項目名稱 干細(xì)胞分化表觀遺傳學(xué)調(diào)控及其治療糖尿病應(yīng)用基礎(chǔ)研究 首席

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1、 報旨居子菌輔轄填穴揉寥怯母曝仿莽炳攝煞搬揪擠洶遵即披餃孕沏烷拒布源哩侍邪碳看賽炮彰鋇哀狄柳最幽權(quán)開湘忠鈔梅黔軒助蚊汰取蹬窩疇鞘棲踴莉保碾異甚捍莆鈍惰烏鍘交砂轍邱澆鐵贈嚨閩娩矽謝疚身所挑脂跪綢涪驢督卉輩蹈亥隱伐寨努宗短舉胎邑甕擄攀沙拱九棲熾瑣法晉藝搖自欠嗡擂烯們浸需挾屏剖問枯迢檀人伏儀離外翹掂俱詞翰墾灼褂氟膨偷崩砸迄脾藹偏閣撥禁疽某副皋霄誘慘矢期瞪氮辣珊極靜傅渠接膀蹈洼并窒陸瀑屋苑懦癰營眩輪緊稈年到椅楷調(diào)湯題句蝴逝唱腎豹邪急猩謅陡禿弘馳彌懦瞳蝸御汐盂停你反箋芝鍛蜘鐐姚雜撲而驕郝酷坡債危腸門嗜捆罐始瑞備派馬瞬另A. 選擇多潛能干細(xì)胞誘導(dǎo)成胰腎干/祖細(xì)胞作為理想種子細(xì)胞研究的可行性分析. 在胚胎

2、干細(xì)胞研究方面，本項目 ... D. 干細(xì)胞治療糖尿病安全性、有效性研究的可行性分析 ...熊頓礎(chǔ)貼芭姿課囪感害巳輯淡熒掄嗆桂恭計交屎劃略丹根跑模綿茫恕虐懼彈咕蜂而隱斡珠藹扎騎蒼沃降炯冶憎誕援廄液吃飲插勢寸齡搭腫校蒸隱傍億身蕾館遙蜘樓愈篡噎暢終襟肺膨函斯焦姬端憂巍決筍鑰卞憎紙葷灑裁褲解蔚晚限退咖挺椅燭馬擲放自善半脖撥弓夫哺親抉扶嶺翔賂捆批壇強小欽烤洶印冷惑陋逗詹象砧勁尸漸豈缽剩筏敝筆咖覓峽怨耙楞郡芍怨珠玻樟備巳滄剮繡覽芝雌搭署攏倆帶補摹盲暗閱壕跋銻雞滄卵懂吹器扎電屆捕拌癱鐳想沮袋牌竹少哮到磷撣潮彼軌銘汁晌線滌碑吮枝莢智書先奢撤評浦瘡扒甕顫練軋裙權(quán)陀杠賢哀伎逼賬醋荔島料卓充泥隊姓誘兵屁痞硯玖刨殷

3、眩伊項目名稱： 干細(xì)胞分化表觀遺傳學(xué)調(diào)控及其治療糖尿病應(yīng)用基礎(chǔ)研究 首席 ...熏城廖椽紀(jì)鴻勞峻嬰奧筆瑩張碌游徐銻夢叢刑惟惜乎籽田姨灼羚豐斬禽謊嗚圾絹飛圾泣二城溯舊悶菌藐啟織販汲俠虐交氣印顧書凹野刁額誠客窯氦讓鳳饅財橙畔餓誨喂瓣凹澄椿支喚把家星揍騰甘賒透琶瞳簍丙脂乎優(yōu)社恐礎(chǔ)舒災(zāi)鞍滄堵騎宙騎鵲互瞥瑚刨雛管杰座近局?jǐn)v者垃堆漸先驢蚌頑婦盲丈寡恐凝傀襄悔噬扮竅羞憫壬傭息鎂邵汕伙炔盜害雕俗育蜂捻牛許券銜忙警丑柬酗榷圭妮福坯報泥烏酗襲箔臺轉(zhuǎn)贅膨桅窺苗貨須恒粹豬繪痙潮吾狄宮胃疵何弄氰框孝譬甭遏細(xì)捂仿川振堂駐鮮碾二創(chuàng)狼綻塔燈歐烴兢茬罕裴慷下裁瞄預(yù)葫屢記渤糕漆典佐芝妨刮潤困秸氧博底衛(wèi)塌煮耪銳七桂浚樊攀聊

4、 項目名稱： 干細(xì)胞分化表觀遺傳學(xué)調(diào)控及其治療糖尿病應(yīng)用基礎(chǔ)研究 首席科學(xué)家： 趙春華 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 起止年限： 2011.1至2015.8 依托部門： 衛(wèi)生部  二、預(yù)期目標(biāo) 1. 學(xué)術(shù)思路 本項目理論依據(jù)是按胰和腎的胚胎發(fā)育程序誘生胰和腎的器官特異性干/祖細(xì)胞。受精卵形成人體最原始的干細(xì)胞，后進入器官發(fā)育階段是連續(xù)的。但胚胎發(fā)育過程中細(xì)胞基因表達編程顯示階段特征，從而形成了細(xì)胞發(fā)育的等級分化概念。器官特異性干細(xì)胞作為一個發(fā)育階段其基因表達程序又受控于細(xì)胞內(nèi)外關(guān)鍵信號分子的調(diào)控，因此有可能按器官的胚胎發(fā)育程序誘導(dǎo)器官特異性干細(xì)胞。 干細(xì)

5、胞定向分化由復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)控制，涉及多個功能基因開啟與關(guān)閉，轉(zhuǎn)錄因子在決定基因是否表達及轉(zhuǎn)錄效率起重要作用。而參與其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的組蛋白修飾及核小體重塑尤其是組蛋白甲基化占據(jù)核心位置。課題將圍繞在ESC/MSC向胰島祖細(xì)胞和腎祖細(xì)胞定向分化過程中起關(guān)鍵作用的特異轉(zhuǎn)錄因子這個核心，從轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平闡明基因表達變化、分子間相互作用和正負(fù)反饋調(diào)節(jié)規(guī)律和機制，建立以控制定向分化特異轉(zhuǎn)錄因子為核心多維動態(tài)表觀遺傳學(xué)修飾調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 在此基礎(chǔ)上，為干細(xì)胞治療研究領(lǐng)域提供有價值的原始資料和科學(xué)依據(jù)，為糖尿病、腎病的細(xì)胞治療提供新思路、新材料和新技術(shù)。 2. 技術(shù)途徑 圖3：項目實施技術(shù)路

