高考生物一輪復(fù)習(xí) 專題2 細(xì)胞工程 2 動物細(xì)胞工程課件 新人教版選修3.ppt

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2.2動物細(xì)胞工程,考點一動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)【核心知識通關(guān)】1.動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：_____________、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞融合、_______________等。_________________是基礎(chǔ)。,動物細(xì)胞培養(yǎng),生產(chǎn)單克隆抗體,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),2.動物細(xì)胞培養(yǎng)：(1)動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程。①操作流程：,胰蛋白酶,細(xì)胞懸液,原代培養(yǎng),胰蛋白酶,②取材：_________________________，分化程度低增殖能力強。③分散成單個細(xì)胞的方法：剪刀剪碎組織塊、__________或___________處理。④特點：細(xì)胞貼壁、_________。⑤原理：_________。,幼齡動物或胚胎的組織器官,胰蛋白,酶,膠原蛋白酶,接觸抑制,細(xì)胞增殖,⑥結(jié)果：生成相同分化程度的細(xì)胞群。⑦使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為_____以內(nèi)，以保持_________________。,10代,正常的二倍體核型,(2)培養(yǎng)條件。①無菌、無毒：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行_____處理，還要添加一定量的_______；定期___________以清除代謝產(chǎn)物。②營養(yǎng)：除糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素之外通常還需加入___________等一些天然成分。,無菌,抗生素,更換培養(yǎng)液,血清、血漿,③適宜的溫度和pH：溫度為____________(哺乳動物)，pH為_________。④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2(維持___________)。(3)應(yīng)用：生物制品的生產(chǎn)，檢測_________，醫(yī)學(xué)研究。,36.50.5℃,7.2～7.4,培養(yǎng)液的pH,有毒物質(zhì),3.動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物：(1)動物核移植：將動物一個細(xì)胞的_______移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的_________中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為_________。,細(xì)胞核,卵母細(xì)胞,動物個體,(2)過程：,供體細(xì)胞培養(yǎng),去核,重組細(xì)胞,胚胎移植,供體,(3)原理：動物體細(xì)胞核具有_______。,全能性,(4)結(jié)果：獲得與供體_________基本相同的個體。(5)應(yīng)用：①加速良種繁育；②保護(hù)_________；③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；④作為異種移植的_____；⑤用于組織器官的移植。(6)存在問題：_________、克隆動物存在_____問題、動物食品的安全性問題等。,遺傳物質(zhì),瀕危物種,供體,成功率低,健康,【特別提醒】動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)的理解誤區(qū)(1)動物細(xì)胞培養(yǎng)中兩次使用胰蛋白酶的作用不同：第一次用胰蛋白酶處理剪碎的組織使之分散成單個細(xì)胞，第二次用胰蛋白酶處理使貼壁細(xì)胞從瓶壁上脫落下來。,(2)克隆動物性狀的影響因素：①克隆動物遺傳物質(zhì)來自兩個親本，即提供核的個體和提供卵細(xì)胞的個體，所以，性狀受兩個個體影響，但主要與提供核的個體相似。②在發(fā)育過程中可能發(fā)生基因突變、染色體變異導(dǎo)致性狀改變。③外界環(huán)境條件的影響引起不可遺傳的變異。,【思維拓展】動物細(xì)胞核移植的疑難解析(1)卵母細(xì)胞選擇時期及原因：MⅡ中期的卵母細(xì)胞，此時具備受精能力，細(xì)胞質(zhì)中合成與分裂、分化有關(guān)的物質(zhì)能刺激融合后重組細(xì)胞進(jìn)行分裂分化，形成重組胚胎。,(2)選卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因。①卵細(xì)胞大，易于操作。②卵黃多，營養(yǎng)豐富，為發(fā)育提供充足的營養(yǎng)。③能激發(fā)重組細(xì)胞分裂分化。,(3)供體細(xì)胞：取供體動物的體細(xì)胞培養(yǎng)，一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，因為10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。(4)動物體細(xì)胞不能經(jīng)培養(yǎng)直接發(fā)育成完整個體的原因：動物體細(xì)胞的全能性受到限制。(5)該過程用到的技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。,【高考模擬精練】1.(2015福建高考)GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，對損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體(如圖1所示)，并導(dǎo)入大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請回答：,(1)在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是____________。