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1、Ames試 驗 ， 即 污 染 物 致 突 變 性 檢 測 ，也 稱 為 鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌 回 復 突 變 試 驗 污 染 物 對 人 體 的 潛 在 危 害 ， 引 起 人 們的 普 遍 關 注 。 世 界 上 已 發(fā) 展 了 百 余 種短 期 快 速 測 試 法 ， 檢 測 污 染 物 的 遺 傳毒 性 效 應 。 B.N.Ames等 經(jīng) 十 余 年 努 力 ，于 1975年 建 立 并 不 斷 發(fā) 展 完 善 的 沙 門氏 菌 回 復 突 變 試 驗 （ 亦 稱 Ames試 驗 ）已 被 世 界 各 國 廣 為 采 用 。 原理：檢測受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變
2、株(his-)回復突變成野生型(his+)的能力。即組氨酸突變菌(his-) 在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上不能生長；回復突變成野生型(his+)，可在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上生長。 是應用最廣泛的檢測基因突變的體外試驗。 Ames試 驗 u標 準 試 驗 菌 株 (配 套 菌 株 )： 有 四 種 TA98、 TA97 ： 檢 測 移 碼 突 變 TA100： 檢 測 堿 基 置 換 突 變 TA102： 對 醛 、 過 氧 化 物 及 DNA交 聯(lián) 劑 較 敏 感 u這 四 個 試 驗 菌 株 除 了 含 有 his-突 變 ， 還 有 一 些 附 加 突變 ， 以 提 高 敏 感 性 A
3、mes試 驗 不 加 S9 混 合 液 得 到 陽 性 結 果 ， 說 明 受 試 物 是直 接 致 突 變 物 加 S9 混 合 液 才 得 到 陽 性 結 果 ， 說 明 該 受 試 物是 間 接 致 突 變 物 Ames試 驗 常規(guī)方法： 斑點試驗 平板摻入試驗 斑點試驗：1、吸取測試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml0.4mlS9混合液，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。2、用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面。同時做溶劑對照和陽性對照，分別貼放于平板上相應位置。3、平
4、皿倒置于37溫箱培養(yǎng)48h。在紙片外圍長出密集菌落圈，為陽性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性。 平板摻入試驗：1、將一定量樣液和0.1ml測試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml0.4ml S9混合液，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。2、同時做陰性和陽性對照，每種處理做3個平行。試樣通常設4個5個劑量。選擇劑量范圍開始應大些，有陽性或可疑陽性結果時，再在較窄的劑量范圍內(nèi)確定劑量反應關系。培養(yǎng)同上。3、同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（MR）。MR值2，且有劑量-反應關系，背景正常，則判為致突變陽性。 鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌野 生 型
5、（ his ） 鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌 突 變 型 （ his ） 正 向 突 變回 復 突 變受 試 物試 驗 菌 種(his-)S9 試 驗 菌 種(his-)S9 Ames試 驗 原 理 結 果 判 斷 : 只 要 在 一 種 試 驗 菌 株 得 到 陽 性 結 果 ， 即 認 為受 試 物 是 致 突 變 物 僅 當 四 種 試 驗 菌 株 均 得 到 陰 性 結 果 ， 才 認 為受 試 物 是 非 致 突 變 物 Ames試 驗 應用1斑點試驗只局限于能在瓊脂上擴散的化學物質，大多數(shù)多環(huán)芳烴和難溶于水的化學物質均不適宜用此法。此法敏感性較差，主要是一種定性試驗，適用于快速篩選大量受試化合物。2平板摻入試驗可定量測試樣品致突變性的強弱。此法較斑點試驗敏感，獲陽性結果所需的劑量較低。點試獲陽性結果的濃度用于摻入試驗（每皿0.1ml），往往出現(xiàn)抑（殺）菌作用。3致變作用遲緩或有抑菌作用的試樣，培養(yǎng)時間延長至72h。 應用4揮發(fā)性的液體和氣體試樣，可用干燥器內(nèi)試驗法進行測試。5目前，Ames試驗作為檢測環(huán)境誘變劑的一組試驗中的首選試驗，廣泛應用于致突變化學物的初篩。但是，與今天快信息、高效率的社會要求相比，該試驗程序還嫌繁瑣，方法不夠簡便，有待于創(chuàng)建新的更為快速靈敏、簡單易行的環(huán)境誘變劑短期生物測試法。
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