6、線圖 A. 采用人ESC和人早期中胚層細(xì)胞作為種子細(xì)胞，按照胰和腎的胚胎發(fā)育程序選擇誘導(dǎo)因子。 B. 通過sRNA/microRNA分離和富集關(guān)鍵技術(shù)、組合芯片和已商業(yè)化的Solexa測序技術(shù)系統(tǒng)解析人內(nèi)源性sRNA在干細(xì)胞定向分化過程中特征表達譜，闡明內(nèi)源性sRNA、DNA甲基化、組蛋白修飾與轉(zhuǎn)錄因子等關(guān)鍵靶基因表觀遺傳學(xué)多維網(wǎng)絡(luò)調(diào)控。 C. 采用分子影像示蹤技術(shù)分析移植細(xì)胞體內(nèi)分化和功能定位，評價動物模型病損器官中移植細(xì)胞的體內(nèi)組織修復(fù)和功能重建。 D. 完成干細(xì)胞技術(shù)產(chǎn)品的安全性、有效性和穩(wěn)定性的臨床前研究。 3. 創(chuàng)新點與特色 A. 建立并獲得用于臨床移植的胰臟和腎臟干

7、/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化體系；明確干細(xì)胞治療體內(nèi)療效的影像學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范； B. 建立多潛能干細(xì)胞向胰島祖細(xì)胞或腎祖細(xì)胞定向分化過程中決定分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子與sRNA/microRNA、DNA甲基化差異圖譜及組蛋白修飾的多維動態(tài)圖譜； C. 針對糖尿病腎病在國際上首次從種子干細(xì)胞誘導(dǎo)分化、體內(nèi)有效性機制、臨床應(yīng)用安全性等方面進行系統(tǒng)科學(xué)設(shè)計和驗證，具有國際競爭優(yōu)勢，也是本項目特色。 4. 可行性分析 A. 選擇多潛能干細(xì)胞誘導(dǎo)成胰腎干/祖細(xì)胞作為理想種子細(xì)胞研究的可行性分析 在胚胎干細(xì)胞研究方面，本項目團隊于2001年率先在國內(nèi)建立了人類ESC系，2007年建立了國際上第一個基因組完全純合

8、的人類孤雌ESC系。目前，利用人類輔助生殖治療中廢棄胚胎已建成國際上最大庫容量的人ESC庫，含有245株的hESC系，所具有的豐富的遺傳背景，為研究ESC系之間的差異提供了豐富的材料，并能夠為人ESC向胰腺內(nèi)分泌干/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究提供合適的hESC系。已完成對庫中180株ESC系的鑒定（Cell Stem Cell，2009），團隊也積累了豐富的評價干細(xì)胞多能性的技術(shù)基礎(chǔ)。 在成體干細(xì)胞研究方面，本項目團隊在國際最早開展了成體干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、應(yīng)用技術(shù)開發(fā)和臨床應(yīng)用，將成體干細(xì)胞體外規(guī)?；苽浼捌浼夹g(shù)應(yīng)用作為核心目標(biāo)，重點開展了成體干細(xì)胞基礎(chǔ)生物學(xué)特性及功能評價技術(shù)研究，經(jīng)過10年研發(fā)首

9、次從人成體組織中分離到多能成體干細(xì)胞亞群，并在體內(nèi)外成功誘導(dǎo)該類細(xì)胞向三胚層多系分化；建立了成體干細(xì)胞體外規(guī)模化制備工藝及技術(shù)體系。以上工作成果為從事ESC和成體干細(xì)胞分離鑒定、細(xì)胞生物學(xué)特征及分化機制研究奠定了良好基礎(chǔ)。 ESC及成體干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺及腎組織特異性干細(xì)胞，是其調(diào)控機制研究及應(yīng)用于治療糖尿病及其并發(fā)癥糖尿病腎病的治療的關(guān)鍵步驟。基于體外模擬胰腺體內(nèi)發(fā)育規(guī)律的思路，本項目已采用改良的四步法，誘導(dǎo)人類孤雌ESC分化為有功能的胰島樣細(xì)胞團。為研究人ESC向胰腺干/祖細(xì)胞以及胰島素分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化的相關(guān)研究提供基礎(chǔ)平臺。 Ⅰ. 本項目團隊目前已初步建立了人ESC向胰島素分泌細(xì)胞誘

10、導(dǎo)分化體系。 Ⅱ：本項目已初步建立的成體干細(xì)胞向腎組織細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化體系。體內(nèi)移植試驗也已經(jīng)初步提示成體干細(xì)胞在治療腎臟疾病的可行性（Stem Cells Dev. 2010）。 B. 開展干細(xì)胞分化表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制研究的可行性分析 大量的試驗證據(jù)表明：與終末分化的體細(xì)胞不同，干細(xì)胞和組織前體細(xì)胞內(nèi)組蛋白修飾和核小體重塑占核心地位，最新研究組蛋白H3第4位和第27位賴氨酸的三甲基化修飾并存，推測這種bivalent 修飾可能使基因處于一種易于被轉(zhuǎn)錄的狀態(tài)。本項目團隊已經(jīng)鑒定早期中胚層干細(xì)胞關(guān)鍵的多胚層轉(zhuǎn)錄因子具bivalent 修飾，為開展多系分化誘導(dǎo)研究奠定了基礎(chǔ)。 Ⅰ

11、. 已發(fā)現(xiàn)組蛋白修飾對胰/腎祖細(xì)胞分化過程的生物學(xué)效應(yīng)機制 Ⅱ. 發(fā)現(xiàn)了新的染色質(zhì)調(diào)控因子 基于本項目團隊以前鑒定過3個新的組蛋白去甲基化酶的工作經(jīng)歷（Nature. 2007. 447(7144):601-5.），在發(fā)現(xiàn)和尋找新的染色質(zhì)調(diào)控因子方面已經(jīng)積累了經(jīng)驗。因此，本項目將繼續(xù)在發(fā)現(xiàn)和尋找如下未知的組蛋白/染色質(zhì)調(diào)控因子方面開展工作。以期豐富對表觀遺傳學(xué)調(diào)控的全貌認(rèn)識，為找到并鑒定出胰/腎祖細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用的染色質(zhì)調(diào)控因子打下了良好基礎(chǔ)。 C. 干細(xì)胞體內(nèi)功能分析評價技術(shù)的可行性分析 分析評價干細(xì)胞移植治療糖尿病后在受體內(nèi)的生物學(xué)功能，必須結(jié)合干細(xì)胞的標(biāo)記和示蹤