(2)構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時，需選擇圖1中的____________限制酶進(jìn)行酶切。,(3)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有3種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示)。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaⅠ酶和BamHⅠ酶對篩選得到的載體進(jìn)行雙酶切，并對酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析，結(jié)果如圖2所示。圖中第____________泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。,(4)將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后，為了檢測GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的__________與提取的蛋白質(zhì)雜交。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定密度時，需進(jìn)行____________培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實驗。,【解題指南】(1)圖示信息：限制酶的作用與目的基因和載體的關(guān)系、電泳結(jié)果與DNA片段的關(guān)系。(2)隱含信息：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的特點。,【解析】本題主要考查基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)等有關(guān)知識。(1)培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)，在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)和分離時，都要使用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散開。(2)圖1中構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體過程中，獲取目的基因(GDNF基因)使用的是XhoⅠ限制酶，故切割載體時應(yīng)使用同種限制酶進(jìn)行酶切。,(3)單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示)。選擇HpaⅠ酶和BamHⅠ酶對篩選的3種載體進(jìn)行雙酶切，對單個載體自連類型，只有HpaⅠ酶起作用，酶切后得到的就是一段6000bp的DNA片段，是圖2中的①；對GDNF基因與載體正向連接類型，HpaⅠ酶和BamHⅠ酶都起作用，酶切后得到一段6000-100+100=6000bp的DNA片段和一段,700-100+100=700bp的DNA片段，是圖2中的②；對GDNF基因與載體反向連接類型，HpaⅠ酶和BamHⅠ酶都起作用，酶切后得到一段6000-100+(700-100)=6500bp的DNA片段和一段100+100=200bp的DNA片段，是圖2中的③。,(4)檢測GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的抗體與提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交技術(shù)檢測提取的蛋白質(zhì)中是否含有GDNF基因的表達(dá)產(chǎn)物。神經(jīng)干細(xì)胞在原代培養(yǎng)過程中出現(xiàn)貼壁生長的特點，達(dá)到一定的密度時，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，細(xì)胞分裂受到抑制，需進(jìn)行分瓶后，傳代培養(yǎng)繼續(xù)分裂以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實驗。,答案：(1)使細(xì)胞分散開(2)XhoⅠ(3)②(4)抗體傳代,2.(2016威海模擬)科學(xué)家通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得了含有人生長激素基因的奶牛，如果要加速轉(zhuǎn)基因奶牛的繁育，可以對此轉(zhuǎn)基因奶牛進(jìn)行克隆(如圖所示)。請結(jié)合圖示回答下列相關(guān)問題：,(1)用于核移植的供體細(xì)胞，一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是_____________________________。(2)在進(jìn)行原代培養(yǎng)時，細(xì)胞增殖的方式是________________，此外，細(xì)胞增殖還表現(xiàn)出____________和接觸抑制等特點。,(3)將進(jìn)行培養(yǎng)的供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中，去除卵母細(xì)胞細(xì)胞核的目的是____________________。(4)將重組細(xì)胞在培養(yǎng)液中培養(yǎng)成的重組胚胎移入受體母牛后，該母牛就會生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)相同的犢牛，但也不是100%的復(fù)制，原因可能是__________________________________________(回答1～2條)。,【解析】(1)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代后就不易傳下去了。