現(xiàn)代分子生物學(xué)(第3版) 朱玉賢 課后答案(全)
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1、 第一章 1 簡述孟德爾、摩爾根和沃森等人對分子生物學(xué)發(fā)展的主要貢獻 答:孟德爾的對分子生物學(xué)的發(fā)展的主要貢獻在于他通過豌豆實驗,發(fā)現(xiàn)了遺傳規(guī)律、分離規(guī)律及自由組合規(guī)律;摩爾根的主要貢獻在于發(fā)現(xiàn)染色體的遺傳機制,創(chuàng)立染色體遺傳理論,成為現(xiàn)代實驗生物學(xué)奠基人;沃森和克里克在1953年提出DAN反向雙平行雙螺旋模型。 2寫出DNARNA的英文全稱 答:脫氧核糖核酸(DNA, Deoxyribonucleic acid), 核糖核酸(RNA, Ribonucleic acid) 3試述“有其父必有其子”的生物學(xué)本質(zhì) 答:其生物學(xué)本質(zhì)是基因遺傳。子代的性質(zhì)由遺傳所得的基因決定,
2、而基因由于遺傳的作用,其基因的一半來自于父方,一般來自于母方。 4早期主要有哪些實驗證實DNA是遺傳物質(zhì)?寫出這些實驗的主要步驟 答:一,肺炎雙球菌感染實驗,1,R型菌落粗糙,菌體無多糖莢膜,無毒,注入小鼠體內(nèi)后,小鼠不死亡。2,S型菌落光滑,菌體有多糖莢膜,有毒,注入到小鼠體內(nèi)可以使小鼠患病死亡。3,用加熱的方法殺死S型細菌后注入到小鼠體內(nèi),小鼠不死亡; 二,噬菌體侵染細菌的實驗:1,噬菌體侵染細菌的實驗過程:吸附→侵入→復(fù)制→組裝→釋放。 2,DNA中P的含量多,蛋白質(zhì)中P的含量少;蛋白質(zhì)中有S而DNA中沒有S,所以用放射性同位素35S標(biāo)記一部分噬菌體的蛋白質(zhì),用放射性同位素32P標(biāo)
3、記另一部分噬菌體的DNA。用35P標(biāo)記蛋白質(zhì)的噬菌體侵染后,細菌體內(nèi)無放射性,即表明噬菌體的蛋白質(zhì)沒有進入細菌內(nèi)部;而用32P標(biāo)記DNA的噬菌體侵染細菌后,細菌體內(nèi)有放射性,即表明噬菌體的DNA進入了細菌體內(nèi)。三,煙草TMV的重建實驗:1957年,F(xiàn)raenkel-Conrat等人,將兩個不同的TMV株系(S株系和HR株系)的蛋白質(zhì)和RNA分別提取出來,然后相互對換,將S株系的蛋白質(zhì)和HR株系的RNA,或反過來將HR株系的蛋白質(zhì)和S株系的RNA放在一起,重建形成兩種雜種病毒,去感染煙草葉片。 5請定義DNA重組技術(shù)和基因工程技術(shù) 答:DNA重組技術(shù):目的是將不同的DNA片段(如某個基因或
4、基因的一部分)按照人們的設(shè)計定向連接起來,然后在特定的受體細胞中與載體同時復(fù)制并得到表達,產(chǎn)生影響受體細胞的新的遺傳性狀。 基因工程技術(shù):是除了包含DNA重組技術(shù)外還包括其他可能是生物細胞基因結(jié)構(gòu)得到改造的體系,基因工程是指技術(shù)重組DNA技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化設(shè)計與應(yīng)用,包括上游技術(shù)和下游技術(shù)兩大組成部分。上游技術(shù)指的是基因重組、克隆和表達的設(shè)計與構(gòu)建(即重組DNA技術(shù));而下游技術(shù)則涉及到基因工程菌或細胞的大規(guī)模培養(yǎng)以及基因產(chǎn)物的分離純化過程。 6寫出分子生物學(xué)的主要研究內(nèi)容。 答:1,DNA重組技術(shù);2,基因表達調(diào)控研究;3,生物大分子的結(jié)構(gòu)功能研究----結(jié)構(gòu)分子生物學(xué);4,基因組、功能基因
5、組與生物信息學(xué)研究。 7.分子生物學(xué)的定義 答: 廣義的分子生物學(xué):蛋白質(zhì)及核酸等生物大分子結(jié)構(gòu)和功能的研究都屬于分子生物學(xué)的范疇,即從分子水平闡明生命現(xiàn)象和生物學(xué)規(guī)律狹義的分子生物學(xué):偏重于核酸(基因)的分子生物學(xué),主要研究基因或DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、表達和調(diào)控等過程,當(dāng)然也涉及與這些過程相關(guān)的蛋白質(zhì)和酶的結(jié)構(gòu)與功能的研究 第二章 1,染色體具備哪些作為遺傳物質(zhì)的特性? 答:1,分子結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定;2,能夠自我復(fù)制,使得親子代之間保持連續(xù)性;3,能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成,從而控制整個生命活動的過程;4,能夠產(chǎn)生可遺傳的變異。 2,什么是核小體?簡述其形成過程。 答:核小體是染色質(zhì)