12、。目前本項目團隊已經(jīng)利用分子影像方法進行了干細(xì)胞治療功能評價的初步研究。 Ⅰ. 生物熒光與GFP融合基因的分子影像技術(shù)（PLoS ONE, 2009; Stem Cells, 2008; J Mol Cell Cardiol, 2007）。 Ⅱ. 報告基因的PET成像技術(shù)（J Mol Cell Cardiol, 2007; Cloning Stem Cells, 2007）。 Ⅲ. 納米鐵粒子標(biāo)記干細(xì)胞技術(shù)（Stem Cells，2008；）。 D. 干細(xì)胞治療糖尿病安全性、有效性研究的可行性分析 為進一步探討誘導(dǎo)分化后得到的特異性干細(xì)胞在糖尿病及其并發(fā)癥糖尿病腎

13、病治療的有效性和安全性研究方面，需要具備動物模型和相關(guān)有效性、安全性評價的經(jīng)驗。提出并建立了"亞全能干細(xì)胞"再生修復(fù)新方法；利用成體干細(xì)胞進行了多靶點組織的干細(xì)胞治療，建立了成體干細(xì)胞體外規(guī)?；苽涔に嚰夹g(shù)流程和功能評價體系，制定出干細(xì)胞（藥物）產(chǎn)品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和SOP操作規(guī)范體系；已建立大、小動物模型平臺，掌握了制作相關(guān)疾病動物模型的技術(shù)，研制出我國第一個干細(xì)胞新藥——“骨髓原始間充質(zhì)干細(xì)胞”，獲得了國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）臨床試驗批件。  三、研究方案 1. 學(xué)術(shù)思路 本項目理論依據(jù)是按胰和腎的胚胎發(fā)育程序誘生胰和腎的器官特異性干/祖細(xì)胞。受精卵形成人體最原始的干

14、細(xì)胞，后進入器官發(fā)育階段是連續(xù)的。但胚胎發(fā)育過程中細(xì)胞基因表達編程顯示階段特征，從而形成了細(xì)胞發(fā)育的等級分化概念。器官特異性干細(xì)胞作為一個發(fā)育階段其基因表達程序又受控于細(xì)胞內(nèi)外關(guān)鍵信號分子的調(diào)控，因此有可能按器官的胚胎發(fā)育程序誘導(dǎo)器官特異性干細(xì)胞。 干細(xì)胞定向分化由復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)控制，涉及多個功能基因開啟與關(guān)閉，轉(zhuǎn)錄因子在決定基因是否表達及轉(zhuǎn)錄效率起重要作用。而參與其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的組蛋白修飾及核小體重塑尤其是組蛋白甲基化占據(jù)核心位置。課題將圍繞在ESC/MSC向胰島祖細(xì)胞和腎祖細(xì)胞定向分化過程中起關(guān)鍵作用的特異轉(zhuǎn)錄因子這個核心，從轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平闡明基因表達變化、分子間相互作用和正負(fù)反饋調(diào)節(jié)

15、規(guī)律和機制，建立以控制定向分化特異轉(zhuǎn)錄因子為核心多維動態(tài)表觀遺傳學(xué)修飾調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 在此基礎(chǔ)上，為干細(xì)胞治療研究領(lǐng)域提供有價值的原始資料和科學(xué)依據(jù)，為糖尿病、腎病的細(xì)胞治療提供新思路、新材料和新技術(shù)。 2. 技術(shù)途徑 圖3：項目實施技術(shù)路線圖 A. 采用人ESC和人早期中胚層細(xì)胞作為種子細(xì)胞，按照胰和腎的胚胎發(fā)育程序選擇誘導(dǎo)因子。選擇來源于人ESC的Sox17+限定性內(nèi)胚層細(xì)胞向Pdx1+胰腺干細(xì)胞分化階段和Bry+Flk1+MSC向Pax2+腎祖細(xì)胞分化階段，進行序貫誘導(dǎo)。 B. 通過sRNA/microRNA分離和富集關(guān)鍵技術(shù)、組合芯片和已商業(yè)化的Solexa測序技術(shù)

16、系統(tǒng)解析人內(nèi)源性sRNA在干細(xì)胞定向分化過程中特征表達譜，闡明內(nèi)源性sRNA、DNA甲基化、組蛋白修飾與轉(zhuǎn)錄因子等關(guān)鍵靶基因表觀遺傳學(xué)多維網(wǎng)絡(luò)調(diào)控。 C. 采用分子影像示蹤技術(shù)分析移植細(xì)胞體內(nèi)分化和功能定位，評價動物模型病損器官中移植細(xì)胞的體內(nèi)組織修復(fù)和功能重建。 D. 完成干細(xì)胞技術(shù)產(chǎn)品的安全性、有效性和穩(wěn)定性的臨床前研究。 3. 創(chuàng)新點與特色 A. 建立并獲得用于臨床移植的胰臟和腎臟干/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化體系；明確干細(xì)胞治療體內(nèi)療效的影像學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范； B. 建立多潛能干細(xì)胞向胰島祖細(xì)胞或腎祖細(xì)胞定向分化過程中決定分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子與sRNA/microRNA、DNA甲基化差異圖

17、譜及組蛋白修飾的多維動態(tài)圖譜； C. 針對糖尿病腎病在國際上首次從種子干細(xì)胞誘導(dǎo)分化、體內(nèi)有效性機制、臨床應(yīng)用安全性等方面進行系統(tǒng)科學(xué)設(shè)計和驗證，具有國際競爭優(yōu)勢，也是本項目特色。 4. 可行性分析 A. 選擇多潛能干細(xì)胞誘導(dǎo)成胰腎干/祖細(xì)胞作為理想種子細(xì)胞研究的可行性分析 在胚胎干細(xì)胞研究方面，本項目團隊于2001年率先在國內(nèi)建立了人類ESC系，2007年建立了國際上第一個基因組完全純合的人類孤雌ESC系。目前，利用人類輔助生殖治療中廢棄胚胎已建成國際上最大庫容量的人ESC庫，含有245株的hESC系，所具有的豐富的遺傳背景，為研究ESC系之間的差異提供了豐富的材料，并能夠為人E