一般來說，細(xì)胞在傳至10～50代左右時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化。(2)在進(jìn)行原代培養(yǎng)時，細(xì)胞以有絲分裂的方式進(jìn)行增殖，同時表現(xiàn)出貼壁生長和接觸抑制的現(xiàn)象。(3)去除卵母細(xì)胞細(xì)胞核的目的是使克隆出的動物個體的遺傳物質(zhì)幾乎全部來自供體細(xì)胞。,(4)生物的性狀是細(xì)胞核基因和細(xì)胞質(zhì)基因共同作用的結(jié)果，同時，生物的性狀還受環(huán)境因素的影響，因此，克隆動物不可能是供體奶牛100%的復(fù)制品。,答案：(1)傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型(2)有絲分裂貼壁生長(3)使克隆出的動物個體的遺傳物質(zhì)幾乎全部來自供體細(xì)胞(4)①生物的性狀受細(xì)胞核基因和細(xì)胞質(zhì)基因共同控制；②生物的性狀還受環(huán)境因素的影響,【加固訓(xùn)練】1.現(xiàn)有A和B兩個肉牛品種，A品種牛的細(xì)胞組成可表示為A細(xì)胞核、A細(xì)胞質(zhì)，B品種牛則為B細(xì)胞核、B細(xì)胞質(zhì)。,(1)如果要獲得一頭克隆牛，使其細(xì)胞由A細(xì)胞核和B細(xì)胞質(zhì)組成，基本步驟是：從A品種牛體內(nèi)取出體細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)，然后再從培養(yǎng)細(xì)胞中取出________注入B品種牛的________卵母細(xì)胞，經(jīng)過某種刺激和培養(yǎng)后，可形成胚胎，該胚胎被稱為________，將該胚胎移入代孕母牛的________中，通過培育可達(dá)到目的。,(2)克隆牛的產(chǎn)生說明________具有全能性?？寺∨５男誀钪饕憩F(xiàn)________品種牛的特征。由A、B兩品種牛雜交得到的牛與克隆牛相比，雜交牛細(xì)胞核的遺傳物質(zhì)來自________個親本，細(xì)胞質(zhì)來自________性親本，克隆牛和雜交牛的遺傳物質(zhì)組成________(填“相同”或“不同”)。,【解析】(1)依據(jù)題意可知，要獲得由A細(xì)胞核和B細(xì)胞質(zhì)組成的重組細(xì)胞，就要提取A細(xì)胞核然后與去掉細(xì)胞核的B細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行重組，得到重組細(xì)胞，進(jìn)一步培養(yǎng)得到重組胚胎，再進(jìn)行胚胎移植，移植到代孕母牛的子宮里進(jìn)行培育。,(2)克隆動物利用的是動物細(xì)胞細(xì)胞核的全能性，得到的新個體的性狀主要由細(xì)胞核決定，與供核母牛的性狀基本一致，雜交牛是由精子和卵細(xì)胞融合得到受精卵，細(xì)胞核來自兩個親本，由于精子含有很少的細(xì)胞質(zhì)，受精卵的細(xì)胞質(zhì)主要來自卵細(xì)胞，所以雜交牛和克隆牛的遺傳物質(zhì)是不同的。,答案：(1)細(xì)胞核去核重組胚胎子宮(2)動物體細(xì)胞核A兩雌不同,2.(2016廊坊模擬)某研究小組進(jìn)行藥物實驗時，以動物肝細(xì)胞為材料，測定藥物對體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性。供培養(yǎng)的細(xì)胞有甲、乙兩種，甲細(xì)胞為肝腫瘤細(xì)胞，乙細(xì)胞為正常肝細(xì)胞。請回答下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：,(1)將數(shù)量相等的甲細(xì)胞和乙細(xì)胞分別置于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)液及其他培養(yǎng)條件均相同。一段時間后，觀察到甲細(xì)胞數(shù)量比乙細(xì)胞數(shù)量________。(2)在動物細(xì)胞培養(yǎng)時，通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，其原因是_____________________________。,(3)在兩種細(xì)胞生長過程中，當(dāng)乙細(xì)胞鋪滿瓶壁時，其生長_________。藥物實驗需要大量細(xì)胞，兩種細(xì)胞頻繁傳代，甲細(xì)胞比乙細(xì)胞可以傳代的次數(shù)更______。,(4)已知癌基因X過量表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，要試驗一種抗腫瘤藥物Y對甲細(xì)胞生長的影響，可將甲細(xì)胞分為A、B兩組，A組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入________，B組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入等量無菌生理鹽水，經(jīng)培養(yǎng)后，從A、B兩組收集等量細(xì)胞，通過分別檢測X基因在A、B兩組細(xì)胞中的________或__________合成水平的差異，確定Y的藥效。,【解析】(1)肝腫瘤細(xì)胞比正常肝細(xì)胞的分裂能力強，細(xì)胞周期短，因此在其他條件相同時，相同時間內(nèi)肝腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞數(shù)量多。(2)血清可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的一些營養(yǎng)物質(zhì)。(3)甲細(xì)胞為肝腫瘤細(xì)胞，已經(jīng)失去接觸抑制，而乙細(xì)胞為正常肝細(xì)胞，存在接觸抑制，因此在這兩種細(xì)胞生長過程中，當(dāng)乙細(xì)胞鋪滿瓶壁時，其生長停止。甲細(xì)胞能無限增殖，,因此其傳代的次數(shù)比乙多。(4)該實驗的目的是試驗一種抗腫瘤藥物Y對甲細(xì)胞生長的影響，因此自變量為是否加入抗腫瘤藥物Y，B組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入等量無菌生理鹽水，則A組細(xì)胞培養(yǎng)液中應(yīng)加入適量抗腫瘤藥物Y。