6、的基本結(jié)構(gòu)單位,由~200bpDNA和組蛋白八聚體組成。形成過程:核小體是由H2A、H2B、H3、H4各兩個分子生成的八聚體和由大約200bp的DNA組成的。形成核小體時八聚體在中間,DNA分子盤繞在外組成真核細胞染色體的一種重復(fù)珠狀結(jié)構(gòu)。 3簡述真核生物染色體的組成及組裝過程 答: 組成:蛋白質(zhì)+核酸。組裝過程:1,首先組蛋白組成盤裝八聚體,DNA纏繞其上,成為核小體顆粒,兩個顆粒之間經(jīng)過DNA連接,形成外徑10nm的纖維狀串珠,稱為核小體串珠纖維;2,核小體串珠纖維在酶的作用下形成每圈6個核小體,外徑30nm的螺旋結(jié)構(gòu);3,螺旋結(jié)構(gòu)再次螺旋化,形成超螺旋結(jié)構(gòu);4,超螺線管,形成絆環(huán)
7、,即線性的螺線管形成的放射狀環(huán)。絆環(huán)再非組蛋白上纏繞即形成了顯微鏡下可見的染色體結(jié)構(gòu)。 4,簡述DNA的一、二、三級結(jié)構(gòu)特征。 答:1,DNA的一級結(jié)構(gòu),就是指4種核苷酸的連接及排列順序,表示了該DNA分子的化學(xué)成分;2,DNA的二級結(jié)構(gòu)是指兩條多核苷酸連反向平行盤繞所形成的雙螺旋結(jié)構(gòu);3,DNA的高級結(jié)構(gòu)是指DNA雙螺旋進一步扭曲盤繞所形成的特定空間結(jié)構(gòu)。 6,原核生物DNA與真核生物有哪些不同的特征? 答:(1)DNA雙螺旋是由兩條互相平行的脫氧核苷酸長鏈盤繞而成的,多核苷酸的方向由核苷酸間的磷酸二酯鍵的走向決定,一條是5---3,另一條是3-----5。(2)DNA雙螺旋中
8、脫氧核糖和磷酸交替連接,排在外側(cè),構(gòu)成基本骨架,堿基排列在內(nèi)側(cè)(3)其兩條鏈上的堿基通過氫鍵相結(jié)合,形成堿基對 意義:該模型揭示了DNA作為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性特征,最有價值的是確認了堿基配對原則,這是DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄的分子基礎(chǔ),亦是遺傳信息傳遞和表達的分子基礎(chǔ)。該模型的提出是20世紀(jì)生命科學(xué)的重大突破之一,它奠定了生物化學(xué)和分子生物學(xué)乃至整個生命科學(xué)飛速發(fā)展的基石 7,DNA復(fù)制通常采取哪些方式。 答:一,線性DNA雙鏈的復(fù)制:1,將線性復(fù)制子轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)裝或者多聚分子;2,在DNA末端形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu),使分子沒有游離末端;3,在某種蛋白質(zhì)的介入下(如末端蛋白,terminal
9、protein),在真正的末端上啟動復(fù)制。二,環(huán)狀DNA的復(fù)制:1,θ型;2,滾環(huán)形;3,D—環(huán)形(D--loop)。 8,簡述原核生物的DNA復(fù)制特點。 答:1,與真核生物不同,原核生物的DNA復(fù)制只有一個復(fù)制起點;2,真核生物的染色體全部完成復(fù)制之前,各個起始點上DNA的復(fù)制不能在開始,而在快速生長的原核生物中,復(fù)制起始點上可以連續(xù)開始新的DNA的復(fù)制,變現(xiàn)為雖然只有一個復(fù)制單元,但可有多個復(fù)制叉; 9,真核生物的DNA的復(fù)制在那些水平上受到調(diào)控? 答:1,細胞生活周期水平調(diào)控;2,染色體水平調(diào)控;3,復(fù)制子水平調(diào)控。 10,細胞通過哪些修復(fù)系統(tǒng)對DNA損傷進行修復(fù)?
