高中生物 專題二 課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù)課件 新人教版選修1.ppt

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稀釋涂布平板法 注意 移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌 操作時(shí) 試管口和移液管離火焰1 2cm處 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求 想一想 第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作 問(wèn)題討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求 想一想 第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證 無(wú)菌 例如 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適 吸管頭不要接觸任何其他物體 吸管要在酒精燈火焰周圍等等 問(wèn)題討論 微生物的恒溫培養(yǎng) 微生物的恒溫培養(yǎng) 微生物的恒溫培養(yǎng) 菌種的保存 1 臨時(shí)保藏 接種到固體斜面培養(yǎng)基 菌落長(zhǎng)成后置于4 冰箱保存 2 長(zhǎng)期保存 甘油冷凍管藏法 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) DAT 四 實(shí)驗(yàn)操作成果評(píng)價(jià) 一 培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 2d后無(wú)菌落生長(zhǎng) 說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的 否則需要重新制備 二 接種操作是否符合無(wú)菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色 形狀 大小基本一致 并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn) 則說(shuō)明接種操作是符合要求的 如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落 則說(shuō)明接種過(guò)程中 無(wú)菌操作還未達(dá)到要求 需要分析原因 再次練習(xí) 三 是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同 及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn) 并能觀察到其他一些細(xì)微的變化 這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣 兩個(gè)主要目的 1 從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌 2 統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌 在微生物學(xué)中 將允許特定種類的微生物生長(zhǎng) 同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 背景知識(shí) 測(cè)定微生物數(shù)量的方法 1 直接計(jì)數(shù)法 最常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 測(cè)定微生物數(shù)量的方法 背景知識(shí) 1 直接計(jì)數(shù)法 最常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 先將待測(cè)樣品制成懸液 然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù) 根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來(lái)計(jì)算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù) 測(cè)定微生物數(shù)量的方法 背景知識(shí) 優(yōu)點(diǎn) 設(shè)備簡(jiǎn)單 能觀察微生物的形態(tài)特征 優(yōu)點(diǎn) 設(shè)備簡(jiǎn)單 能觀察微生物的形態(tài)特征 缺點(diǎn) 難以計(jì)數(shù)微小量多的細(xì)菌 一般用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù) 2 間接計(jì)數(shù)法 最常用稀釋平板計(jì)數(shù)法 二 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 二 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù) 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí) 培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落 來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 因此 恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確 通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上 培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30 300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù) 每克樣品中的菌株數(shù) C V M C 某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V 涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積 ml M 稀釋倍數(shù) 統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低 這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí) 平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 因此結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示 注意 兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù) 在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中 得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果 1 第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板 統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230 2 第二位同學(xué)在該深度下涂布了三個(gè)平板 統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21 212和256 該同學(xué)以這三個(gè)平板菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果 實(shí)例1 你認(rèn)為哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值 這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎 如果需要 如何改進(jìn) 你認(rèn)為哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值 這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎 如果需要 如何改進(jìn) 第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板 沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組 因此結(jié)果不具有說(shuō)服力 第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題 涂布了3個(gè)平板 但是 其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn) 說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤 因此 不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值 因此 這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn) 在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí) 一定要涂布至少3個(gè)平板 作為重復(fù)組 才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性 在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí) 一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致 結(jié)果不一致 意味著操作有誤 需要重新實(shí)驗(yàn) 說(shuō)明設(shè)置重復(fù)組的重要性 在做本課題的實(shí)驗(yàn)時(shí) A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落 但是 其它同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落 其他同學(xué)認(rèn)為A同學(xué)的結(jié)果有問(wèn)題 他們分析可能是A同學(xué)的培養(yǎng)基被雜菌污染了 或者培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì) 因而導(dǎo)致不能分解尿素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 實(shí)例2 但是 A同學(xué)確信自己的實(shí)驗(yàn)操作準(zhǔn)確無(wú)誤 與其他同學(xué)的結(jié)果之所以不相同 是因?yàn)樽约核x用的土壤樣品不同 但是 A同學(xué)在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候并沒(méi)有設(shè)置對(duì)照 因而此時(shí)也拿不出令同學(xué)們信服的證據(jù) 你能通過(guò)設(shè)置對(duì)照 幫助A同學(xué)排除上述兩個(gè)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素嗎 一是由于土樣不同 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤 究竟是哪個(gè)原因 可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明 一種方案 可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 如果結(jié)果與A同學(xué)一致 則證明A無(wú)誤 如果結(jié)果不同 則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題 另一種方案 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng) 作為空白對(duì)照 以證明培養(yǎng)基是否受到污染 通過(guò)這個(gè)事例可以看出 實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力 對(duì)照的設(shè)置是必不可少的 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù) 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) DAT