2018-2019學年高中生物 專題2 細胞工程 2.2 動物細胞工程 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體教學案（含解析）新人教版選修3.doc

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動物細胞融合與單克隆抗體 1．動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。 2．動物細胞融合常用的誘導因素有聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等。 3．動物細胞融合的主要用途是制備單克隆抗體。 4．雜交瘤細胞是由經免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合而成的，具有既能無限增殖又能產生專一抗體的能力。 5．制備單克隆抗體過程中第一次篩選是為了獲得雜交瘤細胞，第二次篩選是為了獲得能產生特定抗體的雜交瘤細胞。 6．單克隆抗體最主要的優(yōu)點是特異性強、靈敏度高，并可大量制備。 7．單克隆抗體的主要用途有：作為診斷試劑、用于治療疾病和運載藥物。 一、動物細胞融合 1．概念：是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，也稱細胞雜交。 2．結果：形成雜交細胞。 3．誘導因素：聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等。 4．意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。 5．應用 (1)是研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。 (2)為制備單克隆抗體開辟了新途徑。 二、單克隆抗體 1．傳統(tǒng)抗體的獲得 (1)方法： (2)缺點：產量低、純度低、特異性差。 2．單克隆抗體的制備及優(yōu)點 (1)雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量繁殖，又能產生專一的抗體。 (2)制備過程： (3)單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、可大量制備。 3．單克隆抗體的應用 (1)作為診斷試劑，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。 (2)用于治療疾病和運載藥物。 1．動物細胞融合技術最重要的意義是(　　) A．克服遠緣雜交不親和的障礙 B.制備單克隆抗體 C．培育新物種 D．生產雜交細胞 解析：選A　與植物體細胞雜交相似，進行動物細胞融合的最大意義是突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。 2．與植物原生質體融合相比，動物細胞融合特有的誘導因素是(　　) A．聚乙二醇　　　　　　B．滅活的病毒 C．振動 D．電激 解析：選B　動物細胞融合可以用滅活的病毒誘導，而植物原生質體融合不能用滅活的病毒誘導。 3．動物細胞融合的原理是(　　) A．細胞膜的流動性 B．細胞膜的選擇透過性 C．細胞質的流動性 D．細胞質酶的活性 解析：選A　細胞能融合的原理是細胞膜具有流動性。 4．科學家們用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交瘤細胞，經培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是(　　) A．經過免疫的T淋巴細胞 B．未經過免疫的T淋巴細胞 C．經過免疫的B淋巴細胞 D．未經過免疫的B淋巴細胞 解析：選C　B淋巴細胞接受抗原刺激后，能形成效應B細胞，從而產生抗體與相應的抗原特異性結合而發(fā)揮免疫效應，所以只有經過免疫的B淋巴細胞才會產生專一性的抗體。 5．運用細胞工程技術獲得單克隆抗體時，下列操作不必要的是(　　) A．對小動物注射抗原 B．融合并篩選雜交瘤細胞 C．培養(yǎng)雜交瘤細胞 D．將胰蛋白酶注入小鼠腹腔 解析：選D　胰蛋白酶在動物細胞培養(yǎng)時用到，是加到培養(yǎng)基中用于分離細胞的。 1．融合的原理與過程 (1)原理：細胞膜的流動性。 (2)過程：動物細胞融合的過程包括細胞膜融合、細胞質融合和細胞核融合。其中細胞膜融合是細胞融合的先導，在細胞膜融合中體現(xiàn)出細胞膜具有一定的流動性，細胞融合的實質是核融合。動物細胞融合完成的標志是兩個或多個細胞核融合為一個細胞核。如下圖(以滅活的病毒誘導為例)： 2．融合的結果 形成單核雜交細胞，具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息，可表現(xiàn)出兩個或多個親本的特點。 3．植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較 比較項目 植物體細胞雜交 動物細胞融合 原理 細胞膜的流動性、細胞的全能性 細胞膜的流動性、細胞的增殖 融合前處理 先除去細胞壁 先使細胞分散開 使用的酶 纖維素酶和果膠酶 胰蛋白酶或膠原蛋白酶 誘導手段 物理法：離心、電激、振動 化學法：聚乙二醇等試劑誘導 除物理法和化學法外，也可用滅活的病毒誘導 過程 結果 雜種植株 雜交細胞 應用 培育植物新品種 主要用于制備單克隆抗體 意義 克服了遠緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴展了雜交的親本組合 [題組沖關] 1．關于動物細胞融合的說法，錯誤的是(　　) A．動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程 B．動物細胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細胞遺傳信息的單核細胞稱為雜交細胞 C．常用的誘導動物細胞融合的因素有：聚乙二醇、滅活的病毒、電激、紫外線照射 D．