10、 答:1,錯配修復(fù),恢復(fù)錯配;2,切除修復(fù),切除突變的堿基和核苷酸序列;3,重組修復(fù),復(fù)制后的修復(fù),重新啟動停滯的復(fù)制叉;4,DNA的直接修復(fù),修復(fù)嘧啶二聚體和甲基化的DNA;5,SOS系統(tǒng),DNA的修復(fù),導(dǎo)致突變。 11,什么是轉(zhuǎn)座子?可以分為哪些種類? 答:轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位。轉(zhuǎn)座子可分為兩大類:插入序列和復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。 12,請說說插入序列與復(fù)合型轉(zhuǎn)座子之間的異同。 答:插入序列是最簡單的轉(zhuǎn)座子,它不含有任何宿主基因,它們是細菌染色體或質(zhì)粒DNA的正常組成部分,一般插入序列都是很小的DNA片段,末端帶有倒置重復(fù)序列; 復(fù)合型轉(zhuǎn)座子是一
11、類帶有某些抗藥性基因的轉(zhuǎn)座子,其兩翼往往帶有兩個或者相同高度同源的IS序列,一旦形成復(fù)合轉(zhuǎn)座子,IS序列就不能移動,因為他們的功能被修飾了,只能作為復(fù)合體移動。 第三章 1,什么是編碼鏈?什么是模版鏈? 答:與 mRNA 序列相同的那條 DNA 鏈稱為編碼鏈(或有意義鏈) ;另一條根據(jù)堿基互補原則指導(dǎo) mRNA 合成 DNA 鏈 稱為模版鏈(或反義鏈) 。 2,簡述 RNA 轉(zhuǎn)錄的概念及其基本過程。 答:RNA 轉(zhuǎn)錄:以 DNA 中的一條單鏈為模板,游離堿基為原料,在 DNA 依賴的 RNA 聚合酶催化下合成 RNA 鏈的過 程?;具^程:模版識別—轉(zhuǎn)錄開始—轉(zhuǎn)錄延伸—轉(zhuǎn)錄終止
12、。 3,大腸桿菌的 RNA 聚合酶有哪些組成成分?各個亞基的作用如何? 答:大腸桿菌的 RNA 聚合酶由 2 個α亞基、一個β亞基、一個β’亞基和一個ω亞基組成的核心酶,加上一個σ亞基后則 成為聚合酶全酶。α亞基肯能與核心酶的組裝及啟動子的識別有關(guān),并參與 RNA 聚合酶和部分調(diào)節(jié)因子的相互作用; β亞基和β’亞基組成了聚合酶的催化中心,β亞基能與模版 DNA、新生 RNA 鏈及核苷酸底物相結(jié)合。 4,什么是封閉復(fù)合物、開放復(fù)合物以及三元復(fù)合物? 答:模版的識別階段,聚合酶與啟動子可逆性結(jié)合形成封閉性復(fù)合物;封閉性復(fù)合物形成后,此時,DNA 鏈仍然處于雙 鏈狀態(tài),伴隨著 DNA
13、 構(gòu)象的重大變化,封閉性復(fù)合物轉(zhuǎn)化為開放復(fù)合物;開放復(fù)合物與最初的兩個 NTP 相結(jié)合并在這 兩個核苷酸之間形成磷酸二脂鍵后即轉(zhuǎn)變成包括 RNA 聚合酶、DNA 和新生 RNA 的三元復(fù)合物。 5,簡述σ因子的作用。 答:1,σ因子的作用是負責(zé)模版鏈的選擇和轉(zhuǎn)錄的起始,它是酶的別構(gòu)效應(yīng)物,使酶專一性識別模版上的啟動子;2,σ 因子可以極大的提高 RNA 聚合酶對啟動子區(qū) DNA 序列的親和力;3,σ因子還能使 RNA 聚合酶與模版 DNA 上非特異 性位點結(jié)合常數(shù)降低。 6,什么是 Pribnow box?它的保守序列是什么? 答:pribnow box 是原核生物中中央大約位
14、于轉(zhuǎn)錄起始位點上游 10bp 處的 TATA 區(qū),所以又稱作-10 區(qū)。它的保守序 列是 TATAAT。 7,什么是上升突變?什么是下降突變? 答:上升突變:細菌中常見的啟動自突變之一,突變導(dǎo)致 Pribnow 區(qū)共同序列的同一性增加;下降突變:細菌中常見的 啟動子突變之一,突變導(dǎo)致結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平大大降低,如 Pribnow 區(qū)從 TATAAT 變成 AATAAT。 8,簡述原核生物和真核生物 mRNA 的區(qū)別。 答:1,原核生物 mRNA 常以多順反子的形式存在。真核生物 mRNA 一般以單順反子的形式存在;2,原核生物 mRNA 的轉(zhuǎn)錄與翻譯一般是偶聯(lián)的,真核生物轉(zhuǎn)錄的
