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1、第第13章章 生物藥物分析概論生物藥物分析概論中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容生物藥物種類生物藥物種類與與特點(diǎn)特點(diǎn)生物藥物質(zhì)量生物藥物質(zhì)量檢驗(yàn)的檢驗(yàn)的基本程基本程序與方法序與方法生物藥物理化生物藥物理化測(cè)定法：測(cè)定法：HPLC法、酶法、電法、酶法、電泳法泳法中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室生化藥物生化藥物生物制品生物制品（生物技術(shù)藥物）（生物技術(shù)藥物）生物藥物生物藥物（biopharmaceuticals）：利利用生物體、生用生物體、生物組織和器官物組織和器官制得的天然活制得的天然活性物質(zhì)及其類性物質(zhì)及其類似物似物一、概述一、概述分類沒(méi)有嚴(yán)分類沒(méi)有嚴(yán)格的界限格的界限 中國(guó)藥科大學(xué)藥
2、物分析教研室動(dòng)植物及微生物提取、分離的天然生物活性物質(zhì)及半合成得到生命基本物質(zhì)及其衍生物等生化藥物生化藥物biochemical drugs 人纖維蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸 中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室 應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料制備的藥品種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料制備的藥品 自動(dòng)免疫制品自動(dòng)免疫制品 生物制品生物制品biological products 其他（血液制品、組織制品等）其他（血液制品、
3、組織制品等）免疫血清免疫血清菌苗、疫苗、類毒素菌苗、疫苗、類毒素診斷制品診斷制品中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室 利用重組利用重組DNA等生等生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物物技術(shù)生產(chǎn)的藥物基因工程藥物 biotechnology drugs發(fā)現(xiàn)并確定有治療作用的Pr分離或合成控制該P(yáng)r合成的基因?qū)⒃摶驅(qū)胧荏w細(xì)胞受體細(xì)胞表達(dá)該P(yáng)r分離純化中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室胰臟胰臟(A)n胰島素原胰島素原mRNAcDNA重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化細(xì)菌mRNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶胰島素原基因胰島素原基因與質(zhì)與質(zhì)粒連粒連接接感染感染E.coli胰島素原胰島素原重組胰島素原的合成中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室基因工程藥物主要類別基
4、因工程藥物主要類別蛋白質(zhì)多肽類：蛋白質(zhì)多肽類：激素類及神經(jīng)遞質(zhì)類激素類及神經(jīng)遞質(zhì)類 細(xì)胞因子類細(xì)胞因子類 酶及凝血因子類酶及凝血因子類核酸類：核酸類：反義寡核苷酸反義寡核苷酸 等等人生長(zhǎng)激素釋放抑制因子（Human Somatotin）干擾素（Human Interferons）鏈激酶（Streptokinase）中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室5.生化藥物和基因工程藥物特點(diǎn)1 1）共同特點(diǎn)：）共同特點(diǎn)：活性強(qiáng)，毒副作用小活性強(qiáng)，毒副作用小2 2）分子量大，結(jié)構(gòu)確證難）分子量大，結(jié)構(gòu)確證難3 3）全過(guò)程全過(guò)程的質(zhì)量控制：從原料、菌種到生產(chǎn)設(shè)備、的質(zhì)量控制：從原料、菌種到生產(chǎn)設(shè)備、中間體、產(chǎn)品中間體、
5、產(chǎn)品4 4）生物活性檢查）生物活性檢查5 5）安全性檢查：異常毒性檢查、過(guò)敏物質(zhì)檢查、）安全性檢查：異常毒性檢查、過(guò)敏物質(zhì)檢查、外源性外源性DNA殘留量、宿主菌蛋白殘留量等殘留量、宿主菌蛋白殘留量等 6 6）效價(jià)（含量）測(cè)定）效價(jià)（含量）測(cè)定中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室收錄于收錄于中國(guó)藥典中國(guó)藥典中國(guó)藥典中國(guó)藥典和和中國(guó)生物制品規(guī)程中國(guó)生物制品規(guī)程中國(guó)生物制品規(guī)程中國(guó)生物制品規(guī)程二、檢驗(yàn)的程序和方法二、檢驗(yàn)的程序和方法鑒別鑒別雜質(zhì)雜質(zhì)檢查檢查安全性安全性檢查檢查含量（效價(jià)）含量（效價(jià)）測(cè)定測(cè)定中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室1.1.鑒別鑒別1 1）理化鑒別法：）理化鑒別法：UV、肽圖肽圖等等反應(yīng)序列信