細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能 解析：選C　動物細胞融合常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等，紫外線照射不能誘導細胞融合。 2．下列關于動物細胞融合與植物體細胞雜交技術的說法，正確的是(　　) A．基本原理相同 B．誘導細胞融合的方法相同 C．細胞融合前的處理過程相同 D．融合后都需要進行篩選 解析：選D　植物體細胞雜交的原理為細胞膜的流動性、植物細胞的全能性，而動物細胞融合利用的是細胞膜的流動性和細胞增殖；動物細胞融合常用滅活的病毒誘導，而植物體細胞雜交不能；動物細胞融合前需用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散開，植物體細胞雜交常用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁；誘導融合后會形成多種融合細胞，還有未融合細胞，因此要進行篩選。 1．血清抗體與單克隆抗體的比較 名稱 產生 特點 血清抗體 由B淋巴(漿) 細胞分泌 一般從血清中分離，產量低、純度低、特異性差 單克隆抗體 由雜交瘤細胞分泌 特異性強、靈敏度高，能大量制備 2．制備過程 3．制備單克隆抗體過程中的兩次篩選 項目 第一次篩選 第二次篩選 篩選 原因 誘導融合后得到多種雜交細胞，另外還有未融合的細胞 從小鼠體內提取的B淋巴細胞有很多種，形成的雜交瘤細胞也有很多種 篩選 方法 用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細胞和同種細胞融合后形成的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長 用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經多次篩選得到能產生特異性抗體的細胞群 篩選 目的 得到雜交瘤細胞 得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞 4.單克隆抗體制備過程的關鍵分析 (1)對動物免疫的原因：B淋巴細胞要經過免疫過程，即接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的B淋巴細胞，才能產生相應的抗體，所以，與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞實際上是漿細胞。 (2)雜交瘤細胞具備雙親的遺傳物質，不僅具有漿細胞產生特異性抗體的能力，還具有骨髓瘤細胞在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的能力，從而可以克服單純B淋巴細胞不能無限增殖的缺點，而大量生產單克隆抗體。 [題組沖關] 3．用動物細胞工程獲得單克隆抗體，下列實驗步驟錯誤的是(　　) A．將抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗體的B淋巴細胞 B．用纖維素酶處理B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞 C．用聚乙二醇作誘導劑，使能產生抗體的B淋巴細胞與能在體外大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞融合 D．篩選雜交瘤細胞，并從中選出能產生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體 解析：選B　用纖維素酶處理植物細胞，可去掉植物細胞的細胞壁，而動物細胞無細胞壁，所以用不到纖維素酶。 4．下面為制備單克隆抗體和多克隆抗體的示意圖，據(jù)圖回答下列問題： (1)圖中向小鼠注射包含多種抗原決定簇的抗原后，所獲得的免疫抗血清實際上是含有____________________________(填寫抗體的名稱)的混合物，這種方法制備的多克隆抗體不僅產量低，而且純度低。與多克隆抗體相比，單克隆抗體突出的優(yōu)點在于它的__________________，并能大量制備。 (2)圖中選用B細胞和骨髓瘤細胞融合成雜交瘤細胞，說明細胞膜具有____________；如果僅考慮細胞的兩兩融合，其融合細胞有________種類型。 (3)圖中兩次篩選的目的不同，其中篩選①的目的是篩選出________________，篩選②的目的是篩選出____________________________。篩選時所用的培養(yǎng)基是特定的____________培養(yǎng)基。 (4)科學工作者正在研究的用于治療癌癥的“生物導彈”就是____________________________，用“生物導彈”治療癌癥的方法優(yōu)于化療的原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)由圖中可看出，單克隆抗體的制備過程中，運用了動物細胞工程中的________________和________________兩大技術。 解析：(1)結合題圖可看出，向小鼠注射包含多種抗原決定簇的抗原后，獲得的免疫抗血清實際上是含有Ab1、Ab2、Ab3、Ab4多種抗體的混合物。(2)動物細胞融合的過程體現(xiàn)了細胞膜的流動性；僅考慮兩個細胞的融合，可得到B細胞＋B細胞、骨髓瘤細胞＋骨髓瘤細胞及B細胞＋骨髓瘤細胞3種類型的融合細胞。(3)在單克隆抗體的制備過程中，第1次篩選的目的是篩選出雜交瘤細胞，第2次篩選的目的是獲得能產生所需抗體的雜交瘤細胞。篩選時所用的培養(yǎng)基是特定的選擇性培養(yǎng)基。(4)把單克隆抗體與抗癌藥物相結合制成“生物導彈”，注入體內，借助單克隆抗體的導向作用，能將藥物定向帶到癌細胞所在位置，在原位殺死癌細胞。這樣既不損傷正常細胞，又減少了用藥劑量。(5)單克隆抗體的制備運用了動物細胞融合與動物細胞培養(yǎng)兩大技術。 答案：(1)Ab1、Ab2、Ab3、Ab4　特異性強、靈敏度高　(2)流動性　3　(3)雜交瘤細胞　能產生所需抗體的雜交瘤細胞　選擇性　(4)單克隆抗體上連接抗癌藥物　不損傷正常細胞，且用藥劑量少，毒副作用小　(5)動物細胞融合　動物細胞培養(yǎng) [隨堂基礎鞏固]　 1．下列不屬于細胞融合技術應用的是(　　) A．細胞遺傳與細胞免疫的研究 B．