國(guó)內(nèi)外沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法.ppt

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國(guó)內(nèi)外沙門(mén)菌檢測(cè)方法介紹,中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所郭云昌,DANIELELMERSALMON,(1850-1914)美國(guó)獸醫(yī)微生物和病理學(xué)家。是美國(guó)授予的第一位獸醫(yī)學(xué)博士。1884年任美國(guó)農(nóng)業(yè)部畜牧局首任局長(zhǎng)。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門(mén)氏菌。在醫(yī)學(xué)微生物中通用的沙門(mén)菌一詞，就是為紀(jì)念他而以他的名字命名的。,沙門(mén)菌（Salmonella）,沙門(mén)菌（Salmonella）,沙門(mén)菌屬（Salmonella）是一大群寄生于人類(lèi)和動(dòng)物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌統(tǒng)稱(chēng)為沙門(mén)桿菌。,沙門(mén)菌（Salmonella）,目前至少有67種O抗原和2000個(gè)以上血清型，所致疾病稱(chēng)沙門(mén)菌病。腸熱癥：是傷寒病和副傷寒病的總稱(chēng)，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。急性腸炎(食物中毒):是最常見(jiàn)的沙門(mén)桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。敗血癥：常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。,大小0.6～1.02～3um，無(wú)芽胞，一般有鞭毛(雞沙門(mén)菌除外)，無(wú)莢膜，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，最適pH值為6.8～7.8。,沙門(mén)菌生物學(xué)性狀,,不分解乳糖（亞利桑那菌除外）。分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門(mén)菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）。多數(shù)產(chǎn)生H2S，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。,沙門(mén)菌生物學(xué)性狀,沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn),三糖鐵（TSI）,尿素酶試驗(yàn)陰性（黃）陽(yáng)性（紅）,沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn),吲哚試驗(yàn)陰性（液面黃）陽(yáng)性（液面紅）,VP試驗(yàn)陽(yáng)性（紅色）陰性（不變）,沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn),賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)對(duì)照陽(yáng)性（紫）陰性（黃）,丙二酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性（蘭）陰性（不變）,ONPG試驗(yàn)陽(yáng)性（黃）空白,沙門(mén)菌常用生化試驗(yàn),國(guó)內(nèi)外沙門(mén)菌檢測(cè)方法（傳統(tǒng)方法）,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)FDA（Food&DrugAdministration）AOAC(AssociationofOfficialAnalyticalChemists)FSIS（FOODSAFETYANDINSPECTIONSERVICE）ISO加拿大官方食品微生物分析方法,TSI（排除A/AH2S－結(jié)果），靛基質(zhì)，尿素，KCN，賴(lài)氨酸,,沙門(mén)氏菌血清學(xué)試驗(yàn),H2S＋靛＋尿－KCN－賴(lài)＋,H2S－靛－尿－KCN－賴(lài)＋/－,非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果,沙門(mén)氏菌血清學(xué)試驗(yàn),沙門(mén)氏菌,,非沙門(mén)氏菌,微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn),中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),GB/T4789.4-2003,出口食品沙門(mén)氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗(yàn)方法,肉類(lèi)、蛋品,緩沖胨水（BPW）,四硫磺酸鹽煌綠（TTB）亞硒酸鹽胱氨酸（SC）,亞硒酸鹽胱氨酸（SC）四硫磺酸鹽煌綠（TTB）,BS&DHL(亞利桑那菌瓊脂),TSI&賴(lài)氨酸脫羧酶,TSI&尿素酶,生化試驗(yàn),,血清學(xué)試驗(yàn)（“O”抗原，“Vi”抗原）,結(jié)果判定,檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),SN0170－92,,樣品（20類(lèi)）25g,,BS&XLD&HE,TSI&LIA,非沙門(mén)菌,,沙門(mén)菌,,非沙門(mén)菌,細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)（FDA/BAM）,第五章沙門(mén)菌屬,肉、禽和蛋品中沙門(mén)菌的分離和鑒定,USDA/FSISMLG4.02,樣品,,BPWorBPW（含結(jié)晶紫）,351℃20-24h,BGS&DMLIAorXLT4,420.5℃22~24h,0.50.05mL＋10mLTT,0.10.02mL＋10mLmRV,,,420.5℃22~24h,,351℃18~24h&48h,TSI&LIA血清學(xué)試驗(yàn),,商業(yè)生化試劑盒或自動(dòng)鑒定系統(tǒng)or傳統(tǒng)生化鑒定（AOACOfficialMethod967.27or"EdwardsandEwingsIdentificationofEnterobacteriaceae"）,,報(bào