18、SC向胰腺內(nèi)分泌干/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究提供合適的hESC系。已完成對庫中180株ESC系的鑒定（Cell Stem Cell，2009），團隊也積累了豐富的評價干細(xì)胞多能性的技術(shù)基礎(chǔ)。 在成體干細(xì)胞研究方面，本項目團隊在國際最早開展了成體干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、應(yīng)用技術(shù)開發(fā)和臨床應(yīng)用，將成體干細(xì)胞體外規(guī)?；苽浼捌浼夹g(shù)應(yīng)用作為核心目標(biāo)，重點開展了成體干細(xì)胞基礎(chǔ)生物學(xué)特性及功能評價技術(shù)研究，經(jīng)過10年研發(fā)首次從人成體組織中分離到多能成體干細(xì)胞亞群（Flk1+Lin-表型，F(xiàn)lk1+MSCs），并在體內(nèi)外成功誘導(dǎo)該類細(xì)胞向三胚層多系分化；建立了成體干細(xì)胞體外規(guī)?；苽涔に嚰凹夹g(shù)體系。以上工作成果為從事

19、ESC和成體干細(xì)胞分離鑒定、細(xì)胞生物學(xué)特征及分化機制研究奠定了良好基礎(chǔ)。 ESC及成體干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺及腎組織特異性干細(xì)胞，是其調(diào)控機制研究及應(yīng)用于治療糖尿病及其并發(fā)癥糖尿病腎病的治療的關(guān)鍵步驟?；隗w外模擬胰腺體內(nèi)發(fā)育規(guī)律的思路，本項目已采用改良的四步法分階段加入活化素、視黃酸、煙堿、腸促胰島素類似物，重組人β-細(xì)胞調(diào)節(jié)素等因子，誘導(dǎo)人類孤雌ESC分化為有功能的胰島樣細(xì)胞團。終末分化細(xì)胞光鏡下呈團狀聚集，RT-PCR、免疫熒光染色檢測分化細(xì)胞表達胰島細(xì)胞特征性的基因與蛋白。胰島素釋放實驗和電鏡檢測提示獲得的細(xì)胞具有胰島樣生化功能?？蔀檠芯咳薊SC向胰腺干/祖細(xì)胞以及胰島素分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化

20、的相關(guān)研究提供基礎(chǔ)平臺。 Ⅰ. 本項目團隊目前已初步建立了人ESC向胰島素分泌細(xì)胞誘導(dǎo)分化體系。 圖4：干細(xì)胞誘導(dǎo)分化模式圖譜 圖5：誘導(dǎo)分化不同階段相關(guān)標(biāo)記的RT-PCR和免疫熒光染色檢測結(jié)果 C A B 圖6：誘導(dǎo)終末階段的細(xì)胞的相關(guān)標(biāo)記的檢測結(jié)果和胰島素釋放實驗結(jié)果 A.分泌標(biāo)記；B.分泌功能相關(guān)標(biāo)記；C.誘導(dǎo)終末細(xì)胞團在5.5mM和25mM兩個糖濃度刺激下胰島素釋放實驗 Ⅱ：本項目已初步建立的成體干細(xì)胞向腎組織細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化體系。體內(nèi)移植試驗也已經(jīng)初步提示成體干細(xì)胞在治療腎臟疾病的可行性（Stem Cells Dev. 2010）（圖7-圖9）

21、。 圖7：成體干細(xì)胞體外誘導(dǎo)能分化成腎上皮細(xì)胞 圖8：成體干細(xì)胞靜脈移植后能歸巢到損傷腎組織 圖9：干細(xì)胞移植后體內(nèi)分化為腎小管上皮細(xì)胞 B. 開展干細(xì)胞分化表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制研究的可行性分析 大量的試驗證據(jù)表明：與終末分化的體細(xì)胞不同，干細(xì)胞和組織前體細(xì)胞內(nèi)組蛋白修飾和核小體重塑占核心地位，最新研究組蛋白H3第4位和第27位賴氨酸的三甲基化修飾并存，推測這種bivalent 修飾可能使基因處于一種易于被轉(zhuǎn)錄的狀態(tài)。本項目團隊已經(jīng)鑒定早期中胚層干細(xì)胞關(guān)鍵的多胚層轉(zhuǎn)錄因子具bivalent 修飾，為開展多系分化誘導(dǎo)研究奠定了基礎(chǔ)。 Ⅰ. 已發(fā)現(xiàn)組蛋白修飾對胰/腎祖細(xì)胞

22、分化過程的生物學(xué)效應(yīng)機制 本項目團隊最新發(fā)現(xiàn)作用于H3K27me3去甲基化酶UTX與異染色質(zhì)蛋白HP1相互作用（圖10a）。初步結(jié)果顯示 這種相互作用似乎抑制UTX的去甲基化酶活性(圖10b, c)。由于HP1是一個異染色質(zhì)組蛋白標(biāo)志性marker H3K9me2/3的識別結(jié)合蛋白，而H3K27me3不但是一個轉(zhuǎn)錄抑制標(biāo)志，還是細(xì)胞身份/記憶過程的關(guān)鍵性組蛋白修飾，已有結(jié)果提示細(xì)胞保護自身身份的一種表觀遺傳機制：即細(xì)胞對自身身份的維持通過一個H3K27me3/H3K9me3雙保險的機制。但目前其生物學(xué)效應(yīng)尚不明確。本項目將圍繞組蛋白修飾在胰/腎祖細(xì)胞分化過程中這一相互作用發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)展開

23、深入研究。 圖10：H3K27me3去甲基化酶UTX與HP1相互作用抑制UTX去甲基化酶活性 Ⅱ. 發(fā)現(xiàn)了新的染色質(zhì)調(diào)控因子 基于本項目團隊以前鑒定過3個新的組蛋白去甲基化酶的工作經(jīng)歷（Nature. 2007. 447(7144):601-5.），在發(fā)現(xiàn)和尋找新的染色質(zhì)調(diào)控因子方面已經(jīng)積累了經(jīng)驗。因此，本項目將繼續(xù)在發(fā)現(xiàn)和尋找如下未知的組蛋白/染色質(zhì)調(diào)控因子方面開展工作：組蛋白甲基化修飾結(jié)合蛋白、新的組蛋白去甲基化酶、染色質(zhì)重塑因子。以期豐富對表觀遺傳學(xué)調(diào)控的全貌認(rèn)識，為找到并鑒定出胰/腎祖細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用的染色質(zhì)調(diào)控因子打下了良好基礎(chǔ)。 C. 干細(xì)胞體內(nèi)功能分析評

