所 接

17、受的 生 物 編 碼 。 最 后 由 計(jì) 算 機(jī) 判 定 ， 打 印 出 鑒 定 結(jié)果 。 VITEK 6-8h 商 品 化 生 化 鑒 定 系 統(tǒng)API 20E API 20E 生 化 鑒 定 是 根 據(jù) 快 速 酶 促 反 應(yīng) 及 代 謝產(chǎn) 物 的 檢 測 技 術(shù) 發(fā) 展 而 來 的 一 種 細(xì) 菌 編 碼 鑒 定 法 ，廣 泛 應(yīng) 用 于 臨 床 、 食 品 中 革 蘭 氏 陰 性 桿 菌 的 快 速鑒 定 。 API 20E 18-24h API 20E第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結(jié)果判定ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IN

18、D VP GEL GLU MAN INO SOR RGA SAC MEL AMY ARA OX1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 反應(yīng)結(jié)果- + + + + + - - - - - + + + + + - + - + -沙門氏菌應(yīng)得數(shù)值0 2 4 1 2 4 0 0 0 0 0 4 1 2 4 1 0 4 0 2 0組合編碼 6 7 0 4 7 5 2 BD PhoenixTM 100 2-8h 血 清 學(xué) 鑒 定 陰 性 陽 性 GB/T29642-2012 飼 料 中 沙 門 氏 菌 的 快 速 檢 測 方 法 -聚 合 酶 鏈 式 反 應(yīng)

19、（ PCR） 法 SN/T 1059.7-2010 進(jìn) 出 口 食 品 中 沙 門 氏 菌 檢 測 方 法 -實(shí) 時 熒 光 PCR法現(xiàn) 行 標(biāo) 準(zhǔn) PCR技 術(shù) 原 理 PCR技 術(shù) 是 是 通 過 模 擬體 內(nèi) DNA復(fù) 制 的 方 式 ，在 體 外 選 擇 性 地 將 DNA目 的 片 段 進(jìn) 行 短 時 間 內(nèi)大 量 擴(kuò) 增 的 技 術(shù) 。 25g樣 品 225ml BPW36 16-20h 1ml BPW增 菌 液+10ml SC RVS增 菌 液 在 41.5 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 243h0.1ml +10ml 大 豆 蛋 白 胨肉 湯 （ RVS） 煮 沸 離

20、心 PCR擴(kuò) 增 電 泳 檢 測GB/T29642-2012- 主 要 儀 器 設(shè) 備 、 培 養(yǎng) 基 、 試 劑PCR儀離 心 機(jī)微 量 移 液 器電 泳 儀凝 膠 成 像 儀分 析 天 平 緩 沖 蛋 白 胨水大 豆 蛋 白 胨肉 湯亞 硒 酸 鹽 胱氨 酸 增 菌 液 引 物Premix Taq DNA 聚 合 酶瓊 脂 糖Marker 2000TAE緩 沖 液溴 化 乙 錠（ EB）-GB/T29642-2012 DNA模 板 制 備 方 法方 法 一 ： 熱 裂 解 法 取 選 擇 性 增 菌 液 1ml于 離 心 管 中 ， 12000r/min離 心 10min， 滅 菌 去 離

21、 子 水 洗滌 2次 ， 最 后 用 0.2ml滅 菌 去 離 子 水 懸 浮 ， 煮 沸 10min， 將 離 心 管 迅 速 轉(zhuǎn) 移 至 冰浴 中 冷 卻 ， 10000r/min離 心 5min， 取 上 清 液 作 為 模 板 。方 法 二 ： 試 劑 盒 可 選 用 商 業(yè) 試 劑 盒 。 -GB/T29642-2012 PCR擴(kuò) 增 反 應(yīng) 體 系 反 應(yīng) 程 序 -GB/T29642-2012 PCR結(jié) 果 分 析 及 判 定結(jié) 果 判 定 ： 在 陰 性 對 照 無 條 帶 ， 陽 性 對 照 有 條 帶 的 前 提 下 ， 如 果 待 測 樣 品 再 330處 未 出 現(xiàn) 相