15、 mRNA 前體則需經(jīng)轉(zhuǎn)錄后加工,加工為成熟的 mRNA 與蛋白質(zhì)結(jié)合生成 信息體后才開始工作;3,原核生物 mRNA 半壽期很短,一般為幾分鐘 ,最長只有數(shù)小時。真核生物 mRNA 的半壽期 較長, 如胚胎中的 mRNA 可達數(shù)日;4,原核與真核生物 mRNA 的結(jié)構(gòu)特點也不同,原核生物的 mRNA 的 5’端無帽 子結(jié)構(gòu),3’端沒有或只有較短的 poly A 結(jié)構(gòu)。 9,大腸桿菌的終止子有哪兩大類?請分別介紹一下它們的結(jié)構(gòu)特點。 答:大腸桿菌的終止子可以分為不依賴于 p 因子和依賴于 p 因子兩大類。不依賴于 p 因子的終止子結(jié)構(gòu)特點:1,位于 位點上游一般存在一個富含 GC 堿基
16、的二重對稱區(qū),由這段 DNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 RNA 容易形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu)。2,在終止位 點前面有一端由 4—8 個 A 組成的序列,所以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的 3’端為寡聚 U。依賴于 p 因子的終止子的結(jié)構(gòu)特點: 10,真核生物的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物必須經(jīng)過哪些加工才能成為成熟的 mRNA,以用作蛋白質(zhì)合成的模版。 答:加工包括:(1)5’端連接“帽子”結(jié)構(gòu); (2)3’端添加polyA “尾巴”;(3)hnRNA被剪接,把內(nèi)含子(DNA上非編碼序列)轉(zhuǎn)錄序列剪掉,把外顯子(DNA上的編碼序列)轉(zhuǎn)錄序列拼接上(真核生物一般為不連續(xù)基因)。(4)分子內(nèi)部的核苷酸甲基化修飾 11,簡述Ⅰ、Ⅱ類內(nèi)含子的剪接特點
17、。 答: Ⅰ類內(nèi)含子的剪接主要是轉(zhuǎn)酯反應(yīng), 即剪接反應(yīng)實際上是發(fā)生了兩次磷酸二脂鍵的轉(zhuǎn)移。 I 類內(nèi)含子的切除體系中, 在 第一個轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由一個游離的鳥苷或者鳥苷酸介導(dǎo), 鳥苷或鳥苷酸的 3’—OH 作為親核基團攻擊內(nèi)含子 5’端的磷酸二 脂鍵,從上游切開 RNA 鏈。在第二個轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中,上游外顯子的自由 3’—OH 作為親核基團攻擊內(nèi)含子 3’位核苷酸 上的磷酸二脂鍵,使內(nèi)含子被完全切開,上下游兩個外顯子通過新的磷酸二脂鍵相連。 Ⅱ類內(nèi)含子主要存在于真核生物的線粒體和葉綠體 rRNA 基因中,在Ⅱ類內(nèi)含子切除體系中,轉(zhuǎn)酯反應(yīng)無需游離鳥苷或 鳥苷酸,而是由內(nèi)含子本身的靠近 3’端的腺苷酸
18、2’—OH 作為親核基團攻擊內(nèi)含子 5’端的磷酸二脂鍵,從上游切開 RNA 鏈后形成套索結(jié)構(gòu)。再由上游外顯子的自由 3’—OH 作為親核基團攻擊內(nèi)含子 3’位核苷酸上的磷酸二脂鍵,使 得內(nèi)含子被完全切開,上下游兩個內(nèi)含子通過新的磷酸二脂鍵相連。 12,什么是 RNA 編輯?其生物學(xué)意義是什么? 答:RNA 編輯是指某些 RNA 特別是 mRNA 前體經(jīng)過插入、刪除或取代一些核苷酸殘疾等操作,導(dǎo)致 DNA 所編碼的遺 傳信息的改變,使得經(jīng)過 RNA 編輯的 mRNA 序列發(fā)生了不同于模版的 DAN 的變化。生物學(xué)意義:1,校正作用,有些 基因在突變的途中丟失的遺傳信息可能通過 RNA 的
