分支桿菌

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第十五章分支桿菌及相似屬 分支桿菌屬為G 抗酸菌的代表 廣泛存在于自然界 許多是人和多種動物的病原菌 對動物有致病性的主要是 結核分枝桿菌牛分支桿菌禽分支桿菌副結核分支桿菌 代表種為結核分支桿菌 結核分枝桿菌 M tuberculosis 是結核病的病原菌 俗名結核桿菌 1882年由德國細菌學家科赫 Koch 發(fā)現(xiàn) 傳染源 痰中帶菌的病人傳播途徑呼吸道為主消化道泌尿生殖系統(tǒng)皮膚淋巴 血行播散易感人群 牛分支桿菌與人的結核分支桿菌以及禽分支桿菌的許多特性相近 本節(jié)一并介紹 下面主要介紹一下牛分支桿菌 細長 直或微彎曲 桿菌 大小約1 4 0 4um 單在 少數(shù)成叢 在該屬中 牛結核較短粗 其余則細長 禽分支桿菌呈多形性 在陳舊培養(yǎng)物及干酪性病灶中菌體呈分枝狀 一 形態(tài)及染色特性 結核桿菌一般常用萎 鈉氏 Ziehl Neelsen 抗酸性染色法染色 結核桿菌染成紅色 其他非抗酸性細菌及細胞漿質等呈藍色 結核桿菌的抗酸性取決于胞壁內所含分枝菌酸殘基和胞壁固有層的完整性有關 抗酸染色方法 首先在已經(jīng)固定好的抹片上滴加較多的石碳酸復紅染色液 加溫染色 維持產(chǎn)生蒸汽 3 5min 水洗 然后用3 鹽酸酒精脫色 至標本無顏色脫出為止 充分水洗 再用堿性美蘭染色1min 水洗 干燥鏡檢 一 形態(tài)及染色特性 細胞壁組成 G 但其細胞壁除含G 細胞壁的肽聚糖成分外 還含特殊的糖酯 使革蘭氏染色不易著色 而抗酸染色為紅色 糖酯具有刺激哺乳動物免疫系統(tǒng)的作用 因此結核分支桿菌可做免疫增強劑或免疫佐劑 專性需氧 6 4 7 0 37 37 5 最適 對營養(yǎng)要求高 培養(yǎng)基常用的有 羅杰二氏 改良羅杰二氏 丙酮酸 小川培養(yǎng)基 內含蛋黃 甘油 馬鈴薯 無機鹽 孔雀綠等 結核桿菌在上述培養(yǎng)基中14 15h分裂一次 5 甘油或5 10 CO2可促進 除牛結核外 的結核桿菌生長 二 培養(yǎng)特性 在適宜的培養(yǎng)基生長緩慢 10 30天才形成菌落 菌落粗糙隆起 不透明 邊緣不整齊 呈顆粒 結節(jié)或菜花狀 乳白或米黃色 類似于在組織中形成的病變形態(tài) 二 培養(yǎng)特性 結核桿菌在羅杰二氏培養(yǎng)基上的菌落特征 4星期 牛胸膜結核呈現(xiàn)的珍珠狀結節(jié) 二 培養(yǎng)特性 在液體培養(yǎng)基中由于其壁有糖酯 具疏水性 形成浮于液面的皺褶菌膜 結核桿菌對某些理化因子的抵抗力較強 在干痰中存活6 8個月 若粘附于塵埃上 保持傳染性8 10天 在3 HCl或NaOH溶液中能耐受30分鐘 因而常以酸堿中和處理嚴重污染的檢材 殺死雜菌和消化粘稠物質 提高檢出率 但對濕熱 紫外線 酒精的抵抗力弱 在液體中加熱62 63 15分鐘 直射日光下2 3小時 75 酒精內數(shù)分鐘即死亡 三 抵抗力 致病性 可引起多種動物的結核病 本菌為細胞內寄生菌 病變?yōu)榫衷钚圆∽?