22、 應(yīng) 大 小 的 擴(kuò) 增 條 帶 ， 則 可 報(bào)告 未 檢 出 沙 門 ； 如 果 待 測 樣 品 在 330bp處 出 現(xiàn) 擴(kuò) 增 條 帶 ， 則 為 疑 似 陽 性 樣 品 ，需 用 GB/T 13091進(jìn) 行 確 證 ， 最 終 結(jié) 果 以 后 者 為 準(zhǔn) 。-GB/T29642-2012 實(shí) 時 熒 光 PCR原 理實(shí) 時 熒 光 PCR是 指 在 PCR反 應(yīng) 體 系中 加 入 熒 光 基 團(tuán) ， 利 用 熒 光 信 號積 累 實(shí) 時 監(jiān) 測 整 個 PCR進(jìn) 程 ， 最 后通 過 陽 性 對 照 、 Ct值 及 擴(kuò) 增 曲 線對 模 板 進(jìn) 行 定 性 分 析 的 方 法 。 25

23、g樣 品 225ml BPW36 16-20h 1ml BPW增 菌 液+10ml SC RVS增 菌 液 在 41.5 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 243h0.1ml +10ml 大 豆 蛋 白 胨肉 湯 （ RVS） 煮 沸 離 心 反 應(yīng) 體 系 擴(kuò) 增 曲 線實(shí) 時 熒 光 PCR法 主 要 儀 器 設(shè) 備 、 培 養(yǎng) 基 、 試 劑 熒 光 定 量PCR儀 離 心 機(jī) 微 量 移 液 器 恒 溫 水 浴 鍋 高 壓 滅 菌 鍋 緩 沖 蛋 白 胨水 亞 硒 酸 鹽 胱氨 酸 增 菌 液 四 硫 磺 酸 鈉孔 雀 綠 增 菌液 引 物 探 針 DNA提 取 試劑 盒 Taq

24、DNA聚合 酶-SN/T 1059.7-2010 模 板 DNA的 制 備方 法 一 ： 熱 裂 解 法 取 增 菌 液 1ml， 置 于 離 心 管 中 ， 5000r/min離 心 5min， 滅 菌 生 理 鹽 水 洗 滌 2次 ，最 后 用 1ml滅 菌 去 離 子 水 懸 浮 ， 煮 沸 15min， 10000r/min離 心 5min， 取 上 清 液作 為 模 板 。方 法 二 ： 試 劑 盒 法 參 照 美 國 Promega公 司 生 產(chǎn) 的 DNA抽 提 試 劑 盒 ， 或 其 他 等 效 產(chǎn) 品 操 作 程 序 進(jìn)行 。 -SN/T 1059.7-2010 實(shí) 時 熒

25、光 PCR擴(kuò) 增反 應(yīng) 體 系 （ 25ul） 反 應(yīng) 條 件10 PCR緩 沖 液 2.5uldNTPs 1ul上 游 引 物 1ul下 游 引 物 1ul探 針 1ul模 板 2ulTaq DNA 酶 0.5ul 雙 蒸 水 16ul 1個 循 環(huán) 95 10min40個 循 環(huán) 95 15s65 30s-SN/T 1059.7-2010 樣 品 Ct值 35時 ， 報(bào) 告 沙 門 氏 菌 篩 選 陽性 ； 樣 品 Ct值 介 于 35-40之 間 ， 重 復(fù) 一 次 ，如 果 Ct值 40， 且 曲 線 有 明 顯 的 對 數(shù)增 長 期 ， 報(bào) 告 沙 門 氏 菌 篩 選 陽 性 ， 否

26、則 ， 報(bào) 告 未 檢 出 ； 樣 品 Ct值 40時 ， 報(bào) 告 未 檢 出 。 篩 選 陽 性 的 樣 品 按 SN0170的 規(guī) 定 進(jìn) 行確 證 ， 以 確 證 結(jié) 果 為 準(zhǔn) 。結(jié) 果 分 析 及 判 定 -SN/T 1059.7-2010 其 他 分 子 生 物 學(xué) 技 術(shù)環(huán) 介 導(dǎo)等 溫 擴(kuò)增 技 術(shù)（LAMP） 多 重PCR技術(shù) 基 因 芯片 技 術(shù) 免 疫 學(xué) 方 法 現(xiàn) 行 標(biāo) 準(zhǔn)GB/T 22429-2008食 品 中 沙 門 氏 菌 、 腸 出 血 性 大 腸 埃希 氏 菌 O157及 單 核 細(xì) 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 的 快 速 篩 選 檢驗(yàn)（ 酶 聯(lián) 免