已知癌基因X表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，而基因X的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個步驟，抗腫瘤藥物Y的作用可能是抑制基因X的轉(zhuǎn)錄過程，也可能是抑制其,翻譯過程，因此通過分別檢測基因X在A、B兩組細(xì)胞中的mRNA或相關(guān)蛋白質(zhì)合成水平的差異，以確定Y的藥效。,答案：(1)多(2)血清可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)(3)停止多(4)適量抗腫瘤藥物YmRNA相關(guān)蛋白質(zhì),【延伸探究】能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？提示：不能。因為兩者的最適pH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適pH較接近。,考點二動物細(xì)胞融合與單克隆抗體【核心知識通關(guān)】1.動物細(xì)胞融合：(1)含義：在一定的條件下將_____或_____動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。,兩個,多個,物理法：如電激(2)融合方法化學(xué)法：如_________生物法：如___________,,聚乙二醇,滅活的病毒,(3)植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較：,流動性,全能性,增殖,胰蛋白酶,滅活的病毒,制備,單克隆抗體,遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,2.單克隆抗體：(1)制備過程：,抗原,雜交,體內(nèi),單克隆抗體,(2)優(yōu)點：特異性強、_________，并可大量制備。(3)用途：作為_________，用于治療疾病和__________。,靈敏度高,診斷試劑,運載,藥物,【特別提醒】單克隆抗體制備的關(guān)鍵環(huán)節(jié)(1)取相應(yīng)B淋巴細(xì)胞前必須先注射相應(yīng)抗原，否則不能獲得單克隆抗體。,(2)細(xì)胞融合后需經(jīng)二次篩選。第一次：在特定的選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞)和融合的具有同種核的細(xì)胞(BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞)都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)才能生長。這種雜種細(xì)胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的特異性抗體。,第二次：經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞(很多種雜交瘤細(xì)胞)，需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)篩選后才可獲得足夠數(shù)量的、能分泌所需抗體的細(xì)胞。,【思維拓展】(1)對動物免疫的原因：B淋巴細(xì)胞要經(jīng)過免疫過程，即接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的B淋巴細(xì)胞，才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，所以與骨髓瘤細(xì)胞融合的B淋巴細(xì)胞實際上是漿細(xì)胞。,(2)雜交瘤細(xì)胞特點：具備雙親的遺傳物質(zhì)，不僅具有漿細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，還具有骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的能力，從而可以克服單純B淋巴細(xì)胞不能無限增殖的缺點，而大量生產(chǎn)單克隆抗體。,【高考模擬精練】1.(2014全國卷Ⅰ)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如圖所示。若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染,色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。,回答下列問題：(1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達(dá)到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過__________次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是__________小鼠，理由是________________。,(2)細(xì)胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有_____________，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是__________________。(3)雜交瘤細(xì)胞中有__________個細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是__________條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是__________________。,【解題指南】(1)題干關(guān)鍵詞：“效價”“雜交瘤細(xì)胞”“傳代培養(yǎng)”。(2)隱含信息：柱形圖中效價越高，能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)越大，說明免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力越強。(3)關(guān)鍵知識：制備單克隆抗體的技術(shù)流程和動物細(xì)胞體外培養(yǎng)的過程。,【解析】本題考查制備單克隆抗體的相關(guān)知識。