6、息反應(yīng)序列信息RP-HPLC法分析重組人胰高血糖素類多肽1（736）肽圖譜藥物分析雜志2005，25(1)24-26標(biāo)準(zhǔn)品樣品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由30個(gè)氨基酸組成，結(jié)構(gòu)中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室2 2）生化鑒別法：）生化鑒別法：免疫法免疫法、酶法、電泳法等、酶法、電泳法等3 3）生物鑒別法：動(dòng)物試驗(yàn)等）生物鑒別法：動(dòng)物試驗(yàn)等專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛免疫雙擴(kuò)散法SDS-PAGEMarker Sample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室2.雜質(zhì)
7、檢查1 1）一般雜質(zhì)：氯化物、重金屬、水分等）一般雜質(zhì)：氯化物、重金屬、水分等2 2）特殊雜質(zhì)：有關(guān)物質(zhì)等）特殊雜質(zhì)：有關(guān)物質(zhì)等 高效凝膠過(guò)濾色譜法(High Performance Gel Filter，HPGFC）、RP-HPLC 萄聚糖凝膠立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室標(biāo)準(zhǔn)蛋白色譜圖標(biāo)準(zhǔn)蛋白色譜圖時(shí)間(min)04812165432 1.右旋糖酐藍(lán)右旋糖酐藍(lán) 2.醛縮酶醛縮酶 3.血清白蛋白血清白蛋白 4.碳酸酐酶碳酸酐酶 5.抑蛋白抑蛋白酶肽酶肽 6.酪氨酸酪氨酸中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室 重組人腫瘤壞死因子相關(guān)調(diào)亡誘導(dǎo)配體重組人腫瘤壞死因子相關(guān)調(diào)亡誘導(dǎo)配體（rhTRAILr
8、hTRAIL）質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究）質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 藥物分析雜志藥物分析雜志20052005，2525（3 3）253-257253-257 Synmetry 300 C18 Synmetry 300 C18柱（柱（3.9150mm3.9150mm）中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室3.安全性檢查安全性檢查1 1）熱原檢查）熱原檢查 家兔法、鱟試劑法家兔法、鱟試劑法2 2）降壓物質(zhì)檢查）降壓物質(zhì)檢查3 3）過(guò)敏試驗(yàn)）過(guò)敏試驗(yàn)4 4）異常毒性試驗(yàn)）異常毒性試驗(yàn) 豚鼠、大鼠存活試驗(yàn)豚鼠、大鼠存活試驗(yàn)5 5）無(wú)菌試驗(yàn)）無(wú)菌試驗(yàn)6 6）宿主細(xì)胞蛋白殘留、）宿主細(xì)胞蛋白殘留、DNADNA殘留殘留
9、ELISA法法中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室1 1）理化分析法：）理化分析法：重量法、滴定法、重量法、滴定法、電化學(xué)法、光譜法電化學(xué)法、光譜法 色譜法（色譜法（HPLC法）法）4.4.含量（效價(jià)）測(cè)定含量（效價(jià)）測(cè)定例：蛋白質(zhì)含量測(cè)定（ChP2005三部）凱氏定氮法 Lowry法 雙縮脲法中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室2 2）生化分析法）生化分析法v 酶法：酶法：v免疫分析法免疫分析法酶活力測(cè)定法 以酶為分析對(duì)象進(jìn)行分析酶分析法 以酶為分析工具或分析試劑 的分析方法 中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室3 3）生物檢定法）生物檢定法 藥物對(duì)生物體或離體器官所起的生物活性藥物對(duì)生物體或離體器官所起的生物活性 測(cè)定
10、效價(jià)時(shí)采用參考品，體內(nèi)、體外方法測(cè)定活性，計(jì)算效價(jià)IU 同時(shí)測(cè)定蛋白含量，計(jì)算特異比（比活性，IU/mg）中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室例：凍干基因工程例：凍干基因工程1b干擾素制造及檢定規(guī)程干擾素制造及檢定規(guī)程 本品系用從健康人白細(xì)胞中獲得的本品系用從健康人白細(xì)胞中獲得的1b干擾素基因重組質(zhì)粒，傳染干擾素基因重組質(zhì)粒，傳染大腸桿菌，使之高效表達(dá)人大腸桿菌，使之高效表達(dá)人1b干擾素，經(jīng)高度純化后凍干制成。用于干擾素，經(jīng)高度純化后凍干制成。用于治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛細(xì)胞白血病等疾病。治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛細(xì)胞白血病等疾病。主要包括以下內(nèi)容：1 菌種 2 發(fā)酵 3 收菌 4 菌體裂解與粗制干擾素制備5 濃縮與純化 6 稀釋、除菌過(guò)濾 7 半成品檢定8 除菌半成品檢定 9 成品檢定 10規(guī)格 11保存與效期12 凍干基因工程1b干擾素使用說(shuō)明書(shū)中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室檢查：檢查：純度：1電泳純度 2高效液相色譜純度pH值水分鑒別：鑒別：分子量測(cè)定肽圖測(cè)定等電聚集紫外光譜掃描外觀半成品和成品的檢驗(yàn)項(xiàng)目包括：中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室安全性檢查：安全性檢查：殘余外源性DNA含量殘余IgG含量殘余工程菌蛋白含量抗生素活性無(wú)菌試驗(yàn)熱原質(zhì)試驗(yàn)異常毒性含量：含量：效價(jià)測(cè)定：細(xì)胞病變抑制法蛋白含量比活性中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室
13第十三章 生化藥物分析