生物新品種的培育 C．單克隆抗體的制備 D．瀕危動物的克隆 解析：選D　克隆瀕危動物是體細胞核移植技術的應用，不屬于細胞融合技術的應用。 2．在單克隆抗體制備過程中，對骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細胞是(　　) ①B淋巴細胞　②骨髓瘤細胞?、跙淋巴細胞自身融合細胞　④骨髓瘤細胞自身融合細胞?、蓦s交瘤細胞 A．①②③④　　　　　　　　　B．①③⑤ C．②④ D．①③ 解析：選A　在題中所述特定的選擇培養(yǎng)基上，能夠存活、增殖的細胞只有雜交瘤細胞。 3．將小鼠骨髓瘤細胞與一種B淋巴細胞融合，可使融合的細胞經培養(yǎng)產生大量單克隆抗體，其依據(jù)是(　　) A．骨髓瘤細胞可以產生抗體，但不能無限增殖 B．B淋巴細胞只有與骨髓瘤細胞融合才能產生抗體 C．骨髓瘤細胞可以無限增殖，且能產生抗體 D．B淋巴細胞可以產生抗體，但不能無限增殖，骨髓瘤細胞可以無限增殖 解析：選D　融合的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞可以產生抗體的特點，又具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特點。 4．獲得大量單克隆抗體必須用單個的B細胞進行無性繁殖，形成細胞群。其原因是(　　) A．在體外培養(yǎng)條件下B淋巴細胞可以無限增殖 B．每一個B淋巴細胞都參與特異性免疫反應 C．單個的B淋巴細胞產生抗體的能力強 D．在動物體內B淋巴細胞可產生多達百萬種以上的抗體，而每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 解析：選D　在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的B淋巴細胞可以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。因此，要想獲得大量的單一抗體，必須用單個的B淋巴細胞進行無性繁殖，也就是通過克隆形成細胞群，這樣的細胞群就有可能產生出化學性質單一、特異性強的抗體——單克隆抗體。 5．利用單克隆抗體研制而成的“生物導彈”由兩部分組成，一是“瞄準裝置”，二是殺傷性“彈頭”。下列對此描述錯誤的是(　　) A．“瞄準裝置”是由識別腫瘤的單克隆抗體構成 B．“彈頭”是由放射性同位素、化學藥物或細胞毒素等物質構成 C．“彈頭”中的藥物有選擇殺傷腫瘤細胞的功能 D．“生物導彈”是利用細胞工程制備出來的 解析：選C　“彈頭”中的藥物既能殺傷腫瘤細胞，也能殺死正常細胞，不具有選擇性?！吧飳棥敝械摹懊闇恃b置”是由專一識別特定腫瘤細胞的單克隆抗體構成；“彈頭”是由殺死腫瘤細胞的放射性同位素、化學藥物或細胞毒素等物質構成；“生物導彈”是利用動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)等細胞工程技術制備出來的。 6．甘草酸是中藥甘草中的主要活性成分。為了快速檢測甘草酸，科研人員利用細胞工程技術制備了抗甘草酸的單克隆抗體，其基本操作過程如圖所示。相關敘述正確的是(　　) A．過程①注射相應抗原后應立即從小鼠脾臟中提取細胞甲 B．過程②誘導細胞融合，利用了細胞膜的選擇透過性 C．過程③、④的篩選方法相同，細胞丙、丁的遺傳物質相同 D．過程⑤無論在體內還是體外進行，細胞丁都可大量增殖 解析：選D　過程①注射相應抗原后應經過一段時間，使小鼠產生漿細胞，再從小鼠脾臟中提取細胞甲；過程②誘導細胞融合利用了細胞膜的流動性；過程③篩選雜交瘤細胞，過程④篩選能產生單一抗體的雜交瘤細胞，二者的方法不同；過程⑤無論在體內還是在體外進行，細胞丁都可大量增殖。 7．如圖表示單克隆抗體的制備過程，請據(jù)圖回答下列問題： (1)據(jù)圖可知，__________________技術是動物細胞工程技術的基礎，而____________技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。 (2)圖中過程①常用的誘導因素是________，過程②常在________培養(yǎng)基中完成。 (3)A細胞為________細胞，其特點是________________________________________。 (4)合成的單克隆抗體最終可以從________和________中提取。 解析：(1)動物細胞工程技術的基礎是動物細胞培養(yǎng)，細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。(2)過程①中誘導細胞融合的方法很多，常用的主要有生物法，如用滅活的病毒，化學法，如用聚乙二醇(PEG)和物理法，如電激等。過程②是單克隆抗體技術的篩選過程，是在特定的選擇性培養(yǎng)基上進行的。(3)A細胞為雜交瘤細胞，雜交瘤細胞具有既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體的特點。(4)雜交瘤細胞的培養(yǎng)一般有體外培養(yǎng)和體內培養(yǎng)兩種方式，體外培養(yǎng)是在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)后從培養(yǎng)液中提取單克隆抗體；體內培養(yǎng)是在小鼠腹腔中培養(yǎng)，培養(yǎng)后從小鼠腹水中提取單克隆抗體。 答案：(1)動物細胞培養(yǎng)　細胞融合　(2)滅活的病毒(或聚乙二醇)　選擇性　(3)雜交瘤　既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體　(4)培養(yǎng)液　小鼠腹水 [課時跟蹤檢測]　 一、選擇題 1．生產單克隆抗體時，在培養(yǎng)液中加入某種試劑能篩選出雜交瘤細胞，因為該試劑(　　) A．能抑制淋巴細胞和雜交瘤細胞的DNA復制 B．能阻止淋巴細胞的原癌基因被激活 C．選擇性抑制骨髓瘤細胞的DNA復制 D．能阻止雜交瘤細胞核糖體上所有蛋白質的合成 解析：選C　因為要篩選出雜交瘤細胞，而雜交瘤細胞與骨髓瘤細胞在適宜條件下都能進行增殖，故必須用一種試劑來抑制骨髓瘤細胞的DNA復制，才能避免骨髓瘤細胞的干擾。 2．