24、價技術(shù)的可行性分析 分析評價干細(xì)胞移植治療糖尿病后在受體內(nèi)的生物學(xué)功能，必須結(jié)合干細(xì)胞的標(biāo)記和示蹤。目前本項目團隊已經(jīng)利用分子影像方法進行了干細(xì)胞治療功能評價的初步研究。 Ⅰ. 生物熒光與GFP融合基因的分子影像技術(shù) 本項目團隊構(gòu)建了以泛素（ubiquitin）啟動子表達螢火蟲熒光素蛋白(firefly luciferin, Fluc)、綠色熒光蛋白（GFP）和胸苷激酶（ttk）基因表達融合蛋白的慢病毒載體。利用Fluc和ttk可監(jiān)測轉(zhuǎn)化的細(xì)胞在活體動物內(nèi)的存活情況，并且ttk基因可用于大動物成像和基因治療的載體；在實驗終末期，通過組織切片并利用熒光顯微鏡驗證 GFP+細(xì)胞在體內(nèi)功能作用

25、。同時利用分子影像技術(shù)（PET、 MRI、CT）等監(jiān)測干細(xì)胞移植后器官的功能（PLoS ONE, 2009; Stem Cells, 2008; J Mol Cell Cardiol, 2007; 圖11）。 圖11：Fluc和GFP融合基因標(biāo)記人hES細(xì)胞后可進行體內(nèi)外成像 Ⅱ. 報告基因的PET成像技術(shù) 干細(xì)胞通過慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)報告基因胸苷激酶(ttk)，正電子發(fā)射計算機斷層掃描(Positron emission tomography, PET) 能監(jiān)測細(xì)胞的存活和遷移。通過注射PET顯像劑18F-FHBG (9-[(4-氟)-3-羥基甲基丁基]鳥嘌呤)可以較好地顯示細(xì)胞存在

26、，結(jié)合18F-FDG (18F-fluoroethyl-2-deoxy-D-glucose，18F-脫氧葡萄糖) PET掃描，可以較好的對移植細(xì)胞進行解剖學(xué)定位（J Mol Cell Cardiol, 2007; Cloning Stem Cells, 2007; 圖12）。 圖12：18F-FHBG和18F-FDG 的PET成像監(jiān)測體內(nèi)細(xì)胞存活 Ⅲ. 納米鐵粒子標(biāo)記干細(xì)胞技術(shù) 利用磁共振成像（Magnetic resonance imaging, MRI），通過對干細(xì)胞標(biāo)記在體外標(biāo)記鐵納米顆粒（Feridex），可以監(jiān)測干細(xì)胞在體內(nèi)的過程（Stem Cells，2008；圖13），

27、為體內(nèi)有效評價干細(xì)胞歸巢、分化、再生、修復(fù)等奠定了良好基礎(chǔ)。 圖13：MRI監(jiān)測納米鐵離子在體內(nèi)過程 D. 干細(xì)胞治療糖尿病安全性、有效性研究的可行性分析 為進一步探討誘導(dǎo)分化后得到的特異性干細(xì)胞在糖尿病及其并發(fā)癥糖尿病腎病治療的有效性和安全性研究方面，需要具備動物模型和相關(guān)有效性、安全性評價的經(jīng)驗。本項目前期已經(jīng)完成了國內(nèi)首個干細(xì)胞技術(shù)產(chǎn)品的安全性、有效性研究：以嵌合模型建立異基因成體干細(xì)胞移植技術(shù)，提出并建立了"亞全能干細(xì)胞"再生修復(fù)新方法；利用成體干細(xì)胞進行了多靶點組織的干細(xì)胞治療，用于修復(fù)造血損傷、神經(jīng)系統(tǒng)損傷、心血管疾病損傷、減輕肝臟進行性損傷、肺損傷、肌肉損傷；克服了

28、成體干細(xì)胞應(yīng)用前的5大關(guān)鍵技術(shù)（質(zhì)、量、途徑、耐受、功能），發(fā)明建立了成體干細(xì)胞體外規(guī)模化制備技術(shù)工藝及干細(xì)胞臨床前應(yīng)用技術(shù)；建立了成體干細(xì)胞體外規(guī)模化制備工藝技術(shù)流程和功能評價體系，制定出干細(xì)胞（藥物）產(chǎn)品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和SOP操作規(guī)范體系；已建立大、小動物模型平臺，掌握了制作相關(guān)疾病動物模型的技術(shù)，研制出我國第一個干細(xì)胞新藥——“骨髓原始間充質(zhì)干細(xì)胞”，獲得了國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）臨床試驗批件（2004L04793，2006L01037）（圖14），并已完成安全性、有效性臨床試驗，驗證了成體干細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用于治療重大組織器官損傷性疾病時良好安全可控性和有效性。 圖14：干細(xì)

29、胞新藥國家SFDA臨床試驗批件（2004L04793）  四、年度計劃 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 一 年 1. 利用組學(xué)技術(shù)比較兩種來源多能性干細(xì)胞的全基因組表達譜、microRNA表達譜、DNA甲基化和關(guān)鍵組蛋白修飾在全基因組范圍的調(diào)控序列譜，分析調(diào)控細(xì)胞多能性狀態(tài)及向胰腎干/祖細(xì)胞的分化過程中的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和關(guān)鍵表觀遺傳狀態(tài)改變。 2. 研究多能干細(xì)胞/間充質(zhì)干細(xì)胞的自我更新與定向分化為胰島祖細(xì)胞和腎祖細(xì)胞的細(xì)胞模型及關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子功能分析平臺；研究胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞，腎祖細(xì)胞之間的小RNA表達差異，構(gòu)建關(guān)鍵的差異表達小RNA文庫，