19、編輯得以恢復(fù);2,調(diào)控翻譯,通過編輯可以構(gòu)建或去除其實密碼子 和終止密碼子, 是基因表達調(diào)控的一種方式; 擴充遺傳信息, 3, 能使基因產(chǎn)物獲得心得結(jié)構(gòu)核功能, 有利于生物的進化。 13,核酶具有哪些結(jié)構(gòu)特點?其生物學(xué)意義是什么? 答:核酶的結(jié)構(gòu)特點:核酶的錘頭結(jié)構(gòu)特點是:三個莖區(qū)形成局部的雙鏈結(jié)構(gòu);其中含 13 個保守的核苷酸,N 代表任何 核苷酸; 生物學(xué)意義:1,核酶是繼反轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象之后對中心法則的有一個重要的修正,說明 RNA 既是遺傳物質(zhì)又是酶; 2,核酶的發(fā)現(xiàn)為生命起源的研究提供了新思路—--也許曾(經(jīng)存在以 RNA 為基礎(chǔ)的原始生命. 第四章 1,遺傳密碼有哪些特征?
20、 答:1,密碼的連續(xù)性,密碼之間無間斷也沒有重疊;2,密碼的簡并性,許多氨基酸都有多個密碼子;3,密碼的通用性和特殊性,遺傳密碼無論在體內(nèi)還是在體外,無論是對病毒、細菌、動物還是植物而言都是通用的,但是也有少數(shù)例外;4,密碼子和反密碼子的相互作用。 2,有幾種終止密碼子?它們的序列和別名分別是什么? 答:3種,UAA、UAG和UGA,別名是無意義密碼。 3,簡述擺動學(xué)說。 答:1966年,Crick根據(jù)立體化學(xué)原理提出擺動學(xué)說,解釋了反密碼子中某些稀有成分的配對。擺動學(xué)說認為,在密碼子與反密碼子的配對中,前兩對嚴(yán)格遵守堿基配對原則,第三對堿基有一定的自由度,可以“擺動”,因而
21、使某些tRNA可以識別1個以上的密碼子。認為除A-U、G-C配對外,還有非標(biāo)準(zhǔn)配對,I-A、I-C、I-U,并強調(diào)密碼子的5’端第1、2個堿基嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)配對,而第3個堿基可以非標(biāo)準(zhǔn)配對,具有一定程度的擺動靈活性。 4,tRNA在組成和結(jié)構(gòu)上有哪些特點 答:1.tRNA中含有稀有堿基,除ACGU 外還含有雙氫尿嘧啶、假尿嘧啶等;2.tRNA分子形成莖環(huán)節(jié)構(gòu);3.tRNA分子末端有氨基酸接納莖;4.tRNA分子序列中很有反密碼子。 5,比較原核與真核的核糖體組成。 答:1,真核細胞中的核糖體數(shù)量多余原核;2,真核細胞中核糖體RNA占細胞中總RNA的量少于原核;3,原核生物的核糖體通
22、過與mRNA的相互作用,被固定在核基因組上,真核生物的核糖體則直接或間接的與細胞骨架有關(guān)聯(lián)或者與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相連;4,原核生物核糖體由約RNA占2/3及1/3的蛋白組成,真核生物核糖體中RNA占3/5,蛋白質(zhì)占2/5。 6,什么是SD序列?其功能是什么? 答:SD序列是指信使核糖核酸(mRNA)翻譯起點上游與原核16S 核糖體RNA或真核18S rRNA 3′端富含嘧啶的7核苷酸序列互補的富含嘌呤的3~7個核苷酸序列(AGGAGG),是核糖體小亞基與mRNA結(jié)合并形成正確的前起始復(fù)合體的一段序列。功能:SD序列對mRNA的翻譯起重要作用。 7,核糖體有哪些活性中心? 答:核糖體
23、包括多個活性中心,即mRNA結(jié)合部位、結(jié)合或接受AA-tRNA部位,結(jié)合或接受肽酰-tRNA部位,肽基轉(zhuǎn)移部位及形成肽鍵的部位,此外還有負責(zé)肽鏈延伸的各種延伸因子的結(jié)合位點。 8,真核生物與原核生物在翻譯起始過程中有哪些區(qū)別? 答:原核生物的起始tRNA是fMet-tRNA,真核生物是Met-tRNAMet。原核生物中30S小亞基首先與mRNA模版相結(jié)合,再與fMet-tRNA結(jié)合,最后與50S大亞基結(jié)合。而在真核生物中,40S小亞基首先與Met-tRNAMet相結(jié)合,再與模版mRNA結(jié)合,最后與60S大亞基結(jié)合生成80S.mRNA.Met-tRNAMet起始復(fù)合物。 9,鏈霉素為
24、什么能夠抑制蛋白質(zhì)的合成? 答:鏈霉素是是一種氨基葡萄糖型抗生素,分子式C21H39N7O12,可以多種方式抑制原核生物核糖體,能干擾fMet-tRNA與核糖體的結(jié)合,從而阻止蛋白質(zhì)合成的正確起始,也會導(dǎo)致mRNA的錯讀。 10,什么是信號肽?它在序列組成上有什么特點?有什么功能? 答:絕大部分被運入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔的蛋白質(zhì)都帶有一個信號肽,該序列常常位于蛋白質(zhì)的氨基端,長度一般都在13-16個殘基,有如下三個特征:1,一般帶有10-15個疏水殘基;2,在靠近該序列N端常常帶有一個或者數(shù)個帶正電荷的氨基酸;3,在其C端靠近蛋白酶切割位點處常常帶有數(shù)個極性氨基酸。功能:完整的信號肽是保證蛋白