下列是應用動物細胞工程技術獲取單克隆抗X抗體的具體操作步驟，選項中對單克隆抗體制備的相關敘述錯誤的是(　　) ①將X抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗X抗體的B淋巴細胞　②從患骨髓瘤的小鼠體內獲取骨髓瘤細胞 ③利用促細胞融合因子使兩種細胞發(fā)生融合?、軐㈦s交瘤細胞注入小鼠腹腔培養(yǎng)?、莺Y選出能產生抗X抗體的雜交瘤細胞?、迯母顾刑崛】贵w A．實驗順序應當是①②③⑤④⑥ B．④過程中產生的多個雜交瘤細胞也稱為克隆 C．③過程獲得的細胞均可無限增殖 D．③到⑤的過程中通常要經過兩次篩選 解析：選C　克隆是一種無性生殖，④過程中，雜交瘤細胞在小鼠腹腔培養(yǎng)產生的多個雜交瘤細胞是細胞的增殖，也屬于克?。虎圻^程是細胞融合過程，會得到多種融合細胞，只有雜交瘤細胞能夠無限增殖；③～⑤要經過兩次篩選才能獲得無限增殖以及能產生特定抗體的雜交瘤細胞。 3．下列有關制備單克隆抗體的敘述，錯誤的是(　　) A．采用的細胞工程技術包括細胞培養(yǎng)和細胞融合 B．兩次篩選的目的分別是篩選出雜交瘤細胞和篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞 C．要先用胃蛋白酶處理得到單個細胞，然后用誘導劑處理得到雜交瘤細胞 D．運用的生物學原理包括細胞分裂和細胞膜具有一定的流動性 解析：選C　單克隆抗體的制備采用了動物細胞融合和細胞培養(yǎng)技術；第一次篩選是篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選是篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；用胰蛋白酶處理得到單個細胞；制備過程中依據(jù)的原理有細胞分裂和細胞膜的流動性。 4．關于單克隆抗體的生產和應用，錯誤的是(　　) A．對小動物注射特定抗原以獲取所需的B淋巴細胞 B．單克隆抗體比血清抗體的制備過程簡單，操作方便 C．特定的單克隆抗體可制成試劑，用于檢測人體是否受某種抗原的感染 D．治療癌癥的“生物導彈”原理之一是利用單克隆抗體的特異性識別癌細胞 解析：選B　單克隆抗體的制備是用骨髓瘤細胞和經過免疫的B淋巴細胞融合后得到雜交瘤細胞；單克隆抗體的制備過程比普通抗體的制備過程復雜得多；單克隆抗體最廣泛的應用是作為診斷試劑；如果把抗癌細胞的單克隆抗體與放射性同位素、化學藥物或細胞毒素相結合，制成“生物導彈”注入體內，可借助單克隆抗體的導向作用，將藥物帶到癌細胞所在位置，殺死癌細胞。 5．下列有關動植物細胞工程的敘述，錯誤的是(　　) A．動物細胞融合過程中，常用的誘導因素有滅活的病毒、PEG等 B．動物細胞培養(yǎng)過程中，常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理組織塊 C．植物組織培養(yǎng)過程中，需要用纖維素酶、果膠酶去除細胞壁 D．植物體細胞雜交過程中，需要用不同濃度的細胞分裂素和生長素培養(yǎng)雜種細胞 解析：選C　植物組織培養(yǎng)時不需要去掉細胞壁，植物體細胞雜交才需要先去掉細胞壁。 6．將抗癌藥物與能特異性識別癌細胞的單克隆抗體相結合制成的“生物導彈”，能夠用于殺死人類的某些癌細胞，其過程如下圖所示。下列相關敘述錯誤的是(　　) A．①過程的原理和植物原生質體融合原理基本相同 B．經①形成的雜交瘤細胞都能無限增殖并產生單一抗體 C．②過程需要篩選并克隆單個雜交瘤細胞 D．抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性 解析：選B　①過程細胞融合與植物原生質體融合原理均是細胞膜具有一定的流動性；經①過程形成的雜交瘤細胞需要篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞，篩選的雜交瘤細胞既能無限增殖又能產生抗體；②過程需要篩選產生特定抗體的雜交瘤細胞，并對該細胞進行單克隆培養(yǎng)；單克隆抗體具有特異性強、靈敏度高、產量高、純度高的特點，根據(jù)其特異性識別癌細胞的特點，將藥物定向運到癌細胞，抑制癌細胞增殖。 7．下列方案中不能制備出抗H1N1流感病毒單克隆抗體的是(　　) A．將H1N1流感病毒抗原的基因導入骨髓瘤細胞，并使該基因表達 B．將抗H1N1流感病毒抗體的基因導入骨髓瘤細胞，并使該基因表達 C．將產生抗H1N1流感病毒抗體的效應B細胞和骨髓瘤細胞融合，篩選出雜交瘤細胞并進行體外大規(guī)模培養(yǎng) D．將骨髓瘤細胞中的癌基因導入能產生抗H1N1流感病毒抗體的效應B細胞中，并使癌基因表達 解析：選A　H1N1流感病毒的遺傳物質是RNA，該病毒抗原的基因無法導入骨髓瘤細胞中，因為RNA片段不能和DNA連接。 8．下圖表示植物體細胞雜交或動物細胞融合的簡略過程。有關敘述錯誤的是(　　) A．在將A和B兩種植物細胞進行體細胞雜交前，必須先利用酶解法去除細胞的有關結構 B．若該過程是制備人抗某病毒的單克隆抗體的過程， 則在培養(yǎng)D細胞的培養(yǎng)液中通常要加入一定量的抗生素、血清等物質 C．與傳統(tǒng)的有性雜交相比，細胞融合技術的優(yōu)越性在于能定向地改造生物的性狀 D．滅活的病毒能誘導動物細胞融合，而不能誘導植物原生質體的融合 解析：選C　兩種植物細胞進行體細胞雜交前，必須先利用酶解法去除細胞壁，以制備原生質體；在制備人抗某病毒的單克隆抗體的過程中，需在培養(yǎng)液中加入一定量的抗生素、血清等物質；與傳統(tǒng)的有性雜交相比，細胞融合技術的優(yōu)越性在于可以克服遠緣雜交不親和的障礙，但不能定向地改造生物的性狀；用滅活的病毒作誘導因素是動物細胞融合特有的人工誘導方法。 9．如圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質和甲細胞的名稱分別為(　　) A．抗體、T淋巴細胞 B．抗原、T淋巴細胞 C．抗體、B淋巴細胞 D．抗原、B淋巴細胞 解析：選D?、龠^程注射的是抗原，使小鼠產生免疫反應。甲細胞是B淋巴細胞。 10．如圖是制備抗體的兩個途徑的模式圖，下列敘述正確的是(　　) A．圖中獲得的抗體1和抗體2結構完全相同 B．抗體1和抗體2的制備過程均涉及細胞篩選 C．