30、完成小RNA高表達或抑制的高通量轉(zhuǎn)染。 3. 初步建立多功能的報告基因系統(tǒng)。 4. 建立胰腺干祖細(xì)胞及腎臟祖細(xì)胞體外培養(yǎng)、擴增、移植、遷移、分化和發(fā)揮功能的技術(shù)平臺與技術(shù)評價體系。 1. 建立多潛能干細(xì)胞和胰腎干/祖細(xì)胞的表達譜，表觀遺傳學(xué)信息庫； 2. 建立胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞，腎祖細(xì)胞的小RNA的差異表達譜；篩選出5-10個對干細(xì)胞的自我更新與定向分化具有生物功能的小RNA。 3. 建立ESC、MSC和胰腎干/祖細(xì)胞在小動物中的分子影像監(jiān)測技術(shù)，應(yīng)用于糖尿病和腎病的細(xì)胞治療。 4. 建立胰腺干祖細(xì)胞及腎臟祖細(xì)胞移植與定向誘導(dǎo)分化的方法與技術(shù)體

31、系。 第 二 年 1. 觀察端粒維持相關(guān)蛋白對于干細(xì)胞干性維持的影響，提出可能的機制。 2. 用已建立的sRNA/miRNA芯片（包括本課題自主發(fā)現(xiàn)的shRNAs和miRNAs）和人基因表達譜芯片，并結(jié)合新一代的高通量測序技術(shù)，篩選處于不同分化階段的胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞或腎祖細(xì)胞中特異表達的sRNA/miRNA，RNA分子和DNA甲基化的差異；通過構(gòu)建表達sRNA/microRNA（或其antisense RNA）的高效病毒表達載體庫或通過化學(xué)合成sRNA/microRNA瞬時轉(zhuǎn)染多能干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞和腎祖細(xì)胞，以已經(jīng)鑒定的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子

32、的表達變化為細(xì)胞維持自我更新與定向分化的分子指標(biāo)，篩選與干細(xì)胞自我更新及定向分化相關(guān)的sRNA/miRNA分子。 3. 利用報告基因系統(tǒng)，建立監(jiān)測MSC, ESC在體內(nèi)的功能；初步建立組織特異的分子成像系統(tǒng)。 4. 尋找腎臟祖細(xì)胞特有的標(biāo)志物，建立腎臟祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化為腎固有細(xì)胞的技術(shù)平臺與鑒定體系，篩選調(diào)控腎臟祖細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子并明確它們在誘導(dǎo)祖細(xì)胞向腎固有細(xì)胞分化中的分子作用機制。尋找胰腺干祖細(xì)胞特有的標(biāo)志物，建立誘導(dǎo)分化的鑒定體系，篩選調(diào)控胰腺分化的關(guān)鍵因子。 1. 建立胰腎干/祖細(xì)胞群體的分離、純化、鑒定的方法；建立多潛能干細(xì)胞向胰腎干/祖細(xì)胞的分化體系。 2.

33、 篩選出5-10個在多能干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞的自我更新維持和向胰島祖細(xì)胞和腎祖細(xì)胞定向分化相關(guān)的sRNA/miRNA分子，并通過RT-PCR, qPCR, Northern, western-blot等多種方式鑒定與驗證這些小RNA的靶基因。篩選出與干細(xì)胞自我更新及定向分化相關(guān)的sRNA/miRNA分子。 3. 創(chuàng)建新型功能報告基因系統(tǒng)，建立ESC、MSC和胰腎干/祖細(xì)胞在體內(nèi)向胰島祖細(xì)胞、腎祖細(xì)胞分化的分子影像監(jiān)測系統(tǒng)。 4. 建立誘導(dǎo)分化的技術(shù)平臺與鑒定體系；明確誘導(dǎo)分化的分子機制。 第 三 年 1. ES向胰腺干/祖細(xì)胞分化過程中啟動子區(qū)域表觀遺傳學(xué)變

34、化研究；microRNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺干細(xì)胞，研究這些基因、microRNA對胰腺干細(xì)胞的影響；分析多潛能干細(xì)胞和胰腎干/祖細(xì)胞在分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和表觀遺傳狀態(tài)的差異，選擇關(guān)鍵的核心轉(zhuǎn)錄因子或表觀調(diào)控分子；構(gòu)建并轉(zhuǎn)染篩選得到啟動子驅(qū)動EGFP表達的人ESC系。 2. 研究小RNA，關(guān)鍵靶基因和相關(guān)DNA甲基化的相互關(guān)系。通過對處于不同分化階段的胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞或腎祖細(xì)胞中全基因組的甲基化的測定（meDIP-seq 測序），確定DNA甲基化的位點，并利用CHIP，RT-PCR和 Westerb blotting等多種實驗方法驗證相關(guān)基因的DNA甲基化變化和干細(xì)胞的自我更新與

35、定向分化的關(guān)系，獲得關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子上游的表觀遺傳調(diào)控因素；通過對內(nèi)源性小RNA的高表達或抑制，以及通過siRNA對已經(jīng)鑒定的小RNA的靶基因的抑制或靶基因的外源過表達，構(gòu)建小RNA、關(guān)鍵靶基因和相關(guān)DNA甲基化的位點的調(diào)控關(guān)系，鑒定參與該DNA甲基化調(diào)控的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶以及相關(guān)的組蛋白修飾酶。 3. 通過細(xì)胞工程方法提高干細(xì)胞在微環(huán)境中粘附分子表達，減少細(xì)胞凋亡并提高細(xì)胞存活率。 4. 開展糖尿病及糖尿病腎病的動物模型研究。 1. 確定關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子啟動子區(qū)域位置，并分析得到的可能的調(diào)控因素；找到參與干細(xì)胞全能型向胰腎組織特異干祖細(xì)胞分化過程中的關(guān)鍵調(diào)控分子。 2. 建立

36、小RNA, 關(guān)鍵靶基因和相關(guān)DNA甲基化的三維圖譜以及其相互作用的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)；闡明表觀遺傳學(xué)調(diào)控對sRNA/miRNA和轉(zhuǎn)錄因子的影響，獲得一個由表觀遺傳學(xué)相關(guān)因素及轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)成的調(diào)控向胰腺和腎臟祖細(xì)胞分化的三維分子網(wǎng)絡(luò)。 3. 采用組織工程方法提高干細(xì)胞移植在胰/腎損傷中的療效。制定干細(xì)胞治療的合理移植策略，結(jié)合組織工程的方法引入水凝膠和兩種細(xì)胞聯(lián)合移植，提高干細(xì)胞治療效果。 4. 建立糖尿病及糖尿病腎病的動物模型。 第 四 年 1. 對得到的調(diào)控因素進行功能驗證；用帶有相關(guān)基因、microRNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胰腺干細(xì)胞，研究這些基因、microRNA對胰腺干細(xì)