25、質(zhì)轉(zhuǎn)運的必要條件。 11,簡述葉綠體蛋白質(zhì)的跨膜運輸機制。 答:1,活性蛋白水解酶位于葉綠體基質(zhì)內(nèi);2,葉綠體膜能夠特異性的與葉綠體蛋白的前體結(jié)合;3,葉綠體蛋白質(zhì)前體內(nèi)可降解序列因植物和蛋白質(zhì)種類不同而表現(xiàn)出明顯的差異; 12,蛋白質(zhì)有哪些翻譯后的加工修飾? 答:1、氨基端和羧基端的修飾;2.共價修飾:磷酸化、糖基化、羥基化、二硫鍵的形成;3.亞基的聚合;4.水解斷鏈,切除新生肽中非功能片段。 13,什么是核定位序列?其主要功能是什么? 答:核定位序列:蛋白質(zhì)的一個結(jié)構(gòu)域,通常為一短的氨基酸序列,它能與入核載體相互作用,使蛋白能被運進細胞核。在絕大多數(shù)多細胞真核生物中
26、,每當(dāng)細胞發(fā)生分裂時,核膜被破壞,等到細胞分類完成后,核膜被重新建成,分散在細胞內(nèi)的核蛋白必須被重新運入核內(nèi),為了核蛋白的重復(fù)定位,這些蛋白質(zhì)中的信號肽----被稱為核定位序列。 第七章 基因的表達與調(diào)控 1.簡述代謝物對基因表達調(diào)控的兩種方式。 答:①轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控 ②轉(zhuǎn)錄后水平上的調(diào)控 ,包括mRNA加工成熟水平上的調(diào)控)和翻譯水平上的調(diào)控 3.簡述乳糖操縱子的調(diào)控模型。 答:A、乳糖操縱子的組成:大腸桿菌乳糖操縱子含 Z、Y、A 三個結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶,此外還有一個操縱序列 O,一個啟動子 P 和一個調(diào)節(jié)基因I。 B、阻遏蛋
27、白的負性調(diào)節(jié):沒有乳糖存在時,I 基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列 O 處,乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài),不能合成分解乳糖的三種酶;有乳糖存在時,乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu),不能結(jié)合于操縱序列,乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。所以,乳糖操縱子的這種調(diào)控機制為可誘導(dǎo)的負調(diào)控。 C、CAP 的正性調(diào)節(jié):在啟動子上游有 CAP 結(jié)合位點,當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境 時,cAMP 濃度升高,與 CAP 結(jié)合,使 CAP 發(fā)生變構(gòu),CAP 結(jié)合于乳糖操縱子啟動序列附近的 CAP 結(jié)合位點,激活 RNA 聚合酶活性,促進結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進結(jié)構(gòu)基
28、因的轉(zhuǎn)錄,對乳糖操縱子實行正調(diào)控,加速合成分解乳糖的三種酶。D、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié):乳糖操縱子中的 I 基因編碼的阻遏蛋白的負調(diào)控與 CAP 的正調(diào)控兩種機制,互相協(xié)調(diào)、互相制約。 5.什么是弱化作用? 答:1.當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸的濃度很低時,負載有色氨酸的tRNATrp也就少,這樣翻譯通過兩個相鄰色氨酸密碼子的速度就會很慢,當(dāng)4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時,核糖體才進行到1區(qū)(或停留在兩個相鄰的trp密碼子處),這時的前導(dǎo)區(qū)結(jié)構(gòu)是2-3配對,不形成3-4配對的終止結(jié)構(gòu),所以轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進行,直到將trp操縱子中的結(jié)構(gòu)基因全部轉(zhuǎn)錄。 2.當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸濃度較高時,核糖體可順利通過兩個相鄰的色氨酸密碼子,在4區(qū)被