(1)據(jù)圖中數(shù)據(jù)分析，第四次注射后Y、Z小鼠的血清抗體效價均達(dá)到16000以上，免疫后小鼠Y的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體效價最高，最適用于制備單克隆抗體。(2)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合在一起融合時，可能發(fā)生B淋巴細(xì)胞之間的融合，骨髓瘤細(xì)胞之間的融合和B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，故體系中會出現(xiàn)多種類型的細(xì)胞。,(3)雜交瘤細(xì)胞形成后，小鼠的B淋巴細(xì)胞核與其骨髓瘤細(xì)胞核會融合形成一個細(xì)胞核。染色體可達(dá)100條，有絲分裂后期染色體數(shù)目最多為200條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，仍然不是能惡性增殖的細(xì)胞，分裂次數(shù)是有限的。,答案：(1)四YY小鼠的抗體效價最高(2)B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞細(xì)胞融合是隨機的，沒有特異性且融合率達(dá)不到100%(3)1200(4)不能無限增殖,2.(2016南昌模擬)下圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程，據(jù)圖及所學(xué)知識回答下列問題：,(1)圖中實驗小鼠注射的甲是__________，從小鼠的________(免疫器官)中獲得了相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。(2)誘導(dǎo)細(xì)胞融合使用的物理方法有____________(至少答出兩種)，不同于誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的技術(shù)手段是利用________誘導(dǎo)細(xì)胞融合。,(3)用____________對乙篩選，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞均不能生長，只有融合的________才能生長，這種細(xì)胞的特點是______________________________________。,【解析】(1)實驗小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌的抗體特異性結(jié)合的抗原，即胃癌抗原，注射抗原后應(yīng)該從小鼠的脾臟中獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。(2)誘導(dǎo)細(xì)胞融合使用的物理方法有離心、振動、電激等；誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合不同于誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的技術(shù)手段是利用滅活的病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合。,(3)用特定的選擇培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞均不能生長，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長，這種細(xì)胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。,答案：(1)特定的抗原(胃癌抗原)脾臟(2)離心、振動、電激(兩種即可)滅活的病毒(3)特定的選擇培養(yǎng)基雜種細(xì)胞(或雜交瘤細(xì)胞)既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體,3.(2016濰坊模擬)人絨毛膜促性腺激素(HCG)是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。如圖是抗HCG單克隆抗體制備流程示意圖，請分析回答問題。,(1)制備單克隆抗體過程中要用到________________________和__________________________技術(shù)。(2)制備單克隆抗體過程中，給小鼠注射的HCG相當(dāng)于________，使小鼠產(chǎn)生分泌相應(yīng)________的淋巴細(xì)胞，此過程屬于特異性免疫中的________免疫。,(3)在細(xì)胞內(nèi)DNA的合成一般有兩條途徑，主要途徑是在細(xì)胞內(nèi)由糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻斷此途徑。另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下，經(jīng)酶的催化作用合成DNA，而骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成沒有此輔助途徑。①利用DNA合成途徑不同的特點配制的HAT培養(yǎng)基含有多種成分，其中添加的________具有篩選雜交瘤細(xì)胞的作用。,②最終篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞的特點是_________。(4)此過程生產(chǎn)的單克隆抗體可以與______________特異性結(jié)合，從而診斷早孕。,【解題指南】解答本題的關(guān)鍵：(1)明確單克隆抗體的制備過程。(2)熟知在培養(yǎng)基中能夠生長增殖的細(xì)胞是具有DNA復(fù)制途徑的細(xì)胞。,【解析】(1)制備單克隆抗體過程中要用到動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)。(2)給小鼠注射HCG，使小鼠進(jìn)行體液免疫，產(chǎn)生能分泌抗體的B淋巴細(xì)胞。(3)骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成只有一條途徑，在培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤，阻斷了骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合體的增殖。