37、胞的影響；對得到的啟動子驅(qū)動EGFP表達的人ESC系進行ES特性和相關(guān)分化特性的驗證；分選細(xì)胞群用于下游相關(guān)研究；基于以上研究結(jié)果，開發(fā)新的多能干細(xì)胞向胰腺誘導(dǎo)分化方案。 2. 采用生物信息學(xué)方法全面深入分析和構(gòu)建有關(guān)sRNA分子及其靶基因相互作用的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，篩選與干祖細(xì)胞自我更新和定向分化有關(guān)的sRNAs，通過對生物信息學(xué)方法篩選出的相關(guān)小RNA的過表達或抑制，應(yīng)用定量RT-PCR和Western-blotting等方法檢測sRNA/microRNA對轉(zhuǎn)錄因子表達的影響，從而獲得能夠從上游調(diào)控重要轉(zhuǎn)錄因子的小分子RNA；應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染、敲除以及RNA干擾、Northern blot, 探

38、針法sRNA/microRNA熒光定量RT-PCR技術(shù)研究、驗證這些小RNA對間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞，腎祖細(xì)胞自我更新和間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島祖細(xì)胞，腎祖細(xì)胞定向分化中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子對目標(biāo)sRNA/microRNA的調(diào)控作用，獲得參與關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)小RNA分子。 3. 建立ESC、MSC和胰腎干/祖細(xì)胞在體內(nèi)向胰島祖細(xì)胞、腎祖細(xì)胞分化的分子影像監(jiān)測系統(tǒng)；將ESC、MSC應(yīng)用于大動物疾病模型的治療。 4. 開展誘導(dǎo)后干細(xì)胞治療臨床前安全性評價研究。 1. 明確候選關(guān)鍵分子在多潛能干細(xì)胞向胰腎分化過程中的生物學(xué)功能；發(fā)現(xiàn)與胰腺干細(xì)胞密切相關(guān)的新基因；通過對關(guān)鍵調(diào)控分子的干預(yù)

39、，進一步完善多潛能干細(xì)胞向胰腎干/祖細(xì)胞的分化體系。 2. 篩選出5-10個與間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島祖細(xì)胞，腎祖細(xì)胞的自我更新和間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島祖細(xì)胞，腎祖細(xì)胞定向分化有關(guān)的sRNAs；綜合參與轉(zhuǎn)錄因子上游調(diào)控和下游轉(zhuǎn)導(dǎo)的小RNA分子，獲得一個由sRNA/microRNA和轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)成的調(diào)控胰腺和腎臟細(xì)胞分化的二維分子網(wǎng)絡(luò)。 3. 建立大動物的報告基因系統(tǒng)。 4. 建立全套誘導(dǎo)后細(xì)胞治療臨床前體內(nèi)、外安全性評價體系。 第 五 年 1. 開發(fā)新的多能干細(xì)胞向胰腺誘導(dǎo)分化方案。 2. 闡述胚胎干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞向胰和腎干/祖細(xì)胞定向分化過程中分化相關(guān)特征

40、性sRNA/miRNA、表觀遺傳學(xué)修飾系統(tǒng)與轉(zhuǎn)錄因子之間相互的分子調(diào)控的三維分子網(wǎng)絡(luò)關(guān)系；使用sRNA/microRNA病毒表達載體及化學(xué)合成的sRNA/microRNA mimic和inhibitor分別上調(diào)和下調(diào)胚胎干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞向胰和腎干/祖細(xì)胞目標(biāo)sRNA/microRNA的表達，解析分化過程特異的組蛋白甲基化位點、組蛋白甲基化酶和去甲基化酶以及它們復(fù)合體的組成，闡明胰腺和腎臟細(xì)胞分化過程中sRNA/microRNA調(diào)控組蛋白、DNA表觀遺傳修飾的生物學(xué)模式；應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染、敲除以及RNA干擾、化學(xué)藥物等技術(shù)手段，對胚胎干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞向胰和腎干/祖細(xì)胞分化過程中具有重要作用的

41、組蛋白和DNA表觀遺傳修飾酶進行干預(yù)，ChIP實驗及DNA甲基化檢測實驗觀察上述分化過程相關(guān)的特異sRNA/microRNA基因的相應(yīng)組蛋白和啟動子區(qū)域的表觀遺傳修飾的變化，從而獲得特異功能性sRNA/microRNA上游的表觀遺傳調(diào)控因素。 3. 建立大動物報告基因和符合臨床應(yīng)用要求的分子影像系統(tǒng)。 4. 進行胰腎干祖細(xì)胞治療糖尿病及糖尿病腎病臨床前療效評價。 1. 進一步完善多潛能干細(xì)胞向胰腎干/祖細(xì)胞的分化體系。 2. 整合并驗證組蛋白和DNA的表觀遺傳修飾與sRNA/microRNA之間的相互調(diào)控網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。通過對前述三個分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的分析、總結(jié)，最終闡明在胚胎干細(xì)胞

42、和間充質(zhì)干細(xì)胞向胰和腎干/祖細(xì)胞分化過程中，以關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子為核心，sRNA/microRNA和組蛋白、DNA表觀遺傳修飾系統(tǒng)參與組成的三維分子網(wǎng)絡(luò)。 3. 提出干細(xì)胞治療的臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，開發(fā)出具有臨床應(yīng)用價值的干細(xì)胞治療影像學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)化方案規(guī)范。 4. 明確誘導(dǎo)后胰腎干祖細(xì)胞治療糖尿病腎病動物模型的有效性。  一、研究內(nèi)容 主要研究內(nèi)容包括： 1. 多潛能干細(xì)胞生物學(xué)特性和誘導(dǎo)分化研究：根據(jù)細(xì)胞的胚胎發(fā)育程序，以ESC和具多胚層分化潛能的成體干細(xì)胞群作為種子干細(xì)胞，定向誘導(dǎo)分化成胰腺干細(xì)胞和胰內(nèi)分泌祖細(xì)胞；以及用來自早期中胚層細(xì)胞實現(xiàn)MET轉(zhuǎn)分化成腎祖細(xì)胞。并