當細菌由呼吸道吸入時 進入肺泡時 被肺內的巨噬細胞 塵細胞 吞噬 但不能被其消化降解 而是在其內增殖形成病灶 產(chǎn)生干酪樣壞死 壞死灶被各種吞噬細胞 T B細胞包圍著病灶形成結核結節(jié) 免疫低下者這種局部病灶可以破潰 菌體通過氣管隨痰排出體外或病灶液化 擴散進入血流及其他器官 使機體死亡 免疫正常者局限性病灶在活化巨噬細胞作用下 使細胞內的細菌停止生長 病灶鈣化而痊愈 四 致病機理及致病性 五 變異性 L型變異 即細胞壁消失 呈多形性 L型對異煙肼耐藥 異煙肼俗稱雷米封 為治療結核的首選藥物 R S變異 導致毒力減弱 強毒 弱毒的毒力減弱變異 制成卡介苗 卡介苗是經(jīng)230次傳代后而得的弱毒株 1 免疫性 1977年發(fā)現(xiàn)結核病的細胞免疫和體液免疫存在分離現(xiàn)象 在病情加重時細胞免疫功能減弱 而體液免疫增強 但恢復期的動物 已經(jīng)康復或病情得到控制的動物 其細胞免疫功能增強 而體液免疫水平較低 重癥動物的細胞免疫反應低下 甚至消失 而抗體顯著增加 六 免疫性與變態(tài)反應 2 變態(tài)反應 結核桿菌在刺激機體產(chǎn)生免疫應答的同時 也刺激機體產(chǎn)生變態(tài)反應 二者均有T細胞介導產(chǎn)生 結核桿菌的結核菌素和細胞壁成分 可激活體內產(chǎn)生巨噬細胞移動抑制因子的T細胞 導致變態(tài)反應性炎癥的發(fā)生 而結核桿菌的核蛋白體RNA可激活產(chǎn)生結核桿菌生長抑制因子的T細胞 使機體產(chǎn)生免疫反應 完整的結核桿菌可刺激MIF 巨噬細胞移動抑制因子 MycoIF 細菌生長抑制因子 的T細胞同時產(chǎn)生 因此檢測機體對結核桿菌是否發(fā)生變態(tài)反應 即可判定是否有免疫力 結核菌素試驗正是根據(jù)這一原理設計的最常用的免疫學檢測手段 六 免疫性與變態(tài)反應 結核菌素是結核桿菌的蛋白質組分之一 用其進行皮內注射或滴入眼結膜囊 可判定機體對結核桿菌是否引致變態(tài)反應 常用的有兩種 1 一種是OT 舊結核菌素 2 另一種是PPD OT經(jīng)三氯醋酸沉淀后的純化物 六 免疫性與變態(tài)反應 1 病料采集 取患病器官的組織結節(jié)及病變與非病變交界處組織 2 涂片鏡檢病料涂片 抗酸染色后鏡檢 若發(fā)現(xiàn)紅色成叢桿菌 可做初步診斷 七 微生物學診斷 3 分離培養(yǎng)常用羅杰二氏培養(yǎng)基 病料用6 H2SO4或4 NaOH液處理15min 經(jīng)中和離心 取少許沉淀物接種于培養(yǎng)基斜面 管口封嚴 37 培養(yǎng)8周 培養(yǎng)陽性者 進行生化試驗及培養(yǎng)特性鑒定 4 動物接種選用雞 兔 豚鼠接種 3 4周出現(xiàn)病變 皮下或腹腔注射 六 微生物學診斷 5 變態(tài)反應采用PPD皮內注射法 牛頸部皮內注射結核菌素PPD0 1ml 10萬IU ml 72h后觀察 局部炎癥反應明顯 皮腫脹厚度差 4mm為陽性 局部炎癥不反應明顯 皮腫脹厚度差在2 4mm之間 為可疑 局部無炎癥反應 皮腫脹厚度差在2mm以下 為陰性 凡判為疑似反應牛 30d后需復檢一次 如仍為可疑 經(jīng)30 45d后再次復檢 若仍為可疑 判為陽性 6 血清學試驗 六 微生物學診斷 人類廣泛采用卡介苗免疫接種 牛則只檢疫 淘汰陽性牛 原因 接種疫苗的牛 一年后仍維持變態(tài)反應陽性 在用結核菌素檢疫時 無法與自然感染牛區(qū)分 因此不宜推廣 七 免疫治療 本章小結 分枝桿菌屬是革蘭氏陽性菌中抗酸菌的代表 其細胞壁的特殊組成影響染色的特性 并作為經(jīng)典的免疫佐劑廣泛使用 牛分枝桿菌等培養(yǎng)困難 生長慢 感染人和動物 致結核病等 其細胞免疫和體液免疫存在分離現(xiàn)象 