②過程所需的氣體O2的作用是維持培養(yǎng)液的pH D．①和④過程的原理分別是細胞增殖和堿基互補配對原則 解析：選B　大腸桿菌沒有膜結構細胞器，不能對合成的抗體進行進一步加工，圖中獲得的抗體1和抗體2結構不完全相同；抗體1和抗體2的制備過程均涉及細胞篩選；②動物細胞培養(yǎng)所需的氣體CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH；①過程的原理是細胞膜的流動性，④過程的原理是堿基互補配對原則。 二、非選擇題 11．利用B淋巴細胞雜交瘤技術制備出單克隆抗體的流程如下圖所示。請據(jù)圖回答問題： (1)通過過程①得到的B淋巴細胞在從小鼠體內分離出之前，需對小鼠____________________。 (2)過程②誘導融合運用的原理是________________，該過程中區(qū)別于原生質體融合的方法是用________處理。 (3)過程③至少需要通過兩次篩選和克隆培養(yǎng)，其中第一次篩選的目的是獲得______________。圖中X細胞具有________________________________的特點。單克隆抗體的特點是________________________________________________。 (4)經過篩選和克隆化培養(yǎng)得到雜交瘤細胞后，一般采用體內培養(yǎng)和體外培養(yǎng)兩種方式進行培養(yǎng)，動物細胞的體外培養(yǎng)對環(huán)境條件的要求比較高，如培養(yǎng)液需適宜的溫度、________________________等。(答出兩項即可) (5)由上述過程生產出的單克隆抗體不能直接用于人體，理由是________________________________________________________________________。 解析：誘導融合運用了細胞膜的流動性原理，該過程中區(qū)別于原生質體融合的方法是用滅活病毒處理。雜交瘤細胞具有骨髓瘤細胞和漿細胞的特點，即既能無限增殖，又能產生特異性抗體。單克隆抗體具有特異性強、靈敏度高、并可能大量制備的特點。因為小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，人體會發(fā)生排異反應，故由該過程生產出的單克隆抗體不能直接用于人體。 答案：(1)注射特異性抗原　(2)細胞膜具有流動性　滅活病毒　(3)雜交瘤細胞　既能產生特異性抗體，又能無限增殖　特異性強、靈敏度高、并可能大量制備 (4)pH、動物血漿、氣體環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境(答出兩項即可)　(5)小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應 12．(全國卷Ⅰ)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應的血清最大稀釋倍數(shù))，結果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導細胞融合，經篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細胞?；卮鹣铝袉栴}： (1)制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16 000以上，則小鼠最少需要經過________次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是________小鼠，理由是________________________________________________________________________。 (2)細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有________________________________________________________，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是__________________________________________________________。 (3)雜交瘤細胞中有________個細胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細胞經多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是________________________________________________________________________。 解析：(1)由圖可知，小鼠至少經過4次免疫后，免疫小鼠的血清抗體效價可達到16 000以上，其中Y小鼠的血清抗體效價最高。(2)由于細胞融合是隨機的，且并不是所有細胞都能參與融合，融合體系中含有五種細胞：未融合的B淋巴細胞、未融合的骨髓瘤細胞、雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞、B淋巴細胞相互融合形成的細胞。(3)兩個細胞的細胞核融合成一個細胞核標志著融合的完成，雜交瘤細胞中有一個細胞核；細胞融合過程中染色體會發(fā)生丟失，所以染色體數(shù)量最多為兩者之和，即100條。(4)未融合的B淋巴細胞不能無限增殖，經多次傳代培養(yǎng)后都不能存活。 答案：(1)4　Y　Y小鼠的血清抗體效價最高　(2)B淋巴細胞相互融合形成的細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞　細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%　(3)1　100　(4)經免疫的B淋巴細胞是高度分化的細胞不能無限增殖 13.埃博拉出血熱是一種由埃博拉病毒引起的急性傳染病，建立良好特異性的檢測方法非常重要。埃博拉病毒核蛋白NP具有很強的抗原性，是診斷研究的重要靶點。 (1)鼠源抗NP蛋白的單克隆抗體，由鼠雜交瘤細胞分泌，抗體結構如圖1所示，抗體通過可變區(qū)與抗原特異性結合。