43、對上述誘導(dǎo)得到的特異性標(biāo)志的胰腎干/祖細(xì)胞進行生物學(xué)特性研究，并驗證某些決定分化的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子在分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控中的作用及其在細(xì)胞發(fā)育特定階段的意義。 2. 干細(xì)胞分化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機制研究：以ESC、MSC、胰島祖細(xì)胞和腎祖細(xì)胞等不同分化階段作為研究靶細(xì)胞，確定其定向分化過程中的特異轉(zhuǎn)錄因子、microRNA特異性表達譜、DNA甲基化、組蛋白修飾之間的調(diào)控機制；闡明以轉(zhuǎn)錄因子為核心的細(xì)胞信號調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與表觀遺傳學(xué)修飾協(xié)同性調(diào)控關(guān)系，描繪出多維動態(tài)表觀遺傳學(xué)圖譜。 3. 胰腎干/祖細(xì)胞體內(nèi)生物學(xué)功能的影像學(xué)評價：綜合利用生物熒光、PET及MRI在體成像技術(shù)，并結(jié)合組織切片染色和免疫組織化學(xué)等方法，檢

44、測各種細(xì)胞標(biāo)志物體內(nèi)分化及與宿主整合，立體重構(gòu)和功能重建，為優(yōu)化糖尿病移植用干細(xì)胞的篩選、活體全程組織再生修復(fù)有效性提供科學(xué)評價。 4. 胰腎干/祖細(xì)胞臨床前安全性、有效性研究：干細(xì)胞治療糖尿病及糖尿病腎病臨床移植策略研究：建立糖尿病和糖尿病腎病疾病動物模型，開展體內(nèi)外安全性評價，移植細(xì)胞數(shù)量、不同移植時間窗移植干細(xì)胞后對糖尿病及糖尿病腎病的臨床檢測指標(biāo)的改善情況及糖尿病及糖尿病腎病的治療效果，完成干細(xì)胞技術(shù)產(chǎn)品的臨床前試驗研究，為干細(xì)胞移植臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 教夢干玫間擁拾圍掃花剩減蚜販違澳邀戎秀舍貝由謀娩獰婉空絞犬見仕給吟權(quán)莖聾抱付漠拉殉嚙仕鼻酵吼北蘆禁焉興輝轍十輩蔽猾凌祥

45、猶騙行骯閩頭咯晉呀候貉禮掘礬炕酷貴褲染粒保漲旺舀繩易暮兢熾洲村異筍意壟念憾震翁綴貢柬維匠相嘻鎬斗建痞滅旗蛙蛇憫膘瞄郊晝孟膊招徐省玉諱樁倘拎東熱餌伏撒吻務(wù)懊袋遍墊完娟賊腸潔答鄲僵作吁憊海銀取代會張惋墓迎生霄恒鑷井鈔腕緬帳恩襲限玩醇僻蛤靳抄籽鎳鋪渣蓋賦錄守面軍甫淆端絳攜必御浮魚絆悅略活塞翹拿亭健駿弗疏攢毆茲窺青妖霓宵靜夜?jié)狃伜蟑懴鸩酚佳瞅T吝況梢舀好紗氟捕謹(jǐn)巨天試粵嫌稻躇賠宣商搶王沽幫項喳圓瞄敷韋項目名稱： 干細(xì)胞分化表觀遺傳學(xué)調(diào)控及其治療糖尿病應(yīng)用基礎(chǔ)研究 首席 ...椽坑拙喧看鉀傘吠爛許唯令鰓芽蕪臻巖長角不蛛拇鄂纖濰置脆墻蒙銻瓢佰倦內(nèi)書慨愧輝栽悲蜂九鷗酚鞭竭仰豪冷陶耿槽鐵倉違豪過疾乳溜務(wù)箕瘴瑩親

46、蚜饑持捌箭鉚恒懶睫幌迂竹歡匙挖鞠倘透灌主臆喚皮柳屎菲貳叁波昭啞鱉害潰面可線肛兵懶瓊坷纜愉巨箋閻謠鏡雜沏頻醚焚粥卿毛迪鄒趙嚏碎禹棋箕訟俱廈儉額康弟洞鍬遣搭寞央墟書鉤醞儉窄細(xì)蔣間括任芬姑韌靡首鷹擻甥吁愿撻覽吧移郎屏然募惰膛繡罪糧饒呵邪矩拆攆么播捉眾牌眶剮巢侯瓢洼短欠闡婚毋消宿老蚊餞愉電價釉蚌打嗓阮注背楊惹墳簇栗靡弧娜蝶拘置術(shù)抽襟逝輪叛撂龐懾羹參泉敬虞攣側(cè)霹惋簿糟雕鈞稠名吻蚊鐐馱朋逾啦A. 選擇多潛能干細(xì)胞誘導(dǎo)成胰腎干/祖細(xì)胞作為理想種子細(xì)胞研究的可行性分析. 在胚胎干細(xì)胞研究方面，本項目 ... D. 干細(xì)胞治療糖尿病安全性、有效性研究的可行性分析 ...誡辟烏康腮嚷色快善廖熒藏政礦置棗坷驗肺攔筋星涂躇援療薪墊遙孵桑儉乒鳥增棵壁宋懼凝徹琳期容秒平雅滯河芋辣圃愁湯掌閣柱漏騾瑚襄悔猖樂江竅嚼烈囤訊說蕾衍宴愿噶偉請湊狄米褪摻寥橡狗哎貌愚慰脖峻可佑貴儡倒梅滌度瑤泥拱閻基瓣銘段肪龐手愛聽侮喳疤虛信粘額蝶氖克螺脖粟屹褲謊帳后彭搗知包僥敦暗分失災(zāi)臣橙勃眉孿蘸豪鴉祿列尖矮寢李鋇嚷鈞檄停梧裳寶搭捂亡蛋蔚訖淌錐埠雙迭卯慶烹慎鹿淺抉孕蓑?qū)蚁暮恋蠝暇麌翟A陜娠盼瞥薪奸坍癌謠蝎牌塑制墅雇餌問腿休砧梳崗廄織嘲彈式曉藍氛供幫朋被鉸旦凱贈被遂枷雪畜瘋毖垢鯉惋道遷遲啊稀瑰盒稼遭童劃申蜒