《鼠傷寒沙門氏菌哺乳動物肝微粒體致突變性實驗ppt課件》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《鼠傷寒沙門氏菌哺乳動物肝微粒體致突變性實驗ppt課件（15頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課鼠傷寒沙門氏菌微粒體酶試驗Ames test 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課原 理鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌野 生 型 （ 原 養(yǎng) 型 ） 人 工 方 法 正 向 誘 變 鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌組 氨 酸 缺 陷 型 （ 異 養(yǎng) 型 ）誘 變 物 作 用 回 復(fù) 突 變 Ames是 檢 測 遺 傳 毒 理 學(xué) 的 體外 試 驗 ， 檢 測 終 點 是 基 因 突 變 通 過 統(tǒng) 計 回 復(fù) 突 變 的 菌 落 數(shù)判 斷 受 試 物 質(zhì) 的 致 突 變 性 高 低 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課S-9混 合 液 的 制 備 過 程 （ 使 需 要 代 謝 激 活
2、 的 物 質(zhì) 得 以 活化 ） 暴 露 肝 臟 ， KCL灌 注斷 頭 處 死 大 鼠 、 放 血 、 去 皮 取 出 肝 臟 ， 加 入 KCL剪 碎 制 成 勻 漿 ， 9000g離 心取 上 清 、 分 裝 、 凍 存 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課1 實 驗 用 菌 液 制 備 平 板 菌 落 計 數(shù) 法 ， 是 種 統(tǒng) 計 物 品 含 菌 數(shù) 的 有 效 方 法 。 方 法 如 下 ： 將待 測 樣 品 經(jīng) 適 當(dāng) 稀 釋 之 后 ， 其 中 的 微 生 物 充 分 分 散 成 單 個 細 胞 ， 取 一定 量 的 稀 釋 樣 液 涂 布 到 平 板 上 ， 經(jīng) 過 培 養(yǎng) ， 由
3、每 個 單 細 胞 生 長 繁 殖 而形 成 肉 眼 可 見 的 菌 落 ， 即 一 個 單 菌 落 應(yīng) 代 表 原 樣 品 中 的 一 個 單 細 胞 ；統(tǒng) 計 菌 落 數(shù) ， 根 據(jù) 其 稀 釋 倍 數(shù) 和 取 樣 接 種 量 即 可 換 算 出 樣 品 中 的 含 菌數(shù) 。2 菌 株 性 狀 鑒 定 （ 1） 組 氨 酸 營 養(yǎng) 缺 陷 型 （ 2） 深 粗 糙 突 變 測 定 （ 3） R因 子 的 鑒 定 （ 4） 切 除 修 復(fù) 缺 失 鑒 定 （ 5） 自 發(fā) 回 變 量 測 定 （ 6） 回 變 特 性 鑒 定實 驗 步 驟 與 方 法 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課深 粗 糙
4、 （ rfa） 特 性2 紫 外 線 敏 感 （ UvrB） 特 性3 抗 氨 芐 青 霉 素 （ R因 子 ） 特 性4 回 變 特 性 鑒 定6 組 氨 酸 需 求 特 性1 自 發(fā) 回 變 特 性5 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課1、 組 氨 酸 需 求 特 性 有 細 菌 生 長空 白 空 白組 氨 酸 -生 物 素賴 氨 酸 空 白 37 24h0.1ml菌 液 頂 層 底 層 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課2、 深 粗 糙 （ rfa） 特 性 0.1ml菌 液 頂 層 普 通 培 養(yǎng) 基 抑 菌 環(huán)濾 紙 片 （ 有 結(jié) 晶 紫 ） 37 24h 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課3