雜交瘤細(xì)胞有兩條合成DNA的途徑，因此在選擇培養(yǎng)基上雜交瘤細(xì)胞能生存并無限增殖。B淋巴細(xì)胞和骨,髓瘤細(xì)胞融合后的雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生單一抗體。(4)此單克隆抗體是針對人絨毛膜促性腺激素(HCG)作抗原產(chǎn)生的，可以與人絨毛膜促性腺激素(HCG)特異性結(jié)合。,答案：(1)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞融合(2)抗原抗體體液(3)①氨基嘌呤②能無限增殖并分泌特異性抗體(4)人絨毛膜促性腺激素(或HCG),【延伸探究】上題中(3)經(jīng)過氨基嘌呤處理后，能夠存活的細(xì)胞類型有哪些？提示：由于骨髓瘤細(xì)胞沒有DNA合成的輔助途徑，而氨基嘌呤阻斷主要途徑，所以經(jīng)處理后，能夠存活的細(xì)胞是B淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后的細(xì)胞。,4.(2016鄭州模擬)狂犬病病毒的核酸是RNA，G蛋白和N蛋白是狂犬病病毒的主要抗原，它們刺激人體后可誘導(dǎo)人體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)。下圖表示用生物工程制備抗狂犬病病毒單克隆抗體的過程。請回答下列問題：,(1)制備該單克隆抗體的技術(shù)屬于生物技術(shù)的________工程。圖中細(xì)胞1是小鼠體內(nèi)注入________后而獲得的__________________細(xì)胞，細(xì)胞2為____________細(xì)胞。細(xì)胞1具有產(chǎn)生________________的功能，細(xì)胞2的突出特點是______________________。,(2)若細(xì)胞1基因型為HH，細(xì)胞2基因型為SS，則細(xì)胞3的基因型應(yīng)該是__________。在兩兩融合后的眾多細(xì)胞中，基因的組合類型還可能有________________________________。,(3)培養(yǎng)液的配方通常含有糖、氨基酸、無機鹽、微量元素等，與植物細(xì)胞培養(yǎng)基有所不同的是，還含有__________________________________。細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長，隨著細(xì)胞的增多，需要定期用______________使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，以便分裝到更多的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。,(4)單克隆抗體與抗癌藥物結(jié)合可制成“生物導(dǎo)彈”，可明顯減少用藥量，原因是_________________。,【解析】(1)單克隆抗體的制備屬于細(xì)胞工程。細(xì)胞1是B淋巴細(xì)胞，是小鼠體內(nèi)注入抗原(狂犬病病毒)后而獲得的，具有產(chǎn)生特異性抗體的功能，細(xì)胞2為骨髓瘤細(xì)胞，可以無限增殖。(2)該融合細(xì)胞有3種類型：HHHH、SSSS、HHSS。(3)動物培養(yǎng)液應(yīng)該含有動物血清、血漿等。細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長，隨著細(xì)胞的增多，需要定期用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，以便分裝到更多的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。(4)單克隆抗體能夠與癌細(xì)胞特異性結(jié)合。,答案：(1)細(xì)胞狂犬病病毒(抗原)B淋巴骨髓瘤特異性抗體能夠無限增殖(2)HHSSHHHH、SSSS(3)動物血清、血漿胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)(4)單克隆抗體能夠與癌細(xì)胞特異性結(jié)合,【知識總結(jié)】制備單克隆抗體過程中的幾種細(xì)胞,【加固訓(xùn)練】1.人類在預(yù)防與治療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如圖：,請回答：(1)過程①代表的是__________。(2)過程②構(gòu)建A基因表達(dá)載體時，必須使用______________________和________________兩種工具酶。(3)過程③采用的生物技術(shù)是________________，獲得的X是__________________。,(4)對健康人進(jìn)行該傳染病預(yù)防時，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的__________所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，可從疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進(jìn)行__________比較；或用圖中的__________________________進(jìn)行特異性結(jié)合檢測。,【解析】(1)對于少數(shù)的以RNA為遺傳物質(zhì)的病毒，其遺傳信息的傳遞需要補充的過程有RNA的反轉(zhuǎn)錄和RNA的復(fù)制過程，圖中過程①代表的是反轉(zhuǎn)錄過程。(2)基因工程的步驟：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定。其中構(gòu)建基因表達(dá)載體時需要限制酶來切割以獲取目的基因，還需要通過DNA連接酶連接目的基因和,運載體。(3)過程③是將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的過程，獲得的叫雜交瘤細(xì)胞，采用的生物技術(shù)是動物細(xì)胞融合技術(shù)，也稱為細(xì)胞雜交。