動物細胞融合和單克隆抗體.ppt

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2010-3-26,1,細胞融合和單克隆抗體,2010-3-26,2,復習鞏固：1.植物體細胞雜交 2.植物組織培養(yǎng),2010-3-26,3,植物體細胞雜交,,原生質(zhì) 體融合,雜種細胞,,,組織培養(yǎng),,雜種植株,纖維素酶、果膠酶,誘導,2010-3-26,4,1.概念：動物細胞融合（cell fusion)，又稱體細胞雜交（somatic hybridiazation），是指兩個或更多個相同或不同細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。,一、動物細胞融合,融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。,2010-3-26,5,2、動物細胞融合基本原理：,與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細胞膜的流動性,3、誘導方式,,物理法：,化學法：,生物法：,滅活的病毒,電激、振動、離心,聚乙二醇（PEG）,例如：仙臺病毒,2010-3-26,6,滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面,細胞膜被病毒顆粒穿通,細胞膜連接,細胞融合，形成雜種細胞 （細胞膜具有一定的流動性）,生物法：,滅活的病毒,（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）,2010-3-26,7,病毒促使細胞融合的主要步驟如下：,兩個原生質(zhì)體或細胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近； 通過病毒與原生質(zhì)體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透， 胞質(zhì)互相滲透； 兩個原生質(zhì)體的細胞核互相融合，兩個細胞融為一體； 進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。,2010-3-26,8,4、過程：,動物細胞A 動物細胞B,,誘導，融合,2個完整的雜交細胞AB,有絲分裂,,（膜融合、,,,誘導方法,,質(zhì)融合、,核融合）,,單核細胞,2010-3-26,9,5、動物細胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史告訴我們：科學技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，實現(xiàn)動物細胞融合有什么意義呢？,打破生殖隔離，使遠緣雜交成為可能； 廣泛應用多個學科領(lǐng)域； 重要用途：制備單克隆抗體。,2010-3-26,10,6、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較,獲得雜種植株,細胞膜的流動性,細胞膜的流動性 細胞的全能性,去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合,使細胞分散后誘導細胞融合,物理（離心、振蕩、電刺激） 化學（聚乙二醇）,物理、化學方法（同左） 滅活的病毒,2010-3-26,11,2、什么是抗體？,二、單克隆抗體,回顧,3、抗體的分布？,抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。,主要分布在血清中。,1、什么是克隆？,“克隆”從英文“clone”音譯而來，是指從一個共同祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細胞或個體。在細胞水平指動物細胞培養(yǎng).,2010-3-26,12,由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖（克?。┬纬苫蛐拖嗤募毎?，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。,1、單克隆抗體概念:,2010-3-26,13,該法制備抗體的特點： 產(chǎn)量低、純度低， 且抗體的特異性差、靈敏度低。,自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？,思 考：如何大量獲取某種特定抗體？,2010-3-26,14,B淋巴細胞特點：,３.每一個B淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。,１.B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。,２.動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。,2010-3-26,15,怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？,提示1：僅用細胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？,提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？,提示3：有什么方法能使B細胞產(chǎn)生抗體的能 力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？,2010-3-26,16,2、單克隆抗體的制備過程,自學與思考： 1）在從小鼠體內(nèi)取B淋巴細胞前應對小鼠作何種處理？ 為什么要這樣處理？ 2）從小鼠何處獲取B淋巴細胞？ 3）如只考慮兩兩融合，可能出現(xiàn)哪些融合類型細胞？ 4）是否所有雜交瘤細胞都能產(chǎn)生某一特定抗體？ 5）由特定的B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合成的雜交 瘤細胞具有什么特點？ 6）最后可以通過哪些途徑大量獲取抗體？,2010-3-26,17,,,,B淋巴細胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤細胞,培養(yǎng)骨髓瘤細胞,,,,,融合,（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？融合細胞幾種類型？,骨髓瘤細胞---骨髓瘤細胞 B淋巴細胞--- B淋巴細胞 B淋巴細胞---骨髓瘤細胞,多種雜交細胞,,,,,,在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng),專一抗體檢驗陽性,,克隆上述雜交細胞,分開不同雜交細胞，克隆專一抗體， 檢驗陽性細胞,,單克隆抗體,注射到小鼠體內(nèi),體外培養(yǎng),第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）。,,第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。,,該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。,雜交瘤細胞有何特點？,特異性強，靈敏度高,2010-3-26,18,2010-3-26,19,3.單克隆抗體的應用：,①作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質(zhì)，并與 一定抗原特異性結(jié)合。 優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速,②用于,運載藥物：制成“生物導彈”,治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,,2010-3-26,20,,2010-3-26,21,兩個過程,,動物細胞融合過程,單克隆抗體制備過程,三個“一”,,一個誘導細胞融合的新方法,一個新細胞,一個優(yōu)勢,課堂小結(jié),你記住了嗎？,－－滅活的病毒,－－雜交瘤細胞,－－單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢,2010-3-26,22,形成雜種細胞,獲得雜種植株,結(jié)果,物理、化學方法,（同左）,滅活的病毒,物理（離心、振蕩、電刺激）,化學（聚乙二醇）,誘導方法,細胞膜的流動性,細胞膜的流動性、,植物細胞全能性,原 理,動物細胞融合,植物體細胞雜交,,,,,,,,,,,比較項目,,1、植物、動物細胞融合的比較,課堂小結(jié),,融合前處理,用纖維素酶、 果膠酶去壁,用胰蛋白酶 使細胞分散,2010-3-26,23,2、單克隆抗體制備過程,B淋巴細胞 骨髓瘤細胞,誘導融合,B-B細胞,,B-瘤細胞,瘤-瘤細胞,,選擇培養(yǎng),雜交瘤細胞（ B-瘤細胞）,,克隆化培養(yǎng),抗體檢測,產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞,,體外培養(yǎng),單克隆抗體,,2010-3-26,24,,1.右圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案,制備單克隆抗體,不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞。,(1).該實驗方案的目的是： ________________,(2).該方案能達到預期效果嗎？為什么？,,課堂練習,,2010-3-26,25,,,,(3)A是從小鼠的脾臟中取得__________ 該細胞能夠產(chǎn)生______ 。,(4)圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________ ,又能___________。,B淋巴細胞,抗體,細胞融合,滅活的病毒,雙親細胞,產(chǎn)生專一抗體,無限增殖,,課堂練習,,2010-3-26,26,,,（5）__________ 技術(shù)是單克隆抗體的技術(shù)支持。,,動物細胞培養(yǎng),（6）單克隆抗體的特點 ________________，并可大量制備。,特異性強，靈敏度高,,課堂練習,