機體在感染本病時 體內免疫反應和變態(tài)反應同時存在 遲發(fā)性變態(tài)反應被用于本病的檢測 本章參考復習題 1 試述分枝桿菌的染色特性與細胞壁的結構的關系 2 結核桿菌的免疫有何特點 3 如何檢測牛是否感染分支桿菌 螺旋體是一類菌體細長 柔軟 彎曲呈螺旋狀 能活潑運動的原核單細胞微生物 介于細菌和原蟲之間 第十六章螺旋體 螺旋體呈螺旋狀或波浪狀圓柱形 具有 個以上完整的螺旋 大小懸殊 長5 250 m 寬0 1 3 m 可以通過細菌濾器 各種螺旋體的螺旋數(shù)目不同 螺間距不同 回旋角度也不同 具有種的特征 在分類上可作為一重要指標 一 形態(tài)結構 一 形態(tài)結構 有螺旋體的結構與細菌相似 只是在螺旋體的原生質柱外有2 100根軸絲纏繞 原生質柱具有細胞膜和膜外由細胞壁和粘液層構成的外鞘 軸絲加在細胞膜與外鞘之間 螺旋體可以運動 但無鞭毛 軸絲的收縮和舒張使其運動 二 運動方式 螺旋體的運動有3種方式 沿長軸旋轉 快速前進 細胞屈曲伸縮前進 類似蚯蚓 螺旋狀或蛇狀前進 目前螺旋體分為6個屬 與畜禽致病性有關的 疏 密 蛇形 細螺旋體屬 三 分類 本屬成員細胞呈螺旋狀 每個菌體有3 10個不規(guī)則的疏松螺旋 每端有15 20根軸絲纏繞原生質柱 并在細胞中部重疊 以螺旋狀方式運動 高度適應蜱 虱傳播 對人和動物致病的主要為伯氏疏螺旋體 回歸熱螺旋體等 第一節(jié)疏螺旋體屬 為萊姆病的病原 硬蜱為其傳播媒介 主要感染人和犬 馬 牛亦可感染 引起關節(jié)炎等多種疾病 病人被叮咬后出現(xiàn)圓環(huán)狀疹塊 伯氏螺旋體 ThepresentationoferythemamigransinStage1 萊姆病 菌體細長 有4 20個大而疏松的螺旋 一 形態(tài)特征 二 微生物學檢查 1 病原學檢查用暗視野顯微鏡或吉姆薩染色后觀察 2 血清學檢查ELISA最為常用 本章小結 螺旋體的基本結構與細菌相似 具有軸絲而能活潑運動 用暗視野顯微鏡或相差顯微鏡可觀察其形態(tài) 多數(shù)需要厭氧培養(yǎng) 具有致病性的有疏螺旋體 短螺旋體 密螺旋體及鉤端螺旋體屬 引致萊姆病的伯氏螺旋體 其傳播媒介為硬蜱 嚙齒動物為貯藏宿主 它的外膜脂蛋白在致病 檢測及免疫方面均值得重視 本章復習參考題 1 螺旋體有哪些主要生物學特性 目前分類狀況如何 2 疏螺旋體有哪些特性 伯氏螺旋體引致何病 如何診斷 又稱為霉形體 是一類無細胞壁的細菌 細胞柔軟呈多形性 能通過細菌濾器 能在人工培養(yǎng)基中生長繁殖 含有DNA和RNA 二分裂或芽生繁殖 為柔膜體綱 有8個屬 獸醫(yī)學的主要對象為霉形體屬及脲原體屬的成員 第十七章支原體 霉形體因無細胞壁 因此具多形性 可濾過性 濾過性 常呈球狀 環(huán)狀 桿狀 偶見分枝絲狀 G 但不易著色 通常著色不良 姬姆薩或瑞氏染色良好 呈淡紫色 一 形態(tài)結構 二 培養(yǎng)特性 霉形體的核質是一個環(huán)形雙股DNA 但分子量較小 生物合成能力較弱 營養(yǎng)要求高 培養(yǎng)時除基礎營養(yǎng)外 還需要牛心浸出液 酵母膏 輔酶 膽固醇 氨基酸 動物血清等 為抑制細菌生長 常加入青霉素 醋酸鉈 疊氮鈉等藥物 培養(yǎng)時要供給5 CO2 霉形體生長較慢 一般培養(yǎng)2 6天后出現(xiàn)微小菌落 菌落呈 煎荷包蛋 狀 中心深入培養(yǎng)基中 致密色暗 周圍長在培養(yǎng)基表面 