29、轉(zhuǎn)錄之前就到達2區(qū),使2-3區(qū)不能配對,3-4區(qū)自由配對形成基一環(huán)終止子結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)錄被終止,trp操縱子被關(guān)閉。 第八章 1,基因家族的分類及其主要表達調(diào)控模式 答:(1),簡單多基因家族,真核生物首先是pre rRNA經(jīng)過特異性甲基化,然后是經(jīng)RNA酶的切割便可產(chǎn)生成熟rRNA分子。原核生物則還要經(jīng)過核酸酶降解才能產(chǎn)生成熟rRNA分子。(2),復(fù)雜多基因家族,一般由幾個相關(guān)基因家族構(gòu)成,基因家族之間由間隔序列隔開,并作為獨立的轉(zhuǎn)錄單位,可能存在具有不同專一性的組蛋白亞類和發(fā)育調(diào)控機制。(3),發(fā)育調(diào)控的復(fù)雜多基因家族,每個基因家族中,基因排列的順序就是他們在發(fā)育階段的表達順序。 2
30、,何為外顯子和內(nèi)含子及其結(jié)構(gòu)特點和可變調(diào)控 答:大多數(shù)真核基因都是由蛋白質(zhì)編碼序列和非蛋白質(zhì)編碼序列組成的,編碼序列稱為外顯子(exon),非編碼序列稱為內(nèi)含子(intron)。結(jié)構(gòu)特點:一個結(jié)構(gòu)基因中編碼某一蛋白質(zhì)不同區(qū)域的各個外顯子并不連續(xù)排列在一起,而是常常被長度不等的內(nèi)含子所隔離,形成鑲嵌排列的斷裂方式。可變調(diào)控:不少真核基因的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可通過不同剪接方式,產(chǎn)生不同的mRNA,并翻譯成不同的蛋白質(zhì)。另外,一些核基因由于轉(zhuǎn)錄是選擇了不同的啟動子或者在轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上選擇了不同的PolyA位點而使轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物產(chǎn)生不同的二級結(jié)構(gòu),因而影響剪接過程,最終產(chǎn)生不同的mRNA分子。 3DNA甲基化對
31、基因表達的的調(diào)控機制 答:大量研究表明,DNA甲基化能關(guān)閉某些基因達的活性,去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達。三種調(diào)控機制:一是DNA甲基化導(dǎo)致了某些區(qū)域DNA構(gòu)象變化,從而影響了蛋白質(zhì)和DNA的相互作用,抑制了轉(zhuǎn)錄因子與啟動區(qū)DNA的結(jié)合效率。二是促進阻遏蛋白的阻遏作用。三是DNA的甲基化還提高了該位點的突變頻率。 4真核生物轉(zhuǎn)錄元件組成及其分類 答:啟動子,轉(zhuǎn)錄模版,RAN聚合酶Ⅱ基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄所需的蛋白質(zhì)因子(TFⅡ),RNA聚合酶Ⅱ,增強子,反式作用因子 5增強子的作用機制。 答:增強子是指能使與它連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列??赡苡?中作用機制:(1)
