動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體.ppt

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2010-3-26,1,細(xì)胞融合和單克隆抗體,2010-3-26,2,復(fù)習(xí)鞏固：1.植物體細(xì)胞雜交 2.植物組織培養(yǎng),2010-3-26,3,植物體細(xì)胞雜交,,原生質(zhì) 體融合,雜種細(xì)胞,,,組織培養(yǎng),,雜種植株,纖維素酶、果膠酶,誘導(dǎo),2010-3-26,4,1.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion)，又稱(chēng)體細(xì)胞雜交（somatic hybridiazation），是指兩個(gè)或更多個(gè)相同或不同細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。,一、動(dòng)物細(xì)胞融合,融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞。,2010-3-26,5,2、動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理：,與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性,3、誘導(dǎo)方式,,物理法：,化學(xué)法：,生物法：,滅活的病毒,電激、振動(dòng)、離心,聚乙二醇（PEG）,例如：仙臺(tái)病毒,2010-3-26,6,滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面,細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通,細(xì)胞膜連接,細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞 （細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）,生物法：,滅活的病毒,（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）,2010-3-26,7,病毒促使細(xì)胞融合的主要步驟如下：,兩個(gè)原生質(zhì)體或細(xì)胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近； 通過(guò)病毒與原生質(zhì)體或細(xì)胞膜的作用使兩個(gè)細(xì)胞膜間互相滲透， 胞質(zhì)互相滲透； 兩個(gè)原生質(zhì)體的細(xì)胞核互相融合，兩個(gè)細(xì)胞融為一體； 進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細(xì)胞。,2010-3-26,8,4、過(guò)程：,動(dòng)物細(xì)胞A 動(dòng)物細(xì)胞B,,誘導(dǎo)，融合,2個(gè)完整的雜交細(xì)胞AB,有絲分裂,,（膜融合、,,,誘導(dǎo)方法,,質(zhì)融合、,核融合）,,單核細(xì)胞,2010-3-26,9,5、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史告訴我們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義呢？,打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能； 廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域； 重要用途：制備單克隆抗體。,2010-3-26,10,6、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較,獲得雜種植株,細(xì)胞膜的流動(dòng)性,細(xì)胞膜的流動(dòng)性 細(xì)胞的全能性,去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合,使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合,物理（離心、振蕩、電刺激） 化學(xué)（聚乙二醇）,物理、化學(xué)方法（同左） 滅活的病毒,2010-3-26,11,2、什么是抗體？,二、單克隆抗體,回顧,3、抗體的分布？,抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。,主要分布在血清中。,1、什么是克??？,“克隆”從英文“clone”音譯而來(lái)，是指從一個(gè)共同祖先，通過(guò)無(wú)性繁殖的方法產(chǎn)生出來(lái)的一群遺傳特性相同的DNA分子，細(xì)胞或個(gè)體。在細(xì)胞水平指動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng).,2010-3-26,12,由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克隆）形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。,1、單克隆抗體概念:,2010-3-26,13,該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低， 且抗體的特異性差、靈敏度低。,自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？,思 考：如何大量獲取某種特定抗體？,2010-3-26,14,B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：,３.每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。,１.B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。,２.動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。,2010-3-26,15,怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？,提示1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？,提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？,提示3：有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能 力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能力同時(shí)具備呢？,2010-3-26,16,2、單克隆抗體的制備過(guò)程,自學(xué)與思考： 1）在從小鼠體內(nèi)取B淋巴細(xì)胞前應(yīng)對(duì)小鼠作何種處理？ 為什么要這樣處理？ 2）從小鼠何處獲取B淋巴細(xì)胞？ 3）如只考慮兩兩融合，可能出現(xiàn)哪些融合類(lèi)型細(xì)胞？ 4）是否所有雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生某一特定抗體？ 5）由特定的B淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合成的雜交 瘤細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？ 6）最后可以通過(guò)哪些途徑大量獲取抗體？,2010-3-26,17,,,,B淋巴細(xì)胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤細(xì)胞,培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞,,,,,融合,（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類(lèi)型？融合細(xì)胞幾種類(lèi)型？,骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞--- B淋巴細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞,多種雜交細(xì)胞,,,,,,在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng),專(zhuān)一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性,,克隆上述雜交細(xì)胞,分開(kāi)不同雜交細(xì)胞，克隆專(zhuān)一抗體， 檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞,,單克隆抗體,注射到小鼠體內(nèi),體外培養(yǎng),第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。,,第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。,,該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體又能無(wú)限增殖。,雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？,特異性強(qiáng)，靈敏度高,2010-3-26,18,2010-3-26,19,3.單克隆抗體的應(yīng)用：,①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與 一定抗原特異性結(jié)合。 優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速,②用于,運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”,治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,,2010-3-26,20,,2010-3-26,21,兩個(gè)過(guò)程,,動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程,單克隆抗體制備過(guò)程,三個(gè)“一”,,一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法,一個(gè)新細(xì)胞,一個(gè)優(yōu)勢(shì),課堂小結(jié),你記住了嗎？,－－滅活的病毒,－－雜交瘤細(xì)胞,－－單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì),2010-3-26,22,形成雜種細(xì)胞,獲得雜種植株,結(jié)果,物理、化學(xué)方法,（同左）,滅活的病毒,物理（離心、振蕩、電刺激）,化學(xué)（聚乙二醇）,誘導(dǎo)方法,細(xì)胞膜的流動(dòng)性,細(xì)胞膜的流動(dòng)性、,植物細(xì)胞全能性,原 理,動(dòng)物細(xì)胞融合,植物體細(xì)胞雜交,,,,,,,,,,,比較項(xiàng)目,,1、植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較,課堂小結(jié),,融合前處理,用纖維素酶、 果膠酶去壁,用胰蛋白酶 使細(xì)胞分散,2010-3-26,23,2、單克隆抗體制備過(guò)程,B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)融合,B-B細(xì)胞,,B-瘤細(xì)胞,瘤-瘤細(xì)胞,,選擇培養(yǎng),雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）,,克隆化培養(yǎng),抗體檢測(cè),產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞,,體外培養(yǎng),單克隆抗體,,2010-3-26,24,,1.右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案,制備單克隆抗體,不能，沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。,(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是： ________________,(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？,,課堂練習(xí),,2010-3-26,25,,,,(3)A是從小鼠的脾臟中取得__________ 該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______ 。,(4)圖中B為_(kāi)_______________過(guò)程，常用_________________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________ ,又能___________。,B淋巴細(xì)胞,抗體,細(xì)胞融合,滅活的病毒,雙親細(xì)胞,產(chǎn)生專(zhuān)一抗體,無(wú)限增殖,,課堂練習(xí),,2010-3-26,26,,,（5）__________ 技術(shù)是單克隆抗體的技術(shù)支持。,,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),（6）單克隆抗體的特點(diǎn) ________________，并可大量制備。,特異性強(qiáng)，靈敏度高,,課堂練習(xí),