)告結(jié)果,肉制品中沙門(mén)菌的分離和鑒定FDA&USDA/FSIS,乳糖肉湯,緩沖蛋白胨水,TTB肉湯,RV肉湯,TTB肉湯,RV肉湯,BS,XLD,HE,XLT4,2倍改良LIA,BGS,生化篩選（LIA,TSI）,鑒定及確證試驗(yàn)葡萄糖脲酶試驗(yàn)衛(wèi)矛醇動(dòng)力試驗(yàn)吲哚MR-VP測(cè)試氰化鉀粉紅酒石酸鹽瓊脂乳糖水楊苷賴(lài)氨酸脫羧酶西蒙氏枸櫞酸鹽丙二酸蔗糖,血清學(xué)試驗(yàn),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,AOAC沙門(mén)菌檢測(cè)方法,AOACOfficialMethod967.25SalmonellainFoodsPreparationofCultureMediaandReagentsAOACOfficialMethod967.26SalmonellainProcessedFoodsDetectionAOACOfficialMethod967.27SalmonellainFoodsIdentificationAOACOfficialMethod967.28SalmonellainFoodsSerologicalTests,食品中的沙門(mén)菌檢測(cè)方法,AOAC967.25－967.28,處理樣品,1mL+10mLSC,1mL+10mLTT,35℃242h,,,XLD&HE&BS,,35℃242h（BS24h&48h）,35℃242h,TSI&LIA,35℃242h,純培養(yǎng)物,不純培養(yǎng)物,,純培養(yǎng)物,MACorXLDorHE,,,,尿素酶－,尿素酶＋,,非沙門(mén)菌,,H抗原，LIA，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），O抗原,,,吲哚＋&H血清－,KCN＋&LIA－,非沙門(mén)菌,非沙門(mén)菌,,補(bǔ)充生化試驗(yàn),酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MR－VP,西蒙氏檸檬酸鹽,,,非沙門(mén)菌,沙門(mén)菌,,,,25g樣品,,225mLBPW,35℃or37℃16~20h,0.1mL+10mLRV,10mL+100mLSC,,,42℃24h,35℃or37℃24h&48h,酚紅煌綠瓊脂（亮綠瓊脂）&第二種選擇性平板,35℃or37℃20~24h,無(wú)典型菌落再培養(yǎng)18～24h,,,營(yíng)養(yǎng)瓊脂純化可疑菌落,每個(gè)平板選5個(gè)菌落,,35℃or37℃18~24h,TSI，尿素酶，賴(lài)氨酸脫羧酶，ONPG，VP，吲哚,,血清學(xué)試驗(yàn)（O抗原，Vi抗原，H抗原）,,報(bào)告結(jié)果送參考實(shí)驗(yàn)室分型,ISO6579:1993(E),微生物－沙門(mén)菌檢測(cè)的通用方法,25g樣品,,營(yíng)養(yǎng)肉湯or緩沖胨水or煌綠水溶液or胰蛋白酶大豆肉湯,35℃18~24h,1mL+9mLSC,1mL+9mLTBG,,,35℃242h,42.5℃242h,BS&BGS,35℃242h&482h,純培養(yǎng)物,不純培養(yǎng)物,,純培養(yǎng)物,MAC,,,,,TSI&LIA&尿素瓊脂,,O多價(jià)血清，H多價(jià)血清,食品中沙門(mén)菌的分離和鑒定,加拿大HPB方法,,商業(yè)生化試劑盒或自動(dòng)鑒定系統(tǒng),,報(bào)告,MFHPB-20,沙門(mén)菌儀器檢測(cè)法,VIDAS（生物梅里埃公司）BAX（杜邦公司）,沙門(mén)菌儀器檢測(cè)法,VIDAS應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)制造的全自動(dòng)免疫分析儀，用熒光分析技術(shù)通過(guò)固相吸附器，用已知抗體來(lái)捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗，通過(guò)激發(fā)光源檢測(cè)，即能自動(dòng)讀出發(fā)光的陽(yáng)性標(biāo)本，其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高，速度快，可以在48小時(shí)的時(shí)間內(nèi)快速鑒定沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157：H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等。,VIDAS,沙門(mén)菌儀器檢測(cè)法,DUPONTQualiconBAXSystem應(yīng)用DNA分子核酸探針或基因探針技術(shù)制造的全自動(dòng)PCR分析儀。將已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標(biāo)記，加入已變性的被檢DNA樣品中，在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈，從而達(dá)到鑒定樣品中DNA的目的。,DUPONTQualiconBAXSystem,,商品化生化鑒定系統(tǒng),VITEKGNI+應(yīng)用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進(jìn)行測(cè)試，卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)。先制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液，然后將菌懸液接種到各種細(xì)菌的小卡上，將其放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)，每隔一定時(shí)間，儀器會(huì)自動(dòng)檢測(cè)培養(yǎng)基的發(fā)酵情況，并換算成能被計(jì)算機(jī)所接受的生物編碼。最后由計(jì)算機(jī)判定，打印出鑒定結(jié)果。,VITEK,商品化生化鑒定系統(tǒng),API20EAPI20E生化鑒定是根據(jù)快速酶促反應(yīng)及代謝產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的一種細(xì)菌編碼鑒定法，廣泛應(yīng)用于臨床、食品中革蘭氏陰性桿菌的快速鑒定。,API20E,API20E,沙門(mén)氏菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上的菌落特（紫）,沙門(mén)氏菌在海博公司顯色培養(yǎng)基上的菌落特征（紅）,沙門(mén)菌檢測(cè)顯色培養(yǎng)基,謝謝大家！,