《DNA的粗提取與鑒定》活動單

上傳人:新**** 文檔編號:50604704 上傳時間:2022-01-20 格式:DOCX 頁數(shù):6 大?。?2.09KB
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1、優(yōu)選精品文檔 歡迎下載選用 DNA的粗提取和鑒定 知識要點:1.DNA的物理化學性質,尤其是DNA的溶解性; 2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。 一、DNA的粗提取的原理 思考1:DNA存在于真核生物細胞的哪些部位? 思考2:提取生物大分子的一般思路是什么? 1、DNA的性質: ①DNA和蛋白質的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性 在NaCl溶液中的溶解度 對蛋白酶的耐受性 對高溫的耐受性 對洗滌劑的耐受性 DNA 蛋白質 ?溶解度 ②DNA粗提取的原理有些哪些? i、DNA在mol/LNaCl溶液中溶解度最小 ii

2、、DNA不溶于溶液,而蛋白質等能夠溶解 2、DNA鑒定的原理: 在的條件下,DNA遇會被染成。 二、DNA粗提取的主要步驟: 1、材料選擇: 適于作實驗材的材料:選用的生物材料;如雞(紅)血,其適宜作為實驗材料的 原因:①雞血(紅)細胞核的DNA含量豐富,材料易得;②雞血細胞極易吸水脹破。 哺乳動物紅細胞呢? 2、主要實驗步驟(以雞血紅細胞為例): 「方法:將5?10mL雞血細胞液加入20mL中;用玻棒同方 1*向攪拌5min;用3?4紗布過濾,以除去顆粒較大的雜質過濾; :①破碎細胞,釋放J西徉 ;,收集° i*?CNA.?(格物質???.?*:目的:破壞細胞,釋放

3、核物質 I注意:攪拌不能用力過大,以防止打碎DNA分子; 「方法:向濾液中加入2倍體積的mol/LNaCl溶液,攪拌1min; :②溶解細胞核;過濾獲取 :內DNAX目的:使與DNA結合的解聚,釋放出;DNA溶解于高溶液 N"NaCl溶液中 、注意:按同一方向攪拌 「方法:沿燒杯壁向濾液中緩慢加入蒸儲水,并輕輕按同一方向攪拌,使DNA析 ③ DNA : 析出: 出,直到;可以在玻棒上收集到黏稠物(或過濾或離心收集黏稠物) 目的:降低NaCl溶液濃度達到mol/L左右,使DNA析出 k注意:加入的蒸儲水不能過多,使NaCl溶液濃度過低,DN取會 尸方法:向20mL2m

4、ol/LNaCl溶液中加入黏稠物,并按同一方向攪拌3min,使 DNA充分溶解;過濾,收集濾液;向濾液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的 95%乙醇,并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地攪拌,在玻棒上收集白色絲狀物(DNA) L原理:DNA不溶于中,而蛋白質能溶于史二 歸納:①本實驗中幾次過濾?過濾的目的是什么? 過濾一: 過濾二: 過濾三: ②本實驗中幾次加入蒸儲水的目的各是什么? 第一次:向雞血細胞液中加入蒸儲水,目的: 第二次:向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸儲水,目的: 拓展:1、以菜花為材料進行實驗時,如何獲得核物質? 取材、剪碎一加入洗滌劑、食鹽一研磨、過

5、濾 ▲加洗滌劑的目的: ▲加入食鹽的目的: 2、分析教材中方案一、二、三的原理。 萬案一: 萬案一: 方案二: 3、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對DNA粗提取量的影響(說說實驗思路) 三、DNA的鑒定: 1、方法:①取甲、乙兩支試管,并向其中加入5mL(等量)的2mol/LNaCl溶液; ②向甲試管中加入粗提取的DNA,并攪拌使DNA溶解;③向兩支試管中各加入4mL (等量)二苯胺試劑,混勻,沸水中加熱5min,待試管冷卻后,比較兩支試管的顏色 (藍色)變化。 2、注意點:實驗中需要對照,目的:證明 四、實驗結果分析與評價 1、實驗結果評價:是否提取到DNA?