較透明 此為霉形體的典型菌落 豬肺炎霉形體和肺霉形體等的菌落不典型 無中心生長點 圓形透明 露滴樣 直徑10 600 m 需要使用放大鏡或低倍顯微鏡才可見 二 培養(yǎng)特性 人型支原體在固體培養(yǎng)基上的典型油煎蛋狀菌落 在液體培養(yǎng)基中 生長數(shù)目較少 培養(yǎng)時 不使培養(yǎng)基變混濁 霉形體在雞胚卵黃囊和絨毛尿囊膜上生長 也可在細胞上生長 不一定出現(xiàn)細胞病變 但干擾病毒的增殖 二 培養(yǎng)特性 根據(jù)對糖類分解能力 分為兩群 一群能分解多種糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 稱發(fā)酵型 另一群不能分解糖 稱為非發(fā)酵型 但能利用精氨酸作為碳素和能量來源 某些菌株在含血液的培養(yǎng)基中其菌落周圍可形成 型或 型溶血 二 生理生化特性 禽敗血霉形體 肺炎霉形體的菌落能吸附禽類紅細胞 二 生理生化特性 病原性支原體常定居于多動物的呼吸道 泌尿生殖道 消化道粘膜表面 乳腺 眼等 而且對胸腺 腹膜 關節(jié)滑液囊膜的間質細胞以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的親和力較強 主要寄生 部分腐生生活 單獨感染癥狀輕微或無癥狀 當動物受到應激或與細菌 病毒合并感染時 引起疾病 其特點 潛伏期長 慢性經(jīng)過 地方流行 具種的特征 豬 羊 禽 此病均易得 一般不引起實驗動物病變 致豬肺炎支原體3種 雞3種 牛支原體8種 羊支原體7種 同學們有興趣自己看書 三 致病性 呈慢性經(jīng)過 表現(xiàn)為漿液或粘液性鼻液 使鼻孔堵塞妨礙呼吸 頻頻搖頭 噴嚏 咳嗽 眼瞼腫脹 當炎癥蔓延下部呼吸道時 則喘氣和咳嗽更為顯著 并有呼吸道羅音 喘氣病豬呼吸困難 喘氣病豬肺臟實質 三 致病性 病雞張口呼吸 病雞氣囊渾濁 有泡沫狀物 腹腔大量泡沫 病雞氣囊渾濁 有黃色干酪樣物 肝周炎 心包炎 滑液囊炎 霉形體形態(tài)多樣 直接鏡檢意義不大 應取病料進行分離培養(yǎng)和形態(tài)學 生理生化及血清學鑒定 四 微生物學診斷 本章小結 支原體是一類沒有細胞壁的細菌 具有多形性 可通過細菌濾器 支原體對營養(yǎng)及培養(yǎng)條件要求較高 常常污染細胞培養(yǎng) 其分離鑒定除了要測定其生理生化特性外 還要用血清學及分子生物學方法 豬肺炎支原體引致地方流行性肺炎 雞支原體引致及和火雞的慢性呼吸道疾病 均較常見 后者主要依靠血清學方法做出診斷 本章參考復習題 1 支原體的生物學特性有哪些 2 支原體與其他微生物比較有何特點 3 雞支原體引起何種疾病 如何診斷 是一類依賴宿主細胞和專性細胞內寄生的小型G 原核單細胞微生物 其形態(tài)結構與繁殖方式等特性與細菌相似 生長要求與病毒相似 是一類介于細菌和病毒之間的微生物 立克次氏體是人類斑疹傷寒病的病原 此微生物的名字是以發(fā)現(xiàn)者的名字命名的 因發(fā)現(xiàn)者因此而死亡 第十八章立克次氏體和衣原體 第一節(jié)立克次氏體 具有多形性 呈球形 球桿形 桿形 啞鈴形或絲狀 大小介于細菌與病毒之間 但均不能通過細菌濾器 G 專性活細胞寄生 常用接種動物 雞胚卵黃囊以及細胞培養(yǎng)法培養(yǎng)立克次氏體 對理化因素抵抗力不強 對熱敏感 56 30min即可滅活 對一些廣譜抗生素敏感 如 氯霉素 金霉素等 但磺胺類藥物有促其生長的特點 