(4)該RNA病毒表面的A蛋白為主要的抗原，故而可選用通過基因工程生產(chǎn)的A蛋白制備疫苗；確診時判斷該病毒是否為題中的RNA病毒，可以進(jìn)行核酸基因序列的比對，也可以利用單克隆抗體具備的特異性，即利用抗A蛋白的特異性,單克隆抗體通過能否特異性結(jié)合判斷病毒表面是否有A蛋白，進(jìn)一步檢測是否為目的RNA病毒。,答案：(1)反轉(zhuǎn)錄(2)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)DNA連接酶(兩空可以互換)(3)動物細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞(4)A蛋白核酸(基因)序列抗A蛋白的單克隆抗體,2.如圖為制備單克隆抗體和多克隆抗體的示意圖，據(jù)圖回答下列問題：,(1)圖中向小鼠注射包含多種抗原決定簇的抗原后，所獲得的免疫抗血清實際上是含有________________(填寫抗體的名稱)的混合物，這種方法制備的多克隆抗體不僅產(chǎn)量低、而且純度低。(2)圖中選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，說明細(xì)胞膜具有________，如果僅考慮細(xì)胞的兩兩融合，其融合細(xì)胞有________種類型。,(3)圖中兩次篩選的目的不同，其中篩選①的目的是篩選出________，篩選②的目的是篩選出_____________________。(4)科學(xué)工作者正在研究的用于治療癌癥的“生物導(dǎo)彈”就是____________________。用“生物導(dǎo)彈”治療癌癥的方法優(yōu)于化療的原因是____________________________________________________________。,【解析】(1)結(jié)合題圖可看出獲得的免疫抗血清實際上是Ab1、Ab2、Ab3、Ab4多種抗體的混合物。(2)動物細(xì)胞融合的過程體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動性；僅考慮兩個細(xì)胞的融合，可得到B淋巴細(xì)胞+B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞3種類型的融合細(xì)胞。,(3)在單克隆抗體的制備過程中，篩選①的目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞，篩選②的目的是獲得能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。(4)把單克隆抗體和抗癌藥物相結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，注入患者體內(nèi)，借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用，能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置，在原位殺死癌細(xì)胞。這樣既不損傷正常細(xì)胞，又減小了用藥劑量，而且療效高、毒副作用小。,答案：(1)Ab1、Ab2、Ab3、Ab4(2)流動性3(3)雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(4)單克隆抗體上連接抗癌藥物可以原位殺死癌細(xì)胞，還不損傷正常細(xì)胞，且用藥劑量小，療效高、毒副作用小,3.(2013海南高考)單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV-1的單克隆抗體可快速檢測HSV-1。回答下列問題：,(1)在制備抗HSV-1的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-1蛋白，一段時間后，若小鼠血清中抗__________的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了__________反應(yīng)，再從小鼠的__________中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的______________細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點是____________________________________________。,(2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的__________中使其增殖，再從__________中提取、純化獲得。(3)通過上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識別這種HSV-1蛋白，其原因是該抗體具有______________和______________等特性。,【解題指南】解答本題時需關(guān)注以下兩點：(1)明確產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞既需要無限增殖，又能大量產(chǎn)生單一抗體的特點。(2)理解單克隆抗體的制備過程。,【解析】本題考查單克隆抗體的制備過程、單克隆抗體的特點。(1)給小鼠注射HSV-1蛋白后，小鼠體內(nèi)發(fā)生體液免疫，小鼠血清中產(chǎn)生抗HSV-1蛋白的抗體。B淋巴細(xì)胞是從小鼠的淋巴器官(如脾、骨髓、扁桃體、胸腺等)中獲取。雜交瘤細(xì)胞由B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合而來，具有兩個親本細(xì)胞的特性：既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。,(2)若想獲得大量單克隆抗體，通常有兩種方法：一是將雜交瘤細(xì)胞在動物細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)，然后從動物細(xì)胞培養(yǎng)液中篩選分離出單克隆抗體；二是將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖，然后從小鼠的腹水中提取純化獲得。(3)單克隆抗體具有特異性強、純度高的特點。,答案：(1)HSV-1蛋白體液免疫脾臟骨髓瘤無限增殖且產(chǎn)生專一抗體(2)腹腔腹水(3)純度高特異性強,