27、疫 法 ）DB 34/T 816-2008飼 料 中 沙 門 氏 菌 的 測 定（ 免 疫 色 譜 反 應(yīng) 法 ） 技 術(shù) 原 理 免 疫 學(xué) 檢 測 是 基 于 免 疫 學(xué) 理論 基 礎(chǔ) ， 根 據(jù) 抗 原 抗 體 的 特 異性 反 應(yīng) 而 進(jìn) 行 檢 測 的 技 術(shù) 。 沙 門 氏 菌 特 異 性 抗 體 是 快 速定 性 檢 測 的 基 礎(chǔ) 。 主 要 儀 器 設(shè) 備 、 培 養(yǎng) 基 、 試 劑酶 聯(lián) 免 疫 分析 儀漩 渦 混 合 器均 質(zhì) 器恒 溫 培 養(yǎng) 箱高 壓 滅 菌 鍋 緩 沖 蛋 白 胨水氯 化 鎂 孔 雀綠 增 菌 液亞 硒 酸 鹽 胱氨 酸 增 菌 液四 硫 磺 酸 鈉

28、孔 雀 綠 增 菌液 沙 門 氏 菌 酶聯(lián) 免 疫 試 劑盒-GB/T 22429-2008 檢 測 步 驟1. 前 增 菌 和 增 菌 ： 按 GB/T 4789.4中 處 理 。2. 移 取 1ml增 菌 液 到 滅 菌 小 試 管 中 ， 煮 沸 15min， 剩 余 增 菌 液 于 4 保 存 ， 以便 用 于 陽 性 確 認(rèn) 。3. 取 沙 門 氏 菌 酶 聯(lián) 免 疫 試 劑 盒 ， 與 15-30 的 環(huán) 境 中 放 置 30min。4. 取 適 量 煮 沸 后 的 增 菌 液 加 入 試 劑 盒 測 試 孔 中 ， 按 照 試 劑 盒 說 明 進(jìn) 行 操 作 。-GB/T 224

29、29-2008 結(jié) 果 判 定 經(jīng) 過 酶 聯(lián) 免 疫 過 程 后 ， 將 檢 測 反 應(yīng) 強(qiáng) 度 （ 熒 光 強(qiáng) 度 或 吸 收 度 ） ， 與 參 照 值 比較 ， 得 出 檢 驗(yàn) 結(jié) 果 。 -GB/T 22429-2008 其 他 免 疫 學(xué) 檢 測 技 術(shù)免 疫 學(xué)技 術(shù)免 疫 膠體 金 技術(shù) 免 疫 層析 技 術(shù)免 疫 印跡 技 術(shù)免 疫 熒光 技 術(shù) 國 標(biāo) 方 法 優(yōu) 缺 點(diǎn) 傳 統(tǒng) 檢 測 法 周 期 長 ， 需 要 4-7d， 過 程 繁 瑣 、 費(fèi) 時 費(fèi) 力 ； 傳 統(tǒng) 培 養(yǎng) 基 選 擇 性和 特 異 性 存 在 一 定 局 限 性 ， 檸 檬 酸 菌 屬 、 變 形

30、 桿 菌 等 均 可 能 對 沙 門 氏 菌 的 檢 測 產(chǎn)生 干 擾 ， 造 成 假 陽 性 。 PCR技 術(shù) 快 速 準(zhǔn) 確 ， 結(jié) 果 分 析 簡 單 ， 對 樣 品 要 求 不 高 ， 檢 測 時 間 短 ； 但 與 傳統(tǒng) 培 養(yǎng) 法 相 比 ， 操 作 復(fù) 雜 ， 殘 留 污 染 易 導(dǎo) 致 假 陽 性 ， 對 技 術(shù) 人 員 要 求 較 高 ， 需 要專 用 儀 器 設(shè) 備 。 ELISA法 具 有 靈 敏 度 高 、 檢 測 速 度 快 等 優(yōu) 點(diǎn) ， 但 費(fèi) 用 較 高 ， 需 要 專 用 儀 器 。 實(shí) 時 熒 光 PCR法 具 有 高 度 的 靈 敏 性 、 特 異 性 和 精 確 性 ， 與 PCR方 法相 比 ， 具 有 操 作 簡 單 、 所 需 時 間 短 等 優(yōu) 點(diǎn) ， 但 成 本 較 高 。非 國 標(biāo) 方 法 優(yōu) 缺 點(diǎn) THANK YOU!