從鼠雜交瘤細胞中提取________，逆轉錄合成cDNA，利用________技術擴增鼠源抗體可變區(qū)對應的DNA片段。使用____________________將________源抗體可變區(qū)對應的DNA片段與能表達____________源抗體恒定區(qū)部分的載體重組，導入人胚腎上皮細胞，從細胞培養(yǎng)液中獲取人－鼠嵌合抗體。臨床使用人－鼠嵌合抗體的優(yōu)點是________________________。 (2)提取埃博拉病毒的蛋白質進行電泳，并運用抗原－抗體雜交，檢測人－鼠嵌合抗體的特異性。實驗主要步驟如圖2所示，其中一抗能與相應抗原特異性結合，二抗能與相應一抗特異性結合。 組別 一抗來源 二抗來源 結果 ① 人－鼠嵌合抗體 AP標記的抗人抗體 Ⅰ ② 鼠雜交瘤細胞 上清液 AP標記的抗鼠抗體 Ⅱ ③ 普通人胚腎上皮 細胞培養(yǎng)液 AP標記的抗人抗體 Ⅲ 實驗記錄如上表，AP標記的抗人抗體能與嵌合抗體中的人源恒定區(qū)結合，AP標記的抗鼠抗體能與鼠源抗體結合。若表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次對應圖2結果分析中的________、________、________(一種方案即可)，則表明該人－鼠嵌合抗體能用于埃博拉出血熱的應急血清學檢測。 解析：(1)基因工程操作中，從鼠雜交瘤細胞中提取相應的RNA，通過逆轉錄可產生cDNA。利用PCR技術擴增鼠源抗體可變區(qū)對應的DNA片段。使用限制酶和DNA連接酶可將鼠源抗體可變區(qū)對應的DNA片段與能表達人源抗體恒定區(qū)部分的載體重組，導入人胚腎上皮細胞，從細胞培養(yǎng)液中獲取人－鼠嵌合抗體。臨床使用人－鼠嵌合抗體的優(yōu)點是降低免疫排斥反應。(2)由實驗表格記錄可知，AP標記的抗人抗體能與嵌合抗體中的人源恒定區(qū)結合，AP標記的抗鼠抗體能與鼠源抗體結合。若表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次對應結果分析中的A、B、C，則表明該人－鼠嵌合抗體能用于埃博拉出血熱的應急血清學檢測。 答案：(1)RNA　PCR　限制酶和DNA連接酶(答不全不得分)　鼠　人　降低免疫排斥反應　(2)方案一：A　B　C(或方案二：B　A　C) (時間：45分鐘　滿分：50分)　　　　　　　　　　　 一、選擇題(每小題2分，共24分) 1．植物體細胞雜交與動物細胞工程中所用的技術或方法與原理不相符的是(　　) A．植物組織培養(yǎng)和單克隆抗體——細胞的全能性 B．纖維素酶、果膠酶處理植物細胞壁——酶的專一性 C．原生質體融合和動物細胞融合——細胞膜的流動性 D．紫草細胞培養(yǎng)和雜交瘤細胞的培養(yǎng)——細胞增殖 解析：選A　植物組織培養(yǎng)的原理是植物細胞的全能性，單克隆抗體制備的原理是細胞膜具有一定的流動性和細胞增殖；植物細胞壁的成分包括纖維素和果膠，根據(jù)酶的專一性可利用相關酶分解細胞壁；原生質體融合和動物細胞融合的原理是細胞膜具有一定的流動性；紫草細胞培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的原理都是細胞的增殖。 2．關于現(xiàn)代生物技術應用的敘述，錯誤的是(　　) A．蛋白質工程可合成自然界中不存在的蛋白質 B．體細胞雜交技術可用于克隆動物和制備單克隆抗體 C．植物組織培養(yǎng)技術可用于植物莖尖脫毒 D．動物細胞培養(yǎng)技術可用于轉基因動物的培育 解析：選B　克隆動物用到的生物技術有細胞核移植和胚胎移植等，無體細胞雜交技術。 3．下列有關植物體細胞雜交的敘述，錯誤的是(　　) A．用酶解法去掉細胞壁，分離出有活力的原生質體 B．再生出細胞壁是原生質體融合成功的標志 C．植物體細胞雜交的最終目的是獲得細胞代謝產物 D．植物體細胞雜交技術可以克服不同物種間遠緣雜交不親和的障礙 解析：選C　去除植物細胞壁可以用纖維素酶和果膠酶；原生質體融合后形成新的細胞壁標志著雜種細胞的形成；植物體細胞雜交的目的是獲得雜種植株；植物體細胞雜交不是有性生殖過程，因此可以克服遠緣雜交不親和的障礙。 4．下列關于動物細胞培養(yǎng)的敘述，錯誤的是(　　) A．用于培養(yǎng)的細胞多取自動物胚胎或幼齡動物 B．培養(yǎng)過程中需要使用胰蛋白酶等獲得細胞懸液 C．動物細胞培養(yǎng)時要保證氧氣供應，不能通入二氧化碳 D．動物細胞培養(yǎng)時的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，并要加入血清 解析：選C　動物細胞培養(yǎng)需要一定的氣體環(huán)境，所需要的氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣是細胞代謝所必需的，二氧化碳的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。 5．下列有關單克隆抗體制備及其應用的敘述，錯誤的是(　　) A．制備單克隆抗體運用的技術有動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng) B．需要用選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞 C．需要從雜交瘤細胞中篩選出能產生特定抗體的細胞 D．利用“生物導彈”治療癌癥就是利用了單克隆抗體清除癌細胞 解析：選D　“生物導彈”由單克隆抗體與藥物、毒素或放射性同位素組合而成，因帶有單克隆抗體而能自動導向，在生物體內與特定目標細胞或組織結合，由其攜帶的藥物產生治療作用。 6．在細胞工程中，選擇合適的生物材料是成功的關鍵。下列選擇不合理的是(　　) A．選擇高度分化的動物體細胞進行培養(yǎng)有利于獲得大量細胞 B．選擇胚胎細胞作為核供體進行核移植可提高克隆動物的成功率 C．選擇一定大小的植物莖尖進行組織培養(yǎng)可獲得脫毒苗 D．選擇植物的愈傷組織進行誘變處理可能獲得優(yōu)質的突變體 解析：選A　高度分化的動物體細胞分裂能力較弱，對其進行培養(yǎng)不利于獲得大量細胞。 7．(北京高考)在應用農桿菌侵染植物葉片獲得轉基因植株的常規(guī)實驗步驟中，不需要的是(　　) A．