5、、 紫 外 線 敏 感 特 性 普 通 培 養(yǎng) 基 15W紫 外 燈33cm， 8s37 ， 24h 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課4、 抗 氨 卞 青 霉 素 （ R因 子 ） 特 性 37 ， 24h青 霉 素普 通 培 養(yǎng) 基 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課5、 自 然 回 變 特 性 0.1ml菌 液 頂 層 底 層 37 ， 24h 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課菌 株 基 因 型組 氨 酸缺 陷 脂 多 糖屏 蔽 缺 失 抗 氨 卞西 林 抗 四 環(huán)素 uvrB修復(fù) 缺 陷 自 發(fā) 回 變（ -S9）TA97 + + + - + 90-180TA98 + + + - + 30-50
6、 TA100 + + + - + 120-200TA102 + + + - + 240-320 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課6、 回 變 特 性 鑒 定0.1ml菌 液0.1ml致 突 變 物 0.2-0.5mlS-9頂 層 底 層 37 ， 24h 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課實 驗 設(shè) 計 原 則 受 試 物 最 低 劑 量 為 每 皿 0.1 g一 般 選 用 45個 劑 量 每 個 劑 量 應(yīng) 做 2或 3個 平 行 平 皿 設(shè) 立 陽 性 對 照 和 陰 性 （ 溶 劑 ） 對 照 受 試 物 最 高 劑 量 為 每 皿 5mgAmes試 驗 設(shè) 計 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗
7、課將 頂 層 培 養(yǎng) 基 倒 入 底 層 培 養(yǎng) 基 中 ， 凝固 后 放 入 濾 紙 片 ， 將 受 試 物 點 在 紙 片上 放 入 底 層 ， 37 培 養(yǎng) 48h觀 察 結(jié) 果 將 受 試 物 0.1ml、 菌 液 0.1ml分 別 加 入頂 層 培 養(yǎng) 基 中 ， 倒 入 底 層 培 養(yǎng) 基 中 ，凝 固 后 37 培 養(yǎng) 48h觀 察 結(jié) 果Ames試 驗 方 法 及 結(jié) 果 評 價 點 樣 紙 片 周 圍 長 出 一圈 密 集 的 His+回 變 菌落 者 ， 受 試 物 即 為 陽性 致 突 變 物 質(zhì) 。背 景 菌 生 長 良 好 受 試 物每 皿 回 變 菌 落 數(shù) 增 加
8、 一倍 以 上 并 有 劑 量 -反 應(yīng)關(guān) 系 ， 試 驗 結(jié) 果 具 有 重現(xiàn) 性 即 可 認 為 該 受 試 物為 誘 變 陽 性 。 毒 理 學(xué) 基 礎(chǔ) 實 驗 課結(jié) 果 與 報 告1 實 驗 結(jié) 果 判 斷 與 評 價（ 1） 點 試 法 凡 在 點 樣 紙 片 周 圍 長 出 一 圈 密 集 的 his回 變 菌 落 者 ，該 物 質(zhì) 具 有 致 突 變 性 ， 即 為 陽 性 ； 如 只 出 現(xiàn) 少 數(shù) 散 在 菌 落 ，則 為 陰 性 。（ 2） 摻 入 法 突 變 率 =誘 發(fā) 回 變 his菌 落 數(shù) /自 發(fā) 回 變 his菌 落 數(shù) 確 認 待 測 物 具 有 致 突 變 作 用 ， 必 須 具 有 以 下 幾 點 ： 誘 發(fā) 突 變 His +菌 落 數(shù) 為 自 發(fā) 回 變 His+菌 落 數(shù) 的 2倍 或 2倍 以 上 回 變 菌 落 數(shù) 隨 劑 量 增 加 而 增 加 ， 并 在 一 定 劑 量 范 圍 內(nèi) 劑 量 效 應(yīng) 曲 線 呈 直 線 有 可 重 復(fù) 性 經(jīng) 統(tǒng) 計 學(xué) 處 理 有 顯 著 差 異 四 注 意 事 項
鼠傷寒沙門氏菌哺乳動物肝微粒體致突變性實驗ppt課件