6、 ①觀察提取的DNA顏色:如果不是白色絲狀物,說明DNA中的雜質較多;②二苯胺鑒定:出現(xiàn)藍色說明實驗基本成功,如果不呈現(xiàn)藍色,可能所提取的DNA含量低,或 是實驗操作中出現(xiàn)錯誤,需要重新制備。 2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色? 實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質。 3、影響絲狀物總量的因素有哪些?實驗材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時的NaCl 溶液濃度、實驗方法、攪拌方法(攪拌不當可能破壞DNA) 五、案例:(快速閱讀、理解步驟原理) 以菜花為實驗材料進行DNA的粗提取 【實驗材料準備】將新鮮菜花和體積分數(shù)為95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24h【提取DN

7、A的具體步驟】 1、取材稱取30g菜花,去梗取花,切碎。 2、研磨將碎菜花放入研缽中,倒入10mL研磨液,充分研磨10min。 教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑,使植物細胞膜破碎,釋放DNA。 學生可以設置對照實驗,比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實驗室提取 高純度的DNA都采用一種陽離子去污劑一十六烷三甲基澳化俊分離緩沖液,使細胞膜破碎,同時將DNA與植物中多糖等雜質分開,再用氯仿一異丙醇混合液(體積比為 24:1)抽提去除雜質蛋白,得到高純度的DNA。 3、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液過濾到燒杯中(有條件的學??蓪V 液倒入塑料離心管中進行

8、離心,用1000r/min的轉速,離心2?5min,取上清液放入燒 杯中)。在4c冰箱中放置幾分鐘后,再取上清液。 4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數(shù)為95%的預冷乙醇溶液中, 并用玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液(玻璃棒不要直插到燒杯底部)。沉淀3?5min后,可 見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉,將絮狀物纏繞在玻璃棒上。 六、訓練題: 1 .在DNA粗提取的過程中,兩次向燒杯中加入蒸儲水的作用分別是 A.稀釋血液;沖洗樣品B.使血細胞破裂;降低氯化鈉的濃度 C.使血細胞破裂;增大DNA的溶解度D.使血細胞破裂;沖洗樣品 2 .下列實驗中所用試劑錯誤的是

9、 A.在觀察植物細胞有絲分裂實驗中,使用醋酸洋紅溶液使染色體著色 B.在提取葉綠體色素實驗中,使用丙酮提取色素 C.在DNA的粗提取與鑒定實驗中,使用氯化鈉溶液析出DNA D.在蛋白質的鑒定實驗中,使用蘇丹出染液鑒定蛋白質 3 .NaCl的物質量為多少mol/L時,DNA的溶解度最小 A.0.12B.0.13C,0.14D,0.15 4 .在提取的細胞核物質的溶液中,加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是 A.溶解雜質B.溶解蛋白質C.析出DNAD.溶解DNA 5 .從細胞核中提取DNA所用的提取溶液是 A.NaCl溶液B.酒精C.蒸儲水D.檸檬酸鈉 6 .提取含雜

10、質較少的DNA所用的溶液 A.NaCl溶液B.冷卻90%的酒精C.加熱95%的酒精D.冷卻95%的酒精 7 .DNA遇二苯胺(沸水浴)時,會染成 A.磚紅色B.紅色C.紫色D,藍色 8 .可以鑒定DNA的物質是 A.斐林試劑B.95%的酒精C.甲基綠溶液D.二苯胺溶液 9 .破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進行基因操作,首先要提取細胞核DNA。下列不 適宜彳乍為DNA提取的實驗材料是 A.雞血細胞B.蛙的紅細胞C.人的成熟紅細胞D.菜花 10 .(多選)下表是關于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表 述.正確的是 試齊 操作 作用 A 檸檬酸

11、鈉溶液 與雞血混合 防止血液凝固 B 蒸儲水 與雞血細胞混合 保持細胞形狀 C 蒸儲水 加入到溶解有DNA的NaCl中 析出DNA絲狀物 D 冷卻的酒精 加入到過濾后DNA的NaCl中 產生特定的顏色反應 11 .(多選)下列關于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是 A.洗滌劑能瓦解細胞膜,同時也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度 B.在探究洗滌劑對植物細胞DNA提取的影響實驗中,需要控制的變量是洗滌劑和 植物細胞 C.常溫下,DNA遇二苯胺被染成藍色 D.將濾液放在60?75c的恒溫水浴箱中保溫10?15分鐘能去除濾液中的雜質,其原理是利用了DNA和蛋白質對高溫耐受性的不同 12 .如圖所示是關于“DNA的粗提取和物理性狀觀察”實驗: (1)實驗材料選用雞血球液,而不用雞全血,主要原因是雞血球液中含有較高含量的。 (2)在圖A所示的實驗步驟中加蒸儲水的目的是,通過圖B所示的步驟取得濾液,再在溶液;圖中 燕 中加入2mol/LNaCl溶液的目的是 C所示實驗步驟中加蒸儲水的目的是 DNA ,可滴加 成 O (3)為鑒定實驗所得絲狀物主要成分是果絲狀物被染 優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用

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