用攜帶目的基因的農桿菌侵染植物細胞 B．用選擇培養(yǎng)基篩選導入目的基因的細胞 C．用聚乙二醇誘導轉基因細胞的原生質體融合 D．用適當比例的生長素和細胞分裂素誘導愈傷組織生芽 解析：選C　將目的基因導入植物細胞常采用農桿菌轉化法。需用選擇培養(yǎng)基篩選含目的基因的細胞。用聚乙二醇誘導原生質體融合是細胞融合技術的必要手段，但不是基因工程的常規(guī)步驟。獲得導入了目的基因的受體細胞后，需要經植物組織培養(yǎng)才能發(fā)育成植株，植物組織培養(yǎng)過程中需要用適當比例的生長素和細胞分裂素誘導愈傷組織分化生成根和芽，屬于必需步驟。 8．(江蘇高考)下列有關細胞工程的敘述，正確的是(　　) A．PEG是促細胞融合劑，可直接誘導植物細胞融合 B．用原生質體制備人工種子，要防止細胞破裂 C．骨髓瘤細胞經免疫處理，可直接獲得單克隆抗體 D．核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體 解析：選D　PEG是促細胞融合劑，但植物細胞不能直接融合，需先去壁形成原生質體才能融合；制備人工種子應用完整的植物細胞，不能用原生質體；骨髓瘤細胞不能產生抗體；核移植克隆的動物，線粒體DNA來自供卵母體。 9．下圖為將胡蘿卜的離體組織在一定條件下培育形成試管苗的過程示意圖。有關敘述正確的是(　　) A．利用此過程獲得的試管苗可能為雜合子 B．①②過程所需的培養(yǎng)基成分相同 C．多倍體植株的培育需經過如圖所示過程 D．此過程依據(jù)的生物學原理是細胞膜具有流動性 解析：選A　植物的組織培養(yǎng)過程是無性繁殖的過程，如果離體的組織來自純合子，將來得到的試管苗是純合子，如果離體的組織來自雜合子，將來得到的試管苗是雜合子；①為脫分化，②為再分化，所需培養(yǎng)基成分不同；用秋水仙素處理萌發(fā)的種子和幼苗就可獲得多倍體植株，不需組織培養(yǎng)過程；植物組織培養(yǎng)技術的理論基礎是細胞的全能性而不是細胞膜的流動性。 10．利用植物體細胞雜交技術將白菜和甘藍(均為二倍體)培育成“白菜—甘藍”雜種植株(如下圖所示)。下列說法正確的是(　　) A．圖示“白菜—甘藍”植株不能結子 B．植物體細胞雜交技術的目的是獲得雜種細胞 C．上述過程中包含著有絲分裂、細胞分化和減數(shù)分裂等過程 D．“白菜—甘藍”雜種植株所具有的性狀是基因選擇性表達的結果 解析：選D　“白菜—甘藍”屬于異源四倍體，有同源染色體，是可育的，能結子；植物體細胞雜交技術的目的是獲得雜種植株；上述過程包括去壁、原生質體融合、植物組織培養(yǎng)等過程，其結果是形成“白菜—甘藍”幼苗，并未發(fā)育到性成熟個體，因此整個過程中沒有減數(shù)分裂過程；任何性狀都是基因選擇性表達的結果。 11．下圖所示為培育農作物新品種的一種方式。相關說法正確的是(　　) A．②③過程分別稱為細胞分裂和細胞分化 B．該育種與傳統(tǒng)雜交育種相比，最大的優(yōu)點是繁殖速度快 C．該育種過程說明已分化細胞中不表達的基因仍具有表達的潛能 D．該育種方式只涉及細胞工程 解析：選C?、冖圻^程分別是脫分化和再分化；該育種方式最大優(yōu)點是能定向改變生物的遺傳特性；該育種方式涉及的生物技術有基因工程和植物細胞工程。 12．對于下面制備單克隆抗體的過程示意圖，敘述錯誤的是(　　) A．①表示B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均是從小鼠的脾臟中提取的 B．④中的篩選是通過抗原—抗體反應進行的 C．②促進細胞融合時可用聚乙二醇來誘導 D．⑤是可以無限增殖的雜交瘤細胞產生的細胞群 解析：選A　單克隆抗體是B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞產生的，細胞融合時，使用的化學方法是用聚乙二醇誘導；④中的篩選是通過抗原—抗體反應進行的，如果有反應說明表達了抗體；融合細胞具有雙親的特點，既能無限增殖又能產生單一抗體；B淋巴細胞也可以從血液中提取，骨髓瘤細胞不是從脾臟中提取的。 二、非選擇題(除注明外，每空1分，共26分) 13．(9分)細胞融合技術有著廣泛的應用，其中植物體細胞雜交要進行原生質體的融合，單克隆抗體的制備需進行動物細胞融合。下圖表示細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答問題： (1)若a、b分別表示白菜和甘藍兩種植物細胞的原生質體，則采用化學法形成c時，一般是用____________作為誘導劑。由d形成雜交植株的過程所依據(jù)的原理是________________________。 (2)對于a、b所在的動物組織，通常用____________________處理獲得分散的單個細胞a、b。目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常在10代以內，以保持細胞正常的________________。動物細胞融合的原理是____________________。 (3)若a、b分別為骨髓瘤細胞和B淋巴細胞，假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成________種類型的細胞d，因此需用特定的____________培養(yǎng)基篩選出____________細胞用于培養(yǎng)。 解析：(1)誘導原生質體融合時可采用化學法和物理法，采用化學法誘導時，一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導劑。由d形成雜交植株的過程所依據(jù)的原理是植物細胞的全能性。(2)動物細胞培養(yǎng)時，需用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理組織獲得分散的單個細胞。10代以內的細胞能保持正常的二倍體核型，因此目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常在10代以內，動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性。