32、,影響模版附近的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu),導(dǎo)致DNA雙螺旋彎折或在反式因子的參與下,以蛋白質(zhì)之間的相互作用為媒介形成增強子魚啟動子之間“成環(huán)”連接,活化基因轉(zhuǎn)錄。(2),將模版固定在細胞核內(nèi)特定位置,如連接在核基質(zhì)上,有利于DNA拓撲異構(gòu)酶改變DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的張力,促進RNA聚合酶Ⅱ在DNA鏈上的結(jié)合和滑動。(3),增強子區(qū)可以作為反式作用因子或RNA聚合酶Ⅱ進入染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的“入口”。 6反式作用因子的結(jié)構(gòu)特點及其對基因表達的調(diào)控 答:反式作用因子是能直接或間接的識別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上,參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。這些因子有兩種獨立的活性: 特異地與DNA結(jié)合位點相結(jié)合,然
33、后激活轉(zhuǎn)錄。兩種活性可以獨立分配給特定的蛋白結(jié)構(gòu)域,分別稱作DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和激活結(jié)構(gòu)域,兩者是相分離的。它們在蛋白質(zhì)的不同區(qū)域。 7舉例說明蛋白質(zhì)磷酸化如何影響基因表達。 答:蛋白質(zhì)磷酸化主要影響細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進而影響基因表達。舉例:在糖原代謝過程中,激素與其受體在肌細胞外表面相結(jié)合,誘發(fā)細胞質(zhì)cAMP的合成并活化A激酶,后者再將活化磷酸基團傳遞給無活性的磷酸化酶激酶,活化糖原磷酸化酶,最終將糖原磷酸化,進入糖酵解途徑并提供ATP。(cAMP介導(dǎo)的蛋白質(zhì)磷酸化過程) 8組蛋白乙?;腿ヒ阴;绊懟蜣D(zhuǎn)錄的機制。 答:組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶和去乙酰化酶通過是組蛋白乙酰化和去乙?;瘜虮磉_
34、產(chǎn)生影響。組蛋白N端尾部上賴氨酸殘基的乙酰化中和了尾部的正電荷,降低了它與組蛋白的親和性,導(dǎo)致核小體構(gòu)象發(fā)生有利于轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白與染色質(zhì)結(jié)合的變化,從而提高了基因轉(zhuǎn)錄的活性。核心組蛋白H2A,H2B,H3,H4通過組蛋白尾部選擇性乙?;绊懞诵◇w的濃縮水平和可接近性。由于乙?;慕M蛋白抑制了核小體的濃縮,使轉(zhuǎn)錄因子更容易與基因組的這一部分相接觸,有利于提高基因的轉(zhuǎn)錄活性。 9激素影響基因表達的基本模式。 答:許多類固醇激素(如雌激素、孕激素、醛固酮、糖皮質(zhì)激素和雄激素)以及一些代謝性激素(如胰島素)的調(diào)控作用都是通過起始基因轉(zhuǎn)錄而實現(xiàn)的。靶細胞具有專一的細胞質(zhì)受體,可與激素形成復(fù)合物,導(dǎo)致三
35、維結(jié)構(gòu)甚至化學(xué)性質(zhì)的變化。經(jīng)修飾的受體與激素復(fù)合物通過核膜進入細胞核與染色質(zhì)的特定區(qū)域結(jié)合導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的起始或關(guān)閉。靶細胞內(nèi)含有大量激素受體蛋白,而非靶細胞中沒有或很少有這類受體,這是激素調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄組織特異性的根本原因。 10分子伴侶的分類及其影響基因表達的機制。 答:分子伴侶(molecular chaperone)是一類序列上沒有相關(guān)性擔(dān)憂共同功能的保守性蛋白質(zhì),它們在細胞內(nèi)能幫助其他多肽進行正確的折疊、組裝、運轉(zhuǎn)和降解。目前認為分子伴侶至少有兩類:熱休克蛋白家族和伴侶素。 把能與某個(類)專一蛋白因子結(jié)合,從而控制基因特意表達的DNA上游序列稱為應(yīng)答元件(response element),如熱休克應(yīng)答元件,這些應(yīng)答元件與細胞內(nèi)轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)錄因子相互作用,協(xié)調(diào)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。
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