因此不可用其進行治療 致人畜疾病的的立克次氏體 多寄生于網(wǎng)狀內皮系統(tǒng) 血管內皮細胞 紅細胞 并常寄生在虱 蚤 螨等節(jié)肢動物 或為寄主或貯主 或為媒介 寄生在節(jié)肢動物的腸壁上皮細胞中 兼能進入他們的唾液腺或生殖道內 并通過叮咬感染人畜 故立克次氏體為蟲媒病原 人動物感染后 可引起特異性免疫反應 三 立克次氏體特點 立克次氏體 是一類具有濾過性 嚴格細胞內寄生 并經(jīng)獨特發(fā)育周期 以二分裂繁殖和形成包涵體的G 原核細胞型微生物 第二節(jié)衣原體 G 圓形或橢圓形 含有DNA及RNA2種核酸及核糖體 具有細胞壁 結構類似G 菌 專性細胞內寄生 不能在細胞外人工培養(yǎng)基上生長 有獨特的發(fā)育周期 并以二分裂方式繁殖 對某些抗生素敏感 一 衣原體主要特點 衣原體在宿主細胞內生長繁殖時 具有獨特的發(fā)育周期 不同發(fā)育階段的衣原體 在形態(tài) 大小和染色性質上各異 在宿主細胞內以2種形式存在 個體形式 原體與網(wǎng)狀體群體形式 包涵體 二 形態(tài)染色與發(fā)育周期 1 原體又稱為原生小體或元體 呈球形 橢圓形或梨形 小而致密 為成熟的衣原體 存在于細胞之外 對人和動物具有高度的傳染性 但無繁殖能力 姬姆薩染色為紫色 衣原體的感染即由元體引起 當元體吸附于宿主細胞的細胞表面后 經(jīng)細胞吞飲進入細胞內 宿主細胞的胞漿膜圍于元體外面形成空泡 元體即在空泡內逐漸增大 形成網(wǎng)狀體 衣原體 2 網(wǎng)狀體又稱為始體 形體較大 圓形或橢圓形 無細胞壁 在細胞空泡內以二分裂方式繁殖 直至整個空泡內充滿許多中間體 由中間體成熟后變小即為子代元體 成熟的子代元體從破裂的感染細胞中釋出 再感染新的宿主細胞 開始新的發(fā)育周期 網(wǎng)狀體僅是衣原體在細胞內發(fā)育周期中的一種繁殖型個體形態(tài) 無感染性 衣原體 3 包涵體衣原體在細胞空泡內的繁殖過程中形成的群體形態(tài) 即為包涵體 其內含有無數(shù)子代元體和正在分裂繁殖的網(wǎng)狀體 衣原體 衣原體發(fā)育周期 對衣原體的培養(yǎng) 目前只能用雞胚 細胞培養(yǎng) 或動物接種3種方法 雞胚采用5 7日齡卵黃囊接種 細胞可用Vero Hela BHK21等 三 培養(yǎng)特性 較重要的衣原體主要有4種 沙眼衣原體 是出名的性傳播致病菌 鸚鵡熱衣原體 畜禽肺炎 流產(chǎn) 關節(jié)炎牛羊親衣原體 引起牛羊的多發(fā)性關節(jié)炎 腦脊髓炎和腹瀉肺炎衣原體 人的急性呼吸道疾病 四 分類及致病性 衣原體 衣原體科 衣原體屬 3個種 親衣原體屬 8個種 副衣原體科 只1個屬1個種 西氏衣原體科 只1個屬1個種 根據(jù)所致的不同疾病 選擇采取肺 關節(jié)液 腦脊髓 胎盤等病料 分別接種雞胚后 鑒定病原 5 7日齡雞胚卵黃囊接種 取死胚卵黃囊膜鏡檢 可見元體 網(wǎng)狀體及包涵體顆粒 五 微生物學診斷 本章小結 立克次氏體和衣原體都是專性細胞內寄生的原核微生物 結構及繁殖方式與細菌相似 生長要求類似病毒 立克次氏體主要寄生于節(jié)肢動物 并以其為傳播媒介 衣原體具有獨特的發(fā)育周期 是最早用雞胚分離成功的微生物 本章參考復習題 立克次氏體有何特點 立克次氏體和衣原體的形態(tài)及培養(yǎng)特點是什么 衣原體在體內增值 有其獨特的發(fā)育周期 試述各時期的特點和功能