(3)若a、b分別為骨髓瘤細胞和B淋巴細胞，假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成三種類型的細胞d，即骨髓瘤細胞自身融合的細胞、B淋巴細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合形成的雜交瘤細胞。因此需用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞用于培養(yǎng)。 答案：(1)聚乙二醇(或PEG)　植物細胞的全能性 (2)胰蛋白酶或膠原蛋白酶　二倍體核型　細胞膜的流動性(2分)　(3)三　選擇　雜交瘤 14．(10分)早早孕試紙是人們設計出來的一種方便女性檢測自己是否懷孕的產品。人絨毛膜促性腺激素(HCG)是由受孕婦女體內胎盤產生的一種糖蛋白類激素，在孕婦的尿液中大量存在，而非妊娠孕婦尿液中幾乎不含有該激素。膠體金法早早孕檢測試紙采用雙抗體夾心法原理，以膠體金為指示標記制作而成。其測定和判斷方法如圖： 注：MAX線處含有鼠源性HCG單克隆抗體和膠體金，T線處含羊抗HCG的抗體，C線處含有羊抗鼠多克隆抗體。 (1)HCG在胎盤細胞的____________上合成，然后在____________上進一步合成加工，最后經____________進一步的修飾加工然后分泌到細胞外。 (2)MAX線處包埋的是鼠源性HCG單克隆抗體，它是由____________細胞產生的，由于單克隆抗體具有____________、____________的特點，所以能準確地識別各種抗原物質的細微差異，并與一定抗原發(fā)生特異性結合。 (3)制備鼠源性HCG單克隆抗體的過程中，可能運用到____________________和動物細胞培養(yǎng)等技術，其中后者需要置于95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，CO2的作用是__________________________________________。 (4)在細胞內DNA的合成一般有兩條途徑，主要途徑是在細胞內由糖和氨基酸合成核苷酸，進而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻斷此途徑。另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下，經酶的催化作用合成DNA，而骨髓瘤細胞的DNA合成沒有此輔助途徑。 ①利用DNA合成途徑不同的特點配制的HAT培養(yǎng)基含有多種成分，其中添加的____________具有篩選雜交瘤細胞的作用。 ②最終篩選獲得的雜交瘤細胞的特點是________________________________________。 解析：(1)根據(jù)題意可知，人絨毛膜促性腺激素(HCG)的化學本質是一種糖蛋白，所以HCG在核糖體上合成，還需要經過內質網的初步加工和高爾基體的進一步加工和修飾才能分泌到細胞外。(2)單克隆抗體是由雜交瘤細胞產生的，具有純度高、特異性強(靈敏度高)等特點。(3)制備鼠源性HCG單克隆抗體的過程中，可能運用到了動物細胞融合技術和動物細胞培養(yǎng)技術，其中動物細胞培養(yǎng)需要置于95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH。(4)骨髓瘤細胞的DNA合成只有一條途徑，在培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤，阻斷了骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞融合體的增殖。雜交瘤細胞有兩條合成DNA的途徑，因此在選擇培養(yǎng)基上雜交瘤細胞能生存并無限增殖。B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜交瘤細胞既能無限增殖，又能產生單一抗體。 答案：(1)核糖體　內質網　高爾基體　(2)雜交瘤　純度高　特異性強(靈敏度高)　(3)動物細胞融合技術　維持培養(yǎng)液的pH　(4)①氨基嘌呤?、谀軣o限增殖并分泌特異性抗體 15．(7分)如圖是利用現(xiàn)代生物技術改良草莓品系的過程，請據(jù)圖回答下列問題： (1)將野生綠色草莓的葉片離體組織培養(yǎng)成四倍體試管苗的過程，體現(xiàn)了植物細胞的________性，此過程中秋水仙素的作用機理是_______________________________。 (2)①過程中欲獲得抗蟲草莓，可從蛋白酶抑制劑基因、生長素誘導基因中選擇____________________作為目的基因，通常用____________________________法導入受體細胞，基因表達載體除包括目的基因外，還必須有____________及標記基因等。 (3)②過程可以先用花藥離體培養(yǎng)分別獲得抗蟲草莓和鳳梨草莓的單倍體，再利用___________________________________________________________技術獲得同時具鳳梨風味和抗蟲特性的六倍體草莓，該技術常用的酶有_______________。 解析：(1)植物組織培養(yǎng)的原理是植物細胞的全能性；秋水仙素能誘導染色體數(shù)目加倍，其作用機理是抑制紡錘體形成，從而引起細胞內染色體數(shù)目加倍。(2)蛋白酶抑制劑基因表達的蛋白酶抑制劑能阻斷或降低蛋白酶的活性，使昆蟲不能正常消化食物中的蛋白質，還會引起害蟲的厭食反應；而生長素誘導基因表達的產物對害蟲無作用，所以要獲得抗蟲草莓可選擇蛋白酶抑制劑基因作為目的基因，通常用農桿菌轉化法導入受體細胞?；虮磉_載體除包括目的基因外，還必須有啟動子、終止子及標記基因等。(3)②過程常采用雜交育種，還可先用花藥離體培養(yǎng)獲得2N和4N的草莓，再用植物體細胞雜交技術獲得同時具鳳梨風味和抗蟲特性的草莓，但在誘導細胞融合之前，需用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，獲得原生質體。 答案：(1)全能　抑制紡錘體形成，從而引起細胞內染色體數(shù)目加倍　(2)蛋白酶抑制劑基因　農桿菌轉化　啟動子、終止子　(3)